带gfp标签的蛋白能不能用来做ip

如何使用gfp标记一个细胞内的蛋白~

如何使用gfp标记一个细胞内的蛋白
（1）从图示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位点；N端伸出的核苷酸的碱基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位点；则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和Ti质粒，再用DNA连接酶把目的基因和运载体相连．
（2）PstI可将重组质粒的N端切开，而BamHⅠ能在重组质粒的黑色部分切开，这样就得到2种DNA．
（3）根据题意，将绿色荧光蛋白基因转移到猪体中，所以GFP是目的基因．
（4）由图可知，⑤⑥⑦过程为核移植过程，⑨过程将早期胚胎移入母猪体内，属于胚胎移植．
（5）根据题意，为避免免疫排斥反应，所以导入的调节因子能抑制抗原基因的表达，导入的调节因子属于目的基因．

你CO-IP的目的不是要目的蛋白么
GFP这种外源的一半不会和体内的蛋白相互作用
但是即使作用了 你要的目的蛋白肯定会下来
管它其他的蛋白下不下来呢

EGP绿荧光蛋白(GreenFluorescentPortein，GFP)它的27kDa的单体由238个氨基酸构成，本身就是一个生物发光系统，附带有激发后能发射生物荧光的发光色基，其发光过程不同于其它生物发光组织，是不需荧光素酶参与的。光激发GFP荧光是一个特异性的独立过程，并不需要任何的协同因子、底物或其它来自于水母的基因表达产物。当能量由Ca2+-激活光蛋白(Aequorin)传给GFP时引发荧光(Wardetal。，1980)。野生型GFP(wtGFP)的克隆及其在异源系统中等表达使其成为一种新的遗传标记系统(prasheretal.,1992;Inouye&Tsuji,1994a;Wang&Hazelrigg，1994)。当GFP在原核或真核细胞中表达并受到蓝光或紫外光辐照时就可发出亮绿色荧光。GFP色基GFP色基是由丝氨酸酪氨酸甘氨酸(SerTyrGly)形成的环化三肽所构成，并且只有色基包被在完整的GFP蛋白中才能发出荧光(Codyetal.,1993)，被切断的GFP(即使是C末端的少数几个氨基酸)亦能导致GFP失去发光能力。GFP和GFPS65T的晶体结构研究表明色基紧密地包被在由α折叠围成的β盒中(Ormetal.,1996;Yangetal.,1996)。这一结构提供了色基发射荧光的微环境，该环境排除了基质及氧对色基发光的影响。只具备一级结构GFP是不能发光的，功能性色基的形成是在转录翻译后，并经历一个环化反应和一个需分子氧的氧化步骤。色基高级结构的形成可能是荧光蛋白形成的限速步骤，特别是分子氧受到限制时(Heimetal.,1994;Davisetal.,1995)。wtGFP吸收紫外和蓝光，其吸收峰为λmax＝395nm和λmin＝470nm，发射峰为λ＝509nm。EGFP是GFP突变系(1)RedShifted(红偏移)GFP突变系(EGFP&GFPS65T)色基发生了氨基酸取代，λmax(Excitation)偏移至490nm附近。红偏移突变系的最大激发峰都落在常用滤色片的波长范围内，所以获得的荧光信号要比wtGFP明亮得多。同样，FACS和共焦显微镜的氩离子光源的发射波长为488nm，对RedShifted突变系的激发效率也明显高于wtGFP。EGFP发生了双氨基酸取代，Leu(亮氨酸)取代Phe64(苯丙氨酸)，Thr(苏氨酸)取代Ser65(丝氨酸)(Cormacketal.,1996)。基于等量溶解蛋白的光谱分析，由于Em(消光系数)的增加和色基构型的高效率，EGFP在488nm处激发后灯荧光强度为wtGFP的35倍(Cormacketal.,1996;Yangetal.,1996)。在相同条件下(489nm)测得EGFP得Em为53，000cm-1M-1，而wtGFP为9，500CM-1M-1，GFPS65T为55，000cm-1M-1(Pattersonetal.,1997)。EGFP的色基构型在37℃比wtGFP或GFPS65T发光效率更高，在这一温度下表达的EGFP可溶性蛋白95%为有效色基(Pattersonetal.,1997)。GFPS65T为Thr取代Ser65的突变体(Heimetal.,1995)，同样条件下，它的荧光强度强于wtGFP4～6倍，并且其唯一的Redshifted激发峰位于490nm，但37℃时色基形成的效率不如EGFP。你可以两个都试试，应该都没有问题的上边的我也是看了这个网址后给你发的，我感觉挺好的，还有不明白的，你自己看看吧，那里还有很多东西我没给你拷过来.cn/periodical/periodical.articles/jgswxb/jgsw99/jgsw9903/990315.htm

