做增殖加cck8要换枪头吗

mtt法和cck8法测贴壁细胞增殖 两种方法有什么异同点，谢谢~

貌似除了标记的增殖的marker不同以外没有什么不同的

CCK-8计算增殖速率有两种方法， 一种是绘制生长曲线，计算线性阶段的吸光度的均值 另一种是计算某时间点的（实验组与对照组吸光度的差值）/对照组的比率。

CCK8操作说明

细胞活性检测

1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。

2. 向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。

3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。

4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

5. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。

细胞增殖 -毒性检测

1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。

2. 向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。

3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时 )。

4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。

5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。

6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

制作标准曲线

1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8后的培养时间)。

同仁CCK8检测步骤

CCK-8 检测步骤

1. 向各孔中加入100 μl细胞悬液。a)

2. 在37℃下预孵育培养板。b)

3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10 μl。

4. 37℃下孵育。

5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

6. 37℃下孵育1-4小时。e)

7. 测定450 nm处的OD值。

a) 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。

b) 建议使用CO2培养箱过夜预培养。

c) 使用培养基或PBS来制备溶液。

d) 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有CCK-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 μl培养基和10 μl CCK-8进行检测。

e) 白细胞可能需要培养较长时间。

活力计算

细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100

A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度

A（0加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

DOJINDO CCK8 初学者问答 (同仁DOJINDO)

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海南区17875561768： 为何做细胞活性检测+CCK8 - ？
狐聂牡蛎： 细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是不是能正常生长及人体肌肤状态的1项重要指标,触及生物科学、医学、药学、美容学、医疗整形等领域.细胞活性可以表征人体内部化学反应历程的有序性,受多方面因素调理,1旦遭到破坏,就会...

海南区17875561768： 用CCK8法测细胞生长曲线,在加药前细胞要饥饿处理吗 - ？
狐聂牡蛎： 不需要,如果你的药物需要饥饿处理,那就另当别论,就CCK8检测而言是不需要的.

海南区17875561768： 做 cck8没有及时测 在室温有光的情况下静置了10min钟 有影响么 - ？
狐聂牡蛎： CCK8操作说明细胞活性检测 1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) .将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃,5% CO2的条件下 ). 2. 向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 O.D值的读数) . 3. 将培养...

海南区17875561768： 测定细胞增殖用CCK8好不好 - ？
狐聂牡蛎： 细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8等方法.其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法.EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况.与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确.EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象.

海南区17875561768： 最近需要做细胞增殖,毒性检测的实验,由于第一次做,不知道哪家的试剂盒好用,求好心大神推荐!谢! - ？
狐聂牡蛎： 我们实验室一直在用engreen的CCK8,效果和同仁的差不错,价格比较便宜,算起来比较经济适用.

海南区17875561768： 吸打混匀与轻弹混匀有什么区别 - ？
狐聂牡蛎： 鉴于PCR体系一般为30微升以下,一般采取吸打混匀方法,漩涡、手弹、颠倒都会使整个体系挂壁,不能很好混匀. 加酶、加模板后也是用吸打的方法. PS:如果模板是基因组DNA,建议用火将枪头烧至无棱角,避免吸打切断基因组 一般不需要低速离心,也有一种说法,说低速离心也可以很好的混匀体系,但是考虑到如果甘油没有溶解完全,低速离心会让甘油沉底,不建议采用.

海南区17875561768： pcr移液器加样时的系统误差有什么影响 - ？
狐聂牡蛎： 看你做什么级别的PCR了,你做real-time PCR,影响是灰常巨大的,可能直接导致你的结果与预期的相反,所以用好枪,好枪头,还有你的skilled hand,尽量保证每个样品的系统误差都一致就可以忽略系统误差了

海南区17875561768： DNA与上样缓冲液混和后点样时总是往上飘是怎么回事？
狐聂牡蛎： 提几个建议 1.稍稍多加一点BUFFER,它的作用就是增加样品的密度,叫样品刚好的下沉 2.点样的时候,枪头稍稍进到孔深一点,加样的时候一定要缓慢一点 3.上样的体积最好不要超过孔容积的80% 注意这3点,应该不会飘了

海南区17875561768： 我正在做MTT实验,由于细胞是悬浮细胞,用DMSO不太好做,想说用酸化异丙醇,请问如何配置 - ？
狐聂牡蛎： 我们悬浮细胞也是用CCK8,加10%的CCK8到体系中后放培养箱0.5h,1h,2h,3h,4h后直接上酶标仪检测即可.至于时间是通过预实验来决定.

海南区17875561768： PCR试验中先加MIS后加引物和直接加MIS有什么区别 - ？
狐聂牡蛎： 如果完全在冰上操作的话,个人认为区别不大.因为只要在冰上,Mix里面的酶也不会发挥作用的.通常考虑先加的原因是担心管子里面已经有引物或者模板,忘记换枪头的话,会造成Mix 原液污染.而如果直接加Mix的话,可以一个枪头加完所有的Mix.也避免污染.我们在做实验的时候,一般会先计算总共做多少管(n),取n+1管的Mix量,与引物混合充分后,分装到不同的管中,最后分装不同的模板.