细胞培养过程中污染是如何发生的？要怎么有效避免培养箱污染呢？

如何防止细胞培养出现污染~

防止细胞培养出现污染的方法如下：
1、从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
2、操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。操作前，准备好所有实验所需物品，以减少走动，物品需有序摆放在超净台触手可及的地方，同时空留足够操作空间。
3、操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，移至操作区外围，尽量不要从开口容器上经过。
4、使用移液枪时，将容器倾斜以便于移液，切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况，要及时用酒精棉球擦拭，以免液体残留导致细菌滋生。

5、冻存细胞时冻存管盖子需拧紧。复苏细胞时，从液氮罐取出冻存管，轻拧盖子，以确认盖子是否拧紧。



扩展资料：
1、细菌污染培养基的处理方法。可在培养液中加相应的抗生素处理。可以用四环素，庆大霉素，或者链霉素，前两者的工作浓度是50 μg/mL；链霉素的工作浓度是100 μg/mL。
2、霉菌污染培养基的处理方法。细胞一旦被霉菌污染，很难挽救，两性霉素B或制霉菌素都于事无补，建议果断舍弃该污染细胞，将环境彻底消毒。
参考资料：中国知网-防止细胞培养污染的技术措施

试用中心实验方法资讯采购保障中心品牌专区NSFC如何预防细胞培养的污染问题2009-10-11
00:00体外培养的细胞受到严重污染时，有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此，防止污染，预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终，才能将发生污染的可能性降到最小程度。一般预防可从以下几方面着手：1、从物品、用品消毒灭菌着手细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时，在无菌过滤操作中，随着滤过体积的增大，滤膜破损的可能性增加，故应选择最后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作：75%的酒精搽拭培养箱后，使用可移动的紫外灯至少消毒
30min，加入高压灭菌过的超纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制300ml的饱和硫酸铜加3L灭菌超纯水混合成硫酸铜溶液加入水槽中。2、添加抗生素各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性，且对细胞本身也有一定影响，因此为避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统中的抗生素，或尽可能不用抗生素处理。3、从操作者做起（1）进无菌室前要彻底洗手，按规定穿隔离衣。开始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。（2）操作者动作要轻，安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意，金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火；烧过的器械要冷却后才能使用；已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，吸管再用时会将其带到培养液中；胶塞、橡皮乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞，同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。（3）操作时尽量不要谈话，咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。（4）使用培养液前不宜过早开瓶，开瓶后的培养液应保持斜位，避免直立，以防止下落细菌的污染。不再使用的培养液应立即封闭瓶口，培养的细胞在处理之前勿过早暴露在空气中。（5）操作完毕后应整理好工作台面，用消毒水浸泡的纱布擦拭台面。（6）
吸取培养液、细胞悬液时，应专管专用，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去，以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉污染。4、防止细胞交叉污染所有从别处转来的或是自己所建的细胞系都要早期留有的充足的冻存储备，一旦怀疑发生交叉污染，可做细胞遗传学方面的鉴定，如发现原有的细胞遗传物发生改变，可以复苏早期冻存的细胞使用。重要细胞系（株）的传代工作应由两人独立进行。

1、取放细胞时引起的污染
细胞培养过程中，取放细胞是基本的操作，培养箱开关门的瞬间，环境中的微生物或多或少会进入培养箱中，而且内外温差导致内门冷凝水的产生，易吸附微生物，都是造成培养箱污染的风险因素。
2、灭菌不彻底造成的二次污染
细胞培养过程中，因其它操作问题（如培养基泼洒，水盘污染等），造成培养箱的大规模污染也时常会发生，此时就需要对培养箱进行灭菌消毒，常规的消毒（如紫外照射）只能达到表面消毒的效果，特别是对真菌等顽固性污染，无法进行彻底灭菌，导致后续培养过程中细胞污染频发。

那关于怎么有效避免培养箱污染这个问题，我们需要：
1、重视细胞房管理工作，规范操作

定期进行细胞房清洁消毒工作，规范实验人员操作（如身着白大褂、换鞋等），创造洁净培养环境。
2、对于初学者，避免频繁查看细胞
做好实验规划，减少培养箱门开关的频率，取放细胞时需佩戴洁净的手套，并用少量的 70% 医用酒精（过多会导致培养箱中残留乙醇蒸汽）擦拭培养瓶/皿表面，从而降低细胞培养箱污染的风险。
3、定期维护和灭菌，预防污染
定期清洁维护，培养箱内用水灭菌后使用并定期更换，一旦发生污染，及时灭菌。选择培养箱时，可优先考虑有自动灭菌功能的培养箱。