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麟游县17547567131： 关于IP实验时是否能用GFP来拉目的蛋白 - ？
大叔君阿利： 你CO-IP的目的不是要目的蛋白么 GFP这种外源的一半不会和体内的蛋白相互作用 但是即使作用了 你要的目的蛋白肯定会下来 管它其他的蛋白下不下来呢

麟游县17547567131： 在免疫共沉淀过程中的问题~加蛋白标签我用加了GFP或者Myc标签的表达质粒表达蛋白,然后做CO - IP!用抗GFP抗体将复合物拉下来可以不?GFP会不会和... - ？
大叔君阿利：[答案] 你CO-IP的目的不是要目的蛋白么 GFP这种外源的一半不会和体内的蛋白相互作用 但是即使作用了 你要的目的蛋白肯定会下来 管它其他的蛋白下不下来呢

麟游县17547567131： 通信方面的GFP??? - ？
大叔君阿利： 介于您将该问题分类至生物学下面,那俺只能这么理解了:GFP(绿色荧光蛋白)一般是作为报告基因,用荧光显微镜检测后知道基因或载体的活性.不用作通信方面.但是近几年来,合成生物学的发展,可以实现GFP用在通信方面的功能,使两个不同的菌种用GFP进行交流,不过这只是功能模块搭建,没有产生用于通信方面的新的GFP蛋白

麟游县17547567131： co - ip实验ip的蛋白都很少怎么办 - ？
大叔君阿利： IP是在已知一种蛋白质的抗体情况下,直接用这种抗体将目标蛋白质提取出来,是一种提纯蛋白质的方法. Co-IP主要用于检测蛋白质与蛋白质之间连接作用,如你想检测蛋白质A与蛋白质B之间是否有相互作用,你手中又有蛋白质A的特异抗体,就将蛋白质A和抗体加入到含有蛋白质B的细胞解液中去,利用抗体提纯,如果蛋白质A,B之间有相互作用,则最后提纯产物是抗体——蛋白质A——蛋白质B.由于最后终产物是多种蛋白质复合物,所以这种技术叫做co-immunoprecipitation,和IP的用途区别还是很大的.

麟游县17547567131： 基因功能分析的方法 - ？
大叔君阿利： 基因功能的研究思路主要包括: 1.基因的亚细胞定位和时空(发育期或梯度药物处理浓度, 不同组织/器官)表达谱; 2.基因在转录水平的调控(可以通过genome walking PCR或通过已有的资源库寻找该基因的启动子等转录调控区域, 通过单...

麟游县17547567131： 有标签的珠子用什么做对照 免疫沉淀 - ？
大叔君阿利： 就是对照的一种,将需要进行免疫沉淀的样品,在加入抗体和树脂之前,先按比例取出一部分来,保存好,等到免疫沉淀完成后,上样检测前,再把input拿出来,换到同样的buffer里,一起进行后续的检测和操作.一般情况下,像ChIP这种类型的实验用的比较多.

麟游县17547567131： 绿色荧光蛋白(GFP)是一个相对分子质量较小的蛋白,最初是在水母中发现的,它可用于标记蛋白.以下关于G - ？
大叔君阿利： A蛋白质是氨基酸通过缩合反应形体的高分子化合物,故A错误; B.福尔马林(甲醛的水溶液)能使蛋白质变性,故B正确; C.蛋白质含有氨基和羧基具有两性,既能和酸反应又能和碱反应,故C错误; D.蛋白质是多肽化合物,可以水解,蛋白质水解产物是氨基酸,故D错误; 故选B.

麟游县17547567131： 做带荧光标记啊瞬时转染的话,除了在荧光显微镜下看转染效率外,还需要做PCR 和Western验证基因表达吗? - ？
大叔君阿利： 什么荧光?GFP还是什么. 如果是GFP就不用了,因为是融合蛋白,只要有荧光就说明你的蛋白也表达了. 还要看你的目的是什么,蛋白的细胞定位就不用做WB. 表达载体就必须做.

麟游县17547567131： 为什么基因工程的运载体必须有标记基因比 - ？
大叔君阿利： 基因工程的最终目的是要在植物或动物体内表达该带白的,而不仅仅是只在大肠杆菌里进行表达.固然在大肠杆菌里标记基因是没有作用,但一旦把该基因转化进入了植物或动物,你就会发现检测起来非常困难,而且很难对该基因的表达定位.为了便于观察和检测,我们引入标记基因,比如,我们看某个蛋白的组织表达特异性(比如只在根,或叶,或花中表达),那么如果加入了标记基因如GFP(绿色荧光蛋白,有该基因的位置在紫外下看到是绿色),或者GUS(经组织化学染色后,有标记基因的组织就有蓝色反应),这样你可以很容易检测到你的蛋白是否表达,表达在哪里,表达强度如何.总之,加入标记基因有着特殊的作用,绝不是可有可无的.

麟游县17547567131： 做筛选标记与gfp的基因融合提蛋白筛选标记会不会降解 - ？
大叔君阿利： 会降解,但是只要操作规范降解是完全可以避免的.