MPN法测微生物数量

测定微生物的生物量有哪些主要方法~

测定微生物的生物量有哪些主要方法
测定的方法主要有四种：

1.直接计数测定：根据微生物种类，有血球计数板和细菌计数板；

2.比浊法：根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比，可以用分光光度计测OD值，用OD值表示样品菌液浓度；

3.核酸计数法：荧光定量PCR技术；

4.活菌计数法：MPN和平板计数法由于测定方法的限制。新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（KEC），从而计算土壤微生物生物量碳。

1、两者含义不同
菌落形成单位（cfu）指单位体积中的细菌、霉菌、酵母等微生物的群落总数；而MPN指最大或然数，计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
2、两者计算方式不同
CFU法为将样品用无菌生理盐水进行系列稀释，以涂布法接种于平板，或以混碟法进行操作，经过一定时间的培养之后，直接统计平板上的大肠菌群菌落。该方法测定的是样品中所含的现时可培养的活的微生物数量，所以称之为活菌计数法。
MPN法是一种常见的间接计数法，但其存在一定的局限性。目前，以Petrifilm纸片法、VRB(Violet Red Bile）平板法等直接计数法正越来越得到广泛使用。

3、两者测量准确度不同
CFU是用来计算大肠菌群细菌的个数的表达方法，是经过培养很直观地计数出来的，是一个实际样品中的确切数字，这个数字肯定有误差。
MPN是指即最大可能数，说明该数值是在95%的可信限范围内是最有可能的，取决于检测完大肠菌群后查表所得的结果。也就是说一个是经验数值（95%的可信范围），一个是实测数值（确切数字，虽然肯定有误差）。
参考资料来源：百度百科-MPn
参考资料来源：百度百科-CFU

1915年，McCrady首次发表了用MPN法 (最大可能数法) 来估算细菌浓度的方法， 这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法 [1]。目前，我国仍普遍将MPN法用于大肠菌群，大肠杆菌等的检测。因此了解MPN法的原理及局限性，对实验室的微生物检测及食品工业的微生物控制都有着重要的指导作用 。

1. MPN法的原理

因为细菌在样本内的分布是随机的，所以检测细菌时，可按概率理论计算菌数。如果每份接种样的细菌数平均值为Vl，每个接种管中进入k (k＝0、1、2……)个菌的概率Pn接近于泊松分布。

(1)

式中 V— 样本体积；
l — 样品中的细菌浓度，cfu/ml(g)；
当接种管全部为阴性时，即k = 0，则 Pn =
当取t组稀释度， 每组管数为ni (i = 1, 2, 3, ….) 时，细菌存在的概率为：

(2)

式中 pi — 第i组稀释度中的阳性管数。

例：当取3个稀释度，每组管数为3管时，细菌存在的概率为：

(3)

由(2)式求 ，并令 =0
此条件下求得的l值即为最大可能数(MPN)，对应的P为最大概率。

例：当取3个稀释度，每组管数为3管时，稀释度1 ml(g)，0.1 ml(g)，0.01ml(g)时，阳性
管数分别为2-0-0时，代入(3)式得：
(4)
P对l作图可得：

由(4)式求 ，并令 =0
得l ＝ 90 cfu/100 ml(g)，即MPN值为90 MPN/100 ml(g)；Pmax = 31.9 %；其95%的可置信区间为10~360 cfu/100 ml(g)。
具体含义：当阳性管数为2-0-0时，菌落浓度为90 cfu/100 ml(g)的可能性最大，其概率(P值)为31.9%；当置信度为95 %时，对应的菌落浓度区间为10~360 cfu/100 ml(g)。
3个连续稀释度，每组3个管，不同阳性管数组合对应的MPN值，最大概率值，95%可信区间见附录1。由附录1可见，部分阳性管数并没有列出对应的95%可信区间，是因为这些阳性管数对应的Pmax较小，95%可信区间范围过大，已失去了实际意义[2]。

2.2 MPN法的局限性
相同MPN值，但含义不同

阳性管数 MPN Pmax(%) 95%置信区间
1 ml(g)×3 0.1ml(g)×3 0.01 ml(g)×3 100 ml(g) 下限 上限
0 0 3 90 0.00000 － －
0 1 2 90 0.00035 － －
0 3 0 90 0.00417 － －
2 0 0 90 31.91613 10 360

例如，MPN值为90时，有四种不同情况的阳性管数。阳性管数为“0-0-0”“0-1-2”对应的最大概率(Pmax)极小，此时的MPN值 90 MPN/100 ml(g)无意义，所以在《FDA细菌学手册》中，已删除了这两种情况。阳性管数为“0-3-0” 对应的最大概率(Pmax)为0.00417%，而国标中并没有列出相应的95%置信区间，是考虑到该置信区间过广，已没有很大的指导意义。而阳性管数为“2-0-0”的最大概率(Pmax) 为31.91613%，表明实际的菌落数在10~360 cfu/100 ml(g)之间。
所以，测定MPN值时，要考虑阳性管数。相同的MPN值，代表的实际菌落数范围却有很大的差别。假如你的产品标准为100 MPN/100 g，实测值为90 MPN/100 g (阳性管数“0-3-0”)，那么很难判定你的产品是否合格。
MPN值非连续
在附录1的MPN表中，可见MPN值是不连续的。例如我国某些产品的大肠菌群标准为100 MPN/100 ml(g)或 450 MPN/100 ml(g)，但在MPN表中却没有相应的阳性管数。
MPN值的准确度随Pmax的减小而减小
在附录1的MPN表中，可见不同MPN值对应的Pmax值不同，且随着Pmax值的减小，MPN值的准确度也明显下降，所以在《FDA细菌学手册》中已删除了极低Pmax值(<0.004%)的情况，因为这些Pmax值对应的MPN值没有实际的指导意义[2]。
MPN法检测的隐性成本
MPN法是一种采用数学理论推算，用置信区间描述菌落浓度的一种间接计数法。虽然实验结果以MPN值表示，但MPN值并不能表示实际菌落数，而实际菌落数落在置信区间内的任何一点。
假如你产品的大肠菌群标准为30 MPN/100 g，而当你某个样品的检测结果为90 MPN/100 g，那么你可能会认为你的产品不合格。但是，让我们看一下90 MPN/100 g的置信区间，为10 ~ 360 cfu/100g，也就是说有部分结果为90 MPN/100 g的产品，且实际菌落数在10~30 cfu/100g之间，会被当作不合格产品处理。
另外，30 MPN/100 g的置信区间为<5~90 cfu/100 g (阳性管数0-0-1)或<5~130 cfu/100 g (阳性管数0-1-0)。也就是说部分实际菌落数为30~130 cfu/100g的产品，会被当作合格产品，从而微生物风险增加。

