植物组织蛋白质提取用什么方法？
植物组织蛋白质提取方法
1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入）,准备提取液放在冰上.
2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）.
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清夜,样品制备完成.蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
植物蛋白质的提取方法基本上有这几种：盐析法、有机溶剂法和等电点法。
1、盐析法
原理：盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
2、有机溶剂法
原理：机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因是加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低，因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力，促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一种解释认为与盐析相似，有机溶剂与蛋白质争夺水化水，致使蛋白质脱除水化膜，而易于聚集形成沉淀 。
3、等电点法
原理：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。
等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。
1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml
1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
2、甘油（Glycerol）75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！
二、植物组织蛋白质提取方法
氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！
三、组织：肠黏膜
目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达
应用TRIPURE提取蛋白质步骤：
含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）
倒转混匀，置室温10min
离心：12000 g，10min，4度，弃上清
加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）
振荡，置室温20min
离心： 7500g，5 min，4度，弃上清
重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次
沉淀中加入100％乙醇 2ml
充分振荡混匀，置室温20 min
离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀
1％SDS溶解沉淀
离心：10000g，10min，4度
取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）
存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。
四、植物材料：水稻苗，叶鞘，根
1、200毫克样品置于冰上磨碎
2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清
3、重复离心5min
lysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40
五、蛋白质样品制备
秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等（1986）的方法进行。
100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇），混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，（有必要再用80％丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。
按每mg干粉加入20μl（可调） UKS液[9.5 M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH3.5-10)，6% Triton X-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度 （温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min离心15 min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。或者-70度保存
六、植物根中蛋白质的抽取
(1) sample, 液氮研磨
(2) 装1.5 ml centrifuge 用tube
(3) 加 1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul
(4) 12000 rpm, 4度, 10-15minite
(5) 取上层液，蛋白质就在里面
植物组织蛋白质提取方法
1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！
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分解的 棒法
实验室
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蛋白质提取方法比较
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实验原理：DNA是一切生物细胞的重要组成成分，BIOG主要存在于细胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞；苯酚和氯仿可使蛋白质变性，用其混合液（酚：氯仿：异戊醇）重复抽提，使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质；RNase降解RNA，从而得到纯净的DNA分子。
漕服双黄： 植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上. 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时). 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜,样品制备完成.蛋白质提取液:300ml1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
鄂州市19654806915： 目前常用的植物蛋白提取方法有哪些? - ？
漕服双黄： 您好. 一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上.2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时).3、用离心机离心8000...
鄂州市19654806915： 目前常用的植物蛋白提取方法有哪些? - ？
漕服双黄：[答案] 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上.2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时).3、用离心机离心8000r...
鄂州市19654806915： 植物组织蛋白质用什么方法提取? - ？
漕服双黄： 植物组织蛋白质提取方法 三氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清. 3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用. 详细的提取方法生物帮上面有详细的介绍, http://product.bio1000.com/114819/ 蛋白微量检测试剂批发,蛋白微量检测试剂价格.
鄂州市19654806915： 如何提取细胞膜(植物细胞)上的蛋白质 - ？
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鄂州市19654806915： 植物细胞膜的提取方法 - ？
漕服双黄： 植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上. 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时). 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜,样品制备完成. 蛋白质提取液:300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油(Glycerol)75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g 这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
鄂州市19654806915： 一种植物的根茎叶都含有大量蛋白质,求问一般怎样提取植物中的蛋白质? - ？
漕服双黄：[答案] 植物蛋白质提取方法总汇一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上.2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰...
鄂州市19654806915： 制备植物细胞的细胞膜采用什么方法? - ？
漕服双黄： 我们知道:理想的制备细胞膜的材料是哺乳动物成熟的血红细胞.科学家在制备较纯净的细胞膜时,一般不选用植物细胞,其原因是:植物细胞有细胞壁,提取细胞膜的过程比较繁琐;植物细胞内有其他生物膜结构.那我们要想制备植物细胞的细胞膜,还得从植物细胞的结构出发.主体思想如下:先用纤维素酶和果胶酶处理,使植物细胞壁水解,得到原生质体.再用清水处理原生质体,使其吸水胀破.最后用离心机离心处理,静置分层,即可分离出植物的生物膜了,当然,我们想要的细胞膜就在里面,用显微镜去找吧!
鄂州市19654806915： 豆粕中的蛋白质怎么提取提取 - ？
漕服双黄： 植物组织蛋白质提取方法(summer)1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上.2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时).3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜,样品制备完成.蛋白质提取液:300ml1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g 这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
鄂州市19654806915： 寻求最好的提取植物蛋白质的材料 - ？
漕服双黄： 豆类植物种子取材方便而且富含蛋白质,应该比较理想.另外小麦胚芽等都比较容易提取蛋白,提取及鉴定方法如下:提取:将材料磨碎成粉末状,溶于10倍体积水中,调节PH值10,45摄氏度水浴1小时,离心,取上清液,加酸沉降,调节PH到4.5离心,去上清液,沉淀物即蛋白质,再冷冻干燥即得粉末状蛋白质.鉴定方法可以用凯氏定氮法可以定性定量,如果只是定性,可以用蛋白质颜色反应试验,很快得到结果.比如水合印三酮反应.希望对你有用.
