pcr产物的t-vector克隆方法，应注意哪些操作环节
播种是育苗成败的关键，播种质量的好坏直接影响出苗率和出苗整齐度，生产上应引起充分的重视。
（1）床土准备工作
传统育苗在播种前首先准备好播种床土，播种床土可按照40%～50%腐熟马粪，50%～60%园田土配制而成。床土配制之前应过筛，配制好的床土平铺在畦面上或装在育苗平盘里。
（2）浇足底水
畦面水层深度以3～4厘米为宜，当水全部渗下后，可检查浇水量，水分润透7～10厘米土壤为适宜的水分含量，然后在畦面上撒上一层底土约0.3～0.7厘米厚，底土应提前过筛。为了防止猝倒病的发生，可以撒一层药土，药土的配制方法是每平方米4克五氯硝基苯，4克代森锌加15千克床土混合，播前撒1/3，留2/3播种后覆盖。
（3）播种
小粒种子采用撒播法，大粒种子采用点播法。撒播时应注意一定要撒均匀，防止扎堆子，点播种子时应将种子平放在畦面上。
（4）盖土
播种后应及时盖土，盖土要均匀，一般盖土0.5～1厘米厚，盖土过厚会延迟出苗，甚至会闷死在土中。盖土过薄，种子极易戴帽出土。如果盖药土，应先盖药土，再撒床土到一定的厚度。
利用t载体对pcr产物进行克隆的原因如下：
T载体又叫T质粒载体,是指T4噬菌体DNA连接酶,作用是在有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接.
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。
DNA水解酶相当于剪刀,剪断DNA,而T载体（DNA连接酶）就相当于针线.如果克隆时不用,就不能将DNA连接起来.
DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。
利用t载体对pcr产物进行克隆实验过程：
器材
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面离心管架，台式离心机，干式恒温气浴。
试剂
T 载体，T4 DNA 连接酶，连接酶缓冲液，无菌dd Water
操作步骤
PCR产物与T载体直接连接：
（1） 事先将干式恒温仪（或冰盒里的水）温度设定在14~16°C。
（2） 取4个灭菌的200ul微量离心管，加入：（需要调整）
4ul 目的基因
1ul T载体
0.5ul T4 DNA连接酶（TAKARA, 350U/ul）
1ul 连接酶缓冲液10 x buffer
3.5 ul dd Water
总量10ul 体系
（3） 上述混合液轻轻震荡后再短暂离心，然后置于14°C干式恒温仪（或14°C水中）中保温过夜（12-16h）。
（4） 连接后的产物可以立即用来转化感受态细胞或置4°C冰箱备用。
2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适（一般3-8:1）
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详细的各个国家代码?
BN - 文莱 BG - 保加利亚 BF - 布基纳法索 BI - 布隆迪 KH - 柬埔寨 CM - 喀麦隆 CA - 加拿大 CV - 佛得角 KY - 开曼群岛 CF - 中非共和国 TD - 乍得 CL - 智利 CN - 中国 CX - 圣诞岛 CC - 科科斯（基林）群岛 CO - 哥伦比亚 KM - 科摩罗 CG - 刚果 CK - 库克群岛 CR - ...
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应桦雪町： 1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A(一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min),然后和普通PCR产物一样进行TA克隆; 2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适(一般3-8:1)
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应桦雪町： 【TA 克隆的优缺点】1、优点:(1)是目前克隆 PCR 产物最简便、快捷的方法.(2)不需使用含限制酶序列的引物,不需将 PCR 产物进行优化,不需把 PCR 产物做平端处理,不需在 PCR 扩增产物上加接头,即可直接进行克隆.(3)TA克隆选...
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