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荣昌县17185933296： 细胞培养常见的污染及原因有哪些? ？
点泰养胃： 细菌污染会导致培养基出现浑浊、颜色改变以及pH 值急剧变化, 受污染的贴壁细胞在几天内会逐渐脱壁死亡.***污染后的细胞生长速度变慢, 培养基中会漂浮白色、浅黄色或黑色的小点.支原体污染会影响细胞的形态、功能、代谢、细胞膜、生长速率、诱导染色体畸变、细胞内信号传导等各种细胞特性.受支原体污染的细胞在培养时培养基的pH 值不会发生改变, 也不会浑浊, 因此, 很难直接观察出细胞是否受到污染.黑胶虫污染,低倍镜下观察为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去.

荣昌县17185933296： 细胞培养过程中污染的途径有哪些 - ？
点泰养胃： 1. 实验人员的操作2. 细胞培养体系3. 细胞培养环境4. 细胞来源也会有所影响

荣昌县17185933296： 细胞培养,被污染 - ？
点泰养胃： 细胞污染? 细胞产品专家齐氏生物建议您先搞清楚污染的原因 1)细菌(会出现培养液变混浊,pH改变,污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,最后变圆脱落死亡,造成试验失败和细胞株丢失.)2)真菌(可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点,有的散在生长,培养液一般不发生混浊;倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中,有的呈链状排列.)3)支原体(部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢,部分细胞变圆,从瓶壁脱落.但多数细胞污染后无明显变化,或略有变化,若不及时处理,还会产生交叉污染. )可以从组织清洗、实验室环境灭菌、无菌操作规范等几个方向查找一下原因.

荣昌县17185933296： 为什么培养的细胞老是污染,我之前养都不会污染,就被 - ？
点泰养胃： 细胞污染以后最好是将细胞立刻处理掉,并将整个实验室进行清理. 细胞污染可能原因: 1. 天气太热,实验者在培养和接种或者换液时出汗(有空调稍好,但是手也出汗). 2. 培养间里可能暗藏污染原.3. 注意培养箱(这点最重要),仔细检...

荣昌县17185933296： 导致细胞污染原因的有哪些? - ？
点泰养胃： 博凌科为生物科技-为你解答:养细胞就像养孩子,甚至比养孩子还难.忘记是谁这么说了.上次一次性死了14瓶细胞,前后分析都是培养基污染了.然后换了新培养基,换了新的种子, 开始长得不...

荣昌县17185933296： 细胞培养过程中,污染微生物的可能途径有 - -- - 、----、 - --- - 、-----和血清. - ？
点泰养胃： 培养基、环境、器具、细胞本身

荣昌县17185933296： 细胞培养时培养液出现浑浊这是什么原因 - ？
点泰养胃： 培养基变浑浊的原因可能有如下几点: 1、细胞存在污染,污染早期可以见到细胞生长; 2、不排除传代时细胞密度过大,或者操作不当导致多数细胞不贴壁,大量细胞漂浮. 3、细胞破碎.细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌...

荣昌县17185933296： 干细胞培养中出现污染 - ？
点泰养胃： 博凌科为解答:一、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染,即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量),也可能因为操作不慎而引起污染.最常见的有革兰氏阳性菌,如枯草杆菌以及...

荣昌县17185933296： 养细胞半年多了,可是总是污染,把能用的试 - ？
点泰养胃： 细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物,而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质,包括生物和化学物质. 培养细胞受细菌污染后,会出现培养液变混浊,pH改变.也有的培养液肉眼观察无多少改变,只能在...

荣昌县17185933296： 在细胞培养的过程中避免污染的关键环节有哪些 - ？
点泰养胃： 1、实验人员的操作2、细胞培养体系 3、细胞培养环境 4、细胞来源也会有所影响 为了减少污染对细胞培养的影响,必须建立细胞冻存库.细胞冻存库应该分主细胞库和工作细胞库,当需要做实验时从主细胞库中复苏细胞建立工作细胞库.每...