用分光光度计测提出的DNA浓度怎么出了负值
首先，分光光度计测量的样品必须是均一的，摇匀后再测量结果会准确些。它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。
核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。
事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等:在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素:由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高(超过光度计的测试范围)。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值;混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。
首先,分光光度计测量的样品必须是均一的,摇匀后再测量结果会准确些.它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器.
核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能.可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA.核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm.每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同.定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数.如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig.测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度.测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液.然而,实验并非一帆风顺.读数不稳定可能是实验者最头痛的问题.灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大.
事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度.如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）.这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的.另外,还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等：在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液,如TE,可大大稳定读数.样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品.这些小颗粒的存在干扰测试效果.为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A.在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定.从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高（超过光度计的测试范围）.最后是操作因素,如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值；混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项.
除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm.纯净的样品,比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）.如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响.A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0.A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子.纯样品,A320一般是0.
用分光光度计测提出的DNA浓度怎么出了负值
这个情况确实时有发生,浓度太低的时候就可能有负值,厂家没有直接解释,一般就是让你开机后等半小时以上,机器热平衡后再测,样品也最好平衡到室温再测,温度的变化也会有影响.或者是检查空白对照是否有问题,比如换换比色皿什么的.
用分光光度计测提出的DNA浓度怎么出了负值?为什么呢?
这个情况确实时有发生，浓度太低的时候就可能有负值，厂家没有直接解释，一般就是让你开机后等半小时以上，机器热平衡后再测，样品也最好平衡到室温再测，温度的变化也会有影响。或者是检查空白对照是否有问题，比如换换比色皿什么的。
如何用紫外分光光度计,测量水中二甲苯的浓度(步骤)?
分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。 而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为:(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm(按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>)的红外光...
如何用721分光光度计测SMP溶液的浊点盐度
《钻井液用磺甲基酚醛树脂(SMP)浊点盐度测试方法的改进》http:\/\/d.wanfangdata.com.cn\/Periodical_hgbzjlzl200708006.aspx 第二是关于如何使用721分光光度计，相信你或你单位有了721分光光度计之后肯定是有说明书的。说明书肯定比我说的更加清楚。我这里也是给出使用方法：http:\/\/wenku.baidu.com\/view...
分光光度计可以测量玻璃的透光率吗?
先不放样品清零，再把样品做成比色皿侧壁大小放入吸收池中，调到透光率，进行测量就行了，不过不一定准确，一般只用做测量液体物质
如何选购色度计与分光光度计
色彩测量原理 根据结构的不同，色度测量仪可分为两类：一类是色度计，一类是分光光度计。1.色度计色度计是利用红、绿、蓝三滤色片分解颜色样品的反射光，再经传感器接收转换为颜色色度值的测色仪器。为了模仿人眼的视觉感受，以便提供符合标准的测量值，必须采用标准光源照明被测量样本。传感器的光谱灵敏度...
关于分光光度计测待测液的一些问题
呵呵，简单。。不用分离的，参比溶液（调零）定为有机溶剂，待测溶液就是你的浸渍液。。把波长调到待测物质的最大吸收波长，就可以测了。。
721紫外分光光度计能测出酒中的甲醇含量吗,如何测啊!
721紫外分光光度计能测出酒中的甲醇含量吗,如何测啊!1个回答 #热议# 已婚女性就应该承担家里大部分家务吗?匿名用户 2011-04-16 展开全部 几种甲醇含量测定方法的比较摘要:白酒中甲醇含量的测定方法包括比色法、气相色谱法、高效液相色谱法、蒸馏法等。采用气相色谱法和比色法,对不同酒精度和不同甲醇含量的样品...
葡萄酒的颜色跟什么因素有关?提出你的猜想并设计实验方案。十万火急...
因此如果要生产在2-3年消费,颜色深、果香浓、酒体柔和、单宁含量较多的葡萄酒就应该缩短浸渍时间,一般也就在酒精发酵启动后5-6天,比重在10-15天左右分离,最好的办法是用肉眼观察、比较,并用分光光度计测定其在520mm处吸光值,当酒中色素达到最高值时分离,发酵温度控制在25-27℃为宜。相反,为了获得需长期陈酿...
