简述HAT选择培养液在制备B淋巴细胞杂交瘤中的作用及其机制。
杂交瘤细胞杂交瘤细胞的制备
4. 细胞融合：使用HAT培养基，包括Hypoxanthine、Thymidine和Aminopterin的混合物，以及不同浓度的PEG诱导剂。融合前需准备细胞，骨髓瘤细胞和脾细胞按比例混合，加入诱导剂后进行温和融合。5. 融合后细胞培养：采用两种方法，如滴加PEG或直接混匀，然后在HAT选择性培养液中筛选，每隔2-3天更换培养液，观察...
遇到杂交瘤细胞克隆、融合、生长中的污染、批间差、效率低等问题,怎么...
4．加入 10ml 完全培养液。5．800 转\/分离心 5 分钟。6． 2 倍 HAT 培养液培养悬浮细胞， 24 孔板， 用 取 每孔中加 0.5ml， 96 孔板每孔中加 0.1ml。 另 7．5%CO2 温箱，37℃，一周后第一次更换培养液，培养板中预先接种有饲养细胞，加 2× HAT 选择培养液与原等量培养液混合后...
1975年Kohler和Milstein的单克隆抗体技术在生产和使用抗体方面开创了...
筛选出杂交瘤细胞，再进行培养．（2）图中细胞A为经过免疫的B淋巴细胞，该细胞不具有分裂能力，但能分泌特异性抗体．细胞B为骨髓瘤细胞，该细胞能够无限增殖．（3）动物细胞融合常用的方法有物理法（离心、震动、电刺激）、化学法（PEG）、生物法（灭活的病毒）．（4）HAT培养基是选择培养基．由于细胞...
为什么用HAT换成HT培养基
换成HT：刚融合筛选出来的细胞还是很脆弱，所以要H,T作为原料——使杂交瘤细胞能够生长起来~~~也可以用HAT，不过此时A已不重要，没有必要继续添加
不能在hat培养基中长期存活的细胞有哪些?
骨髓瘤细胞和淋巴细胞。1、骨髓瘤细胞：骨髓瘤细胞是经过8AG和BUdR诱导和选择而产生的细胞，细胞无TK和HGPRT来进行DNA紧急合成，在DNA正常合成途径被阻断的HAT选择性培养基中无法生存。2、淋巴细胞：淋巴细胞在HAT培养液中缺乏在体外培养液中增殖的能力，不能长期生存。
单克隆抗体
3.选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合...
制备单克隆抗体的过程
（一）脾细胞 1．材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb\/c鼠。 (2)1640培养液 单克隆抗体制备流程 (3)2.5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2)将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。 (3)把脾放入5ml含有2...
hat培养基是固体还是液体
是固体。固体hat培养基通常用于分离细菌，因为它可以提供一个固体基质，使得不同的细菌在它上面生长成孤立的菌落。这种固体培养基多数是由明胶、琼脂或者agar等物质构成的。
单克隆抗体的制备问题
此外，同系小鼠脾细胞和胸腺细胞亦可作为饲养细胞。选择性培养 两种亲本细胞经PEG处理后，可形成多种细胞成分的混合体，包括未融合的游离亲本细胞、骨髓瘤细胞间的融合、免疫B细胞间的融合以及骨髓瘤细胞与免疫B细胞间融合的异核细胞，仅后者可形成杂交瘤，应予以筛选出来克隆培养。通常应用HAT培养液，...
单克隆抗体制备过程
接着，进行细胞融合。小鼠经眼球摘除放血法处理后，无菌取出脾脏，与同系骨髓瘤细胞混合，并加入聚乙二醇促进融合。在融合过程中，淋巴细胞与骨髓瘤细胞结合形成杂交瘤细胞，这些细胞具有独特的融合特性。选择性培养是筛选过程，使用HAT培养基筛选出融合的杂交瘤细胞。只有融合的杂交瘤细胞能在HAT中存活，因为...
壬涛喜辽： 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...
三穗县15839914520： 为什么制备单克隆抗体时要用已免疫的B淋巴细胞 为什么用选择培养基选出杂交瘤细胞后还要进行抗体阳性检测 - ？
壬涛喜辽： 抗原上有很多 决定簇 每个决定簇都会刺激产生一种标抗体 所以说即使是有特异性 也会产生多种抗体 而每个浆细胞只会产生一种抗体
三穗县15839914520： 单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义? - ？
壬涛喜辽： 哈哈~我们刚考到这题 原理: B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力.B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的.将这种B细胞与...
三穗县15839914520： 如图为单克隆抗体制备流程示意图.(1)___技术是单克隆抗体技术的基础.(2)细胞融合是随机的过程,在HAT培养基中培养,目的是___.在细胞培养过程... - ？
壬涛喜辽：[答案] (1)动物细胞培养技术是低温细胞工程的基础,是单克隆抗体技术的基础.(2)细胞融合是随机的过程,在HAT培养基中培养,目的是筛选杂交瘤细胞,在细胞培养过程中,培养液中需要添加无机盐,但要注意无机盐的种类和...
三穗县15839914520： 单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞,在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基(HAT)中无法生长;而小鼠B淋巴细胞在HAT... - ？
壬涛喜辽：[选项] A. 骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞 B. B淋巴细胞之间形成的融合细胞 C. 骨髓瘤细胞与B淋巴细胞之间形成的融合细胞 D. B淋巴细胞
三穗县15839914520： 单克隆抗体的制备问题？
壬涛喜辽：已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断.人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径,但一般不分裂增殖,培养后可剔除. 鼠骨髓瘤细胞中没有S途径,加氨基嘌呤阻断D途径后也可除去.只有杂交瘤细胞在加氨基嘌呤阻...
三穗县15839914520： 如图是单克隆抗体制备过程.请据图回答问题 - ？
壬涛喜辽： (一)脾细胞 1.材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠. (2)1640培养液 单克隆抗体制备流程(3)2.5%FCS-1640营养液 2.操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠. (2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件...
三穗县15839914520： 制备单克隆抗体时先在什么条件下进行体外培养 - ？
壬涛喜辽： 制备过程 编辑1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程. 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射. 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细...
三穗县15839914520： 1.生产单克隆抗体时,在培养基中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞,该试剂的作用是 - ？
壬涛喜辽： 1、作用 能选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制.2、原理 在这个单克隆抗体生产过程中,因为普通B淋巴细胞是不能体外生长的,所以必须将其与骨髓瘤细胞杂交才能实现体外生长,在这里骨髓瘤细胞只是相当于一种培养母体,我们并不需要其DNA的复制,而我们要生产的是专一抗性B淋巴细胞抗原,所以这种药剂要具有选择性,既不能影响淋巴细胞的DNA复制,又要抑制骨髓瘤细胞的DNA复制.
