急！！！色谱柱常用填充料及原理

色谱柱的填充物如何添进去~

1，所有材料平衡至所需的温度。
2，用所需溶液冲洗柱子底端以赶除气泡，确定柱网下没有气泡。关掉柱子出口，在柱管中留下1到2厘米的缓冲液。
3，温和重悬填充物。
4，估计需要的悬浊液（重悬的填充物）总量。
5，加入所需体积的混合物至柱子中，使用玻璃棒引流可以避免出现气泡。
6，立即将缓冲液装满柱子。
7，装入柱子顶部部件，并将柱子连接到泵上。
8，打开柱子出口，设定泵的流速。若混合物体积大于柱体积，则应另外连接一个储存用的玻璃柱。这样使得混合物在填充时的直径维持恒定，从而减少紊流并提高柱子的填充状态。
9，达到柱床高度后继续维持至少3倍柱体积的填充流速，在柱子上标记柱床高度。
10，关闭泵和柱子出口，移除上盖加入缓冲液充满柱子使之产生向上的凸面。
11，将接头以一定角度插入柱子中，确保在网下无气泡。
12，将接头沿柱子向下滑行（打开接头的出口）直到标记的位置，锁上接头。装填完毕

首先我们知道色谱柱的柱效看的就是峰与峰之间的分离度，还有峰是否拖尾或者峰有前沿峰。知道这些的话我们就可以去推断影响柱效的因素有哪些了。影响柱效的因素大的范围就是热力学和动力学两个方面。具体就是流动相的速度，固定相的膜厚及固定方法及固定相的质量和性能，再者就是柱温的设置等。

据了解常规的填料其实就是泥沙等物质，但是特殊的柱子的填料，比如葡聚糖凝胶色谱柱的填料基本上大部分都是水，所以填料都不一样，不知道你想问的是那个？

一般用C18作填充料

常见色谱柱中的填料分类

1、液相

a、反相（与离子对）方法
C18（十八烷基或ODS）----------- 普适性好；保留性强，用途广
C8（辛基） -----------与C18相似，但保留值稍小
C3，C4 -----------保留值小；大多用于肽类与蛋白质
C1【三甲基硅烷（TMS）】------保留值最小；最不稳定
苯基，苯乙基 -----------保留值适中；选择性有所不同
CN（氰基） -----------保留值适中；正相和反相均可使用
NH2（氨基） -----------保留性弱；用于烃类；欠稳定
聚苯乙烯基b -----------在1＜PH＜13的流动相中稳定；对某些分 离峰形好，柱子寿命长

b、正相方法
CN（氰基） -----------普适性好；极性适中；用途广
OH（二醇基） -----------极性大于CN
NH2（氨基） -----------极性大，欠稳定
硅胶b ------------普适性好；价廉；操作欠方便；用于制备LC

c、空间排阻方法
硅胶b -----------普适性极好；作吸附剂用
硅烷化硅胶 -----------吸附性弱，溶剂兼容性好；适用于有机溶剂
OH（二醇基） ------------欠稳定；在水SEC中使用（凝胶过滤）
聚苯乙烯基b ------------广泛用于有机SEC（凝胶渗透）；一般与水和极性大的有机溶剂不相容

d、离子交换方法
键合相 ------------稳定性与重现性均不好
聚苯乙烯基b -------------柱效不高；稳定；重现性好

a ：除另有说明，均为硅胶基质键合相
b ：此类填料为非键合相

2、GPC

3、气相

4、spe中的填料

转自：分析测试百科网

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