南海北部陆坡5万年来沉积磷积累及其对大气CO2变化的指示意义
冷却后,用去离子水定容至250mL,然后用分光光度计测定总磷,最低检出限为0.01mg\/L。 磷的不同结合形态按Weng等(1994)提出的方法测定。用重复样品和标准样品CR-MMESS-1检测分析误差小于5%。 碳酸钙含量分析,称取样品0.25g,用10%的醋酸溶液15mL溶解碳酸钙,100℃水中加热30分钟,定容至250mL,离心过滤,然后用原子...
紫垂青可： 这个情况确实时有发生,浓度太低的时候就可能有负值,厂家没有直接解释,一般就是让你开机后等半小时以上,机器热平衡后再测,样品也最好平衡到室温再测,温度的变化也会有影响.或者是检查空白对照是否有问题,比如换换比色皿什么的.
山亭区19447456475： 如何用紫外分光光度计测定鲑鱼精DNA的浓度? - ？
紫垂青可： 首先,分光光度计测量的样品必须是均一的,摇匀后再测量结果会准确些.它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器. 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能.可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA....
山亭区19447456475： 怎样用紫外分光光度计测DNA质量和浓度? - ？
紫垂青可： 一般用微量分光光度计比较快速简便,DNA浓度会直接在软件上显示,A260 / A280的比值用于评估样品的纯度, 纯净的样品比值大于1.8,低于2.0.较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0.
山亭区19447456475： 测定DNA含量可以用什么方法? - ？
紫垂青可： 外分光光度计 OD260/280比值,如果浓度够大的话可以适当稀释,是OD260在0.1到1之间最好. OD260值为1时,双链DNA一般为50ng/ul.单链DNA一般为40ng/ul,需要具体测的话还是用荧光定量DNA检测试剂盒,用多功能酶标仪检测. 还有一种就是跑电泳,根据已知浓度条带的亮度对比你提的DNA亮度,这个需要分析软件,肉眼是无法正确比较的.
山亭区19447456475： DNA含量的测定方法 - ？
紫垂青可： 那要看你用什么方法测定DNA和RNA: (1)紫外吸收法也就是测量OD(260)和OD(280)的吸收值,这样的方法其它的杂质对测量结果影响大一点,因为其它杂质在这两个吸收波长也有吸收. (2)荧光法,用PicoGreen荧光染料,测定DNA,RNA浓度比较灵敏,并且适合测量低浓度和微量DNA和RNA,并且受其它杂质的影响不大,缺点要有专门的荧光检测仪器,试剂比较昂贵. 纯化DNA可以买试剂盒,主要有膜吸附法,磁珠分离法,都很方便.
山亭区19447456475： 如何使用简单的实验方法检测DNA纯度? - ？
紫垂青可：[答案] 用紫外分光检测就很简单啊 将待测DNA溶液作适当稀释,选用光程为0.5cm的石英比色杯,在紫外分光光度计上测定OD260和OD280的值,按以下公式计算DNA浓度. DNA浓度(ng /µL)=OD260*50*稀释倍数 当OD260/OD280当OD260/OD280> ...
山亭区19447456475： 如何根据230nm289nm260nm的吸光度判断已提取纯化的DNA的浓度和纯度 - ？
紫垂青可： 紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的: 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理,掌握测定方法.原理: 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,...
山亭区19447456475： 如何判断提取的DNA是高纯度的双链DNA - ？
紫垂青可： 首先:可以通过分光光度计A 260 / A 280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是 280 nm.纯净的样品,比值大于 1.8(DNA)或者2.0(RNA).如果比值低于 1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响.A 230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0.A 320检测溶液的混浊度和其他干扰因子.纯样品,A 320 一般是 0. 若要判断完整性--可以先做琼脂糖凝胶电泳,再做限制酶切(要求更高)
山亭区19447456475： 试述两种测定DNA 浓度的方法? - ？
紫垂青可： 你好!分光光度计测,pcr跑电泳测 仅代表个人观点,不喜勿喷,谢谢.
