怎样用TRIzol 法提取动物血清总RNA
RNA的提取（仅供参考）
准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)
操作步骤：
1. 匀浆处理:
a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b. 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c. 细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。
7. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
8. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。
9. 室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。
注意事项：
1. 从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。
2. 匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3. 分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。
可以.不过比试剂盒提出来粗糙些,操作相对麻烦些时间长,也需要去DNA污染.里面含有大量毒性物质,尤其是苯环类的,易挥发的苯酚.切忌戴口罩,手套,遮眼睛等.
（仅供参考）
2、研磨液室温放置5min，然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒，静置5min，12,000rpm离心5min。
3、取上层水相于一新的离心管，按每1ml Trizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，剧烈振摇使混匀，4℃，12,000rpm离心10min。
4、弃去上清液，按每1ml Trizol液加入至少1ml的比例加入70%乙醇，涡旋混匀 ，4℃×7,500rpm×5min。
5、重复以上步骤。
6、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10min，加入30μL RNase Free的水中。
7、电泳检测。
（仅供参考）
陆味必诺： 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管...
抚顺县15124974420： trizol法提取血中的RNA,怎样做量会更多？
陆味必诺： 1 血要新鲜.如果是冻存的,在解冻时要完全,之后再加Trizol. 2 可以稍多加一些Trizol,少加些血.混匀之后放置10分钟左右,直接加三氯甲烷,混匀再去离心. 可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷. 3 每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止降解 4 异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时,或再适当延长一点时间.迅速离心,之后加75%乙醇.只洗一遍,洗2遍易损失部分RNA. 5 不要过分干燥,管内稍有点残余的乙醇也没关系.干燥一会就迅速加DEPC水少量.一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水. 6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存. RNA直接冻存会降解.也会影响以后反转的效率.
抚顺县15124974420： 动物组织如何提取总RNA? - ？
陆味必诺：[答案] Trizol法 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%. 2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管...
抚顺县15124974420： Trizol法提取流感病毒 RNA - ？
陆味必诺： 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照加入1.5ml灭菌eppendorf管;2、加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀;3、13000rpm离心15min;4、在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul于-20℃...
抚顺县15124974420： 动物RNA的提取 - ？
陆味必诺： RNA的提取 一、准备试剂: 氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制). 二、操作步骤: 1. 匀浆处理: a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理....
抚顺县15124974420： 禽流感病毒怎么提取 - ？
陆味必诺： 远离流感病毒我们应从预防开始,给室内环境做杀菌消毒处理,采用气触媒杀菌安全快速彻底有效,气触媒的消毒技术被广州南方医院用于院内病房及传染区消毒以及广州体育东路幼儿园用来给教室去味消毒,预防手足口病的发生.气触媒不仅可以杀灭有害病菌还可以除味,使用它可以同时减少呼吸道疾病的侵害!
抚顺县15124974420： 急……提取RNA的动物组织怎么采集? - ？
陆味必诺： Trizol法1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖...
抚顺县15124974420： 请教最简单的动物血血清提取方法,听老师说,将动物血放进冰箱冷冻,再让其自然融化,表面一层就是血清?请详细回答.不用离心机分离的好办法? - ？
陆味必诺：[答案] 不对,最简单最快的方法:取一洁净的试管或一支一次性注射器,将从动物静脉上采血3到5毫升置于试管或直接将一次性注射器抽出去一些留点空间,静置于室温或稍热一些的环境下让其自然凝固很快就会有清亮透明漂亮的血清析出.用吸管轻轻地...
抚顺县15124974420： TRIzol法提取流感病毒RNA每个步骤详细注意事项? - ？
陆味必诺： 三、Trizol法提取法(这是提禽流感病毒的步骤,供参考) Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克.1、取鸡胚尿囊液,加入5-10倍体积Trizol液,混匀;2、室温放置5分钟,然后以每1ml Trizol液加...
抚顺县15124974420： Trizol法提取RNA操作步骤? ？
陆味必诺： 动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克.用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染.RNA可...
