凯氏定氮法的实验原理是什么?

作者&投稿:蒋响 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
凯氏定氮法的原理是什么?~

凯氏定氮法是植株全氮量测定最经典的方法。
方法原理:植株样品在硫酸钾和硫酸铜混合催化剂作用下,用浓硫酸消煮,使氮转化成为硫酸铵,然后加碱蒸馏,逸出的氨被硼酸吸收,用稀H2SO4滴定终点,根据标准酸的用量计算出植株含氮量。

神奇有趣的化学实验

凯氏定氮法是通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质的含量,此法的结果称为粗蛋白质含量。



  一、实验原理
 蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液 滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量
  1.有机物中的胺根在强热和CuSO4,浓H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4

凯氏定氮法
凯氏定氮法反应式为:
  2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 (其中CuSO4做催化剂)
  2.在凯氏定氮器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3 ,收集于H3BO3 溶液中反应式为:
  (NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4

  2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O

  3. 用已知浓度的H2SO4(或HCI)标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量

  反应式为:

  (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3

  (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3

 
   二、操作
   1、 样品处理:精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品(约相当氮30-40mg),移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,6g硫酸钾及20毫升硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上,小火加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5小时。取下放冷,小心加20ml水,放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验。但是此法比较危险,不易在实验室演示,现在大多数实验室有消煮仪一次可以进行多个(一次可以消煮16个样品)样品处理,并有通风橱进行通风,温度可以自己设定,更加安全和可操作性,因此逐步成为主要的凯氏定氮法的首选处理方法。
  一般消解温度都设在240度及240度以上,如果想快速消解可以适当提高温度甚至可以用最大温度进行消解。
  2、按图装好定氮装置,于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红 指示剂数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
  3、向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯,提起玻璃塞使其缓慢流入反应室,不能立即将玻璃盖塞紧,这样易使玻璃塞粘在进样口,应先用蒸馏水冲洗然后再盖,并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹,开始蒸馏,蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5min。移动接收瓶,使冷凝管下端离开液皿,再蒸馏1min,然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶,以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。
  同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。
  
  三、计算  
  X =((V1-V2)*N*0.014)/( m*(10/100)) *F*100%
  X:样品中蛋白质的百分含量,g;
  V1:样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
  V2:试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积,ml;
  N:硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度;
  0.014:1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数;
  m:样品的质量(体积),g(ml);
  F:氮换算为蛋白质的系数 。蛋白质中的氮含量一般为15~17.6%,按16%计算乘以6.25即为蛋白质,乳制品为6.38,面粉为5.70,玉米、高粱为6.24,花生为5.46,米为5.95,大豆及其制品为5.71,肉与肉制品为6.25,大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83,芝麻、向日葵为 5.30。


凯氏定氮法测核酸,氮含量是多少
凯氏定氮法测核酸,氮含量是12%~19%。凯氏定氮法原理是:通过测氮的含量而得出蛋白质含量.公式:蛋白质含量=蛋白氮X6.25(注:氮元素占蛋白质中组成百分比为16%,式子中的6.25是16%的倒数)凯氏定氮法测定的氮,包括蛋白质中的氮还有样品中其它的氮.所以测得结果高于样品蛋白质的实际含量。

蛋白质含量测定
多采用凯氏定氮法,检测的是粗蛋白,原理是检测其中的氮含量,因为氮含量在真蛋白中大约是百分之6左右,所以,检测出氮含量后,乘以6、25就是粗蛋白含量了。 缺点是把非蛋白中的氮也算进去了,三聚氰胺是非蛋白氮,用凯氏定氮法检测时,也把它算进去了。

如何准确测定样品中蛋白质的含量
一、微量凯氏(kjeldahl)定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。 二、双缩脲法(biuret法) 1、实验原理 双缩脲是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨...

克氏定氮法和凯氏定氮法的区别
原理是因为蛋白质含氮量通常在16%左右,所以将克氏定氮法测得的含氮量乘上系数6.25,便得到该样品的蛋白质含量。2,凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1883年建立的,现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等,是分析有机化合物含氮量的常用方法。, 凯氏定氮法的理论基础是...

蛋白质测定仪如何依据凯氏定氮法测定蛋白质含量?
蛋白质测定仪,以其国际认可的凯氏定氮法为技术基础,设计制造而成。该仪器的核心部分是采用蒸汽自动控制发生器,通过液位稳压器的精密调节,确保在数十秒内稳定输出蒸气,为蒸馏器提供动力。仪器的第一执行机关控制着碱液的流动,它会引导碱液经过蒸馏管,进入定量消化管。在这个过程中,原本固定在酸液中...

凯氏定氮法的原理是什么?
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用凯氏微量定氮法the得0.2毫升血清中含氮2.1毫克问100毫升血清中含蛋 ...
首先算出100ml血清含N有1050mg,然后根据1gN对应6.25g蛋白质,得到含蛋白质大约为6.5626g。原理是:大多数蛋白质的含氮量相当接近,平均约为16%。 因此,每克氮相当于6.25克蛋白质(即100除以16),其折算系数为6.25。

凯氏定氮法消化剂为什么不用硝酸
凯氏定氮的基本原理是使有机物中的氮转化为铵盐,然后加碱蒸出氨气,然后酸碱滴定。其中消化作用就是使有机氮变为铵盐,如果用硝酸,在加热、酸性情况下硝酸会氧化铵根,生成氮气、一氧化氮等物质,从而使定氮结果偏低或无法定出。

考马思亮蓝染色法测定蛋白质含量的实验中,磷酸盐缓冲
①凯氏定氮法 原理:蛋白质平均含氮量为16%。当样品与浓硫酸共热,蛋白氮转化为铵盐,在强碱性条件下将氨蒸出,用加有指示剂的硼酸吸收,最后用标准酸滴定硼酸,通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量。②双缩脲法 原理:尿素在180℃下脱氨生成双缩脲,在碱性溶液中双缩脲可与...

检测食品中蛋白质含量的原理和方法是什么?
基于食品中蛋白质含量与食品中氮含量的比例关系换算的。如乳中蛋白质与氮含量的比值为6.38,大豆中蛋白质与氮含量的比值为5.71,普通食品中蛋白质与氮含量的比值为6.25。因此是通过测定食品中氮含量后再根据换算系数得到食品中蛋白质含量。二、蛋白质的检测方法:1、凯氏定氮法:样品在高温浓硫酸的...

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澹急风湿:[答案] (1)国家标准为每奶粉中含蛋白质不少于18.5g,氮在蛋白质中平均含量16%,则合格奶粉中氮的含量为 18.5g*16% 100g*100%=2.96%; 现测定一袋该类奶粉中氮的含量为2%,2%<2.96%,故该奶粉不符合国家标准. (2)盐酸中溶质的质量为:21.4g...

郯城县15169002557: 凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量的原理和基本操作方法是什么?如题. -
澹急风湿:[答案] 原理:有机含氮化合物与浓硫酸共热消化,氮转化为氨,再与硫酸结合成硫酸铵.硫酸铵与强碱反应,放出氨.将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中,再用标准碱溶液进行滴定.根据测得的氨量,计算样品的总氮量.、试剂与材料:浓硫酸...

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