3. 直接计数法
MPN法是一种常见的间接计数法，但其存在一定的局限性。目前，以Petrifilm纸片法[3]、VRB(Violet Red Bile)平板法等直接计数法正越来越得到人们的广泛使用。
MPN法:适用于检测带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的含少量金黄色葡萄球菌的食品.

CFU(Colony Forming Units):1ml水样在营养琼脂培养基中,于37°C培养24h后所生长出来的细菌菌落总数. 指示被检水源水受有机物污染的程度，无菌要求高，时间长
两者都是检测的活菌数，但是CFU通过数据直接求数学期望，平均值和方差 MPN是通过极大似然估计，求出分布函数中的参数，置信区间，再估计

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紫金县15820153995： MPN法测微生物数量？
仲孙态扎冲： 1915年,McCrady首次发表了用MPN法 (最大可能数法) 来估算细菌浓度的方法, 这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法 [1].目前,我国仍普遍将MPN法用于大肠菌群,大肠杆菌等的检测.因此了解MPN法的原理及局限性,对实验室...

紫金县15820153995： 大肠杆菌试验MPN法的特点 - ？
仲孙态扎冲：[答案] MPN计数又称稀释培养计数,适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势,但却具有特殊生理功能的类群.其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰, 并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在...

紫金县15820153995： 我们有什么办法测量微生物生物量 - ？
仲孙态扎冲：[答案] 1.直接计数测定 根据微生物种类,有血球计数板和细菌计数板;或者用电子计数器计数 2.比浊法 根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比,可以用分光光度计测OD值,用OD值表示样品菌液浓度 3.核酸计数法 荧光定量PCR技术 4.活菌计数法 ...

紫金县15820153995： MPN是什么? - ？
仲孙态扎冲： 最大或然数(most probable number,MPN)计数又称稀释培养计数,适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势,但却具有特殊生理功能的类群.其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰,并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度.本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群(如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等.见附表23-1)的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群(如大肠菌群)的数量,缺点是只适于进行特殊生理类群的测定,结果也较粗放,只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用.

紫金县15820153995： 测定微生物生长量的方法有几种 - ？
仲孙态扎冲： v常用测定微生物生长的方法有:1)称干重法.可用离心法或过滤法测定.优点:可适用于一切微生物,缺点:无法区别死菌和活菌.2)比浊法.原理:由于微生物在液体培养时,原生质的增加导致混浊度的增加,可用分光光度计测定.优点...

紫金县15820153995： 测定细胞的生物量有哪些方法 - ？
仲孙态扎冲： 圣才学习网为您解答: 1.直接计数测定 根据微生物种类,有血球计数板和细菌计数板;或者用电子计数器计数 2.比浊法 根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比,可以用分光光度计测OD值,用OD值表示样品菌液浓度 3.核酸计数法 荧光定量PCR技术 4.活菌计数法 MPN和平板计数法 由于测定方法的限制,前几种计数结果不太准确,目前应用广泛的是第四种 对粪大肠菌群和光合细菌可用MPN,对其他微生物可用平板计数法

紫金县15820153995： 请教:MPN计数法测大肠菌群怎样检索MPN表 - ？
仲孙态扎冲： 首先通过培养和证实试验,获得相邻的三个稀释度有多少个阳性培养管,然后将这一个数值组合去查询MPN表,就可以获得MPN数值. 例如,相邻的三个稀释度的阳性管数分别是3、1、0 那么就在MPN表上寻找310组合所对应的MPN数值,即可.

紫金县15820153995： 菌落数中cfu/cm2,cfu是什么意思?MPN/cm2中MPN是什么意思? - ？
仲孙态扎冲： cfu 代表“colony forming units”.cfu/cm2指的是每平方厘米样品中含有的细菌群落总数.MPN 为最大可能数(Most Probable Number)的简称.这种方法,对样品进行连续系列进行稀释,加入培养基进行培养,从规定的反应呈阳性管数的出现率,用概率论来推算样品中菌数最近似的数值.

紫金县15820153995： 大肠菌群MPN法与平板计数法结果能换算吗?怎么换算 - ？
仲孙态扎冲：[答案] 不能换算,因为MPN法算出来的是活细菌的数量,而平板计数法是死的活的一起计数,平板计数法的结果一般比MPN法大.

紫金县15820153995： 大肠杆菌试验MPN法的特点 - ？
仲孙态扎冲： 最大的特点就是,得出的结果表示为MPN,最可能数.