培养基的配制与灭菌方法说明

~

培养基 （Medium）是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有水、氮源、无机盐（包括微量元素）、碳源、生长因子（维生素、氨基酸、碱基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。
不同培养基可根据实际需要，添加一些自身无法合成的化合物，即生长因子。有些微生物，如自养型微生物，不需要碳源，所以上述物质只具有一般性。培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般 培养基 必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3-6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，均改制成粉末。

培养基的配制
1.配料
配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。
2.溶解
淀粉溶解：少量冷水调成糊状加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃ ，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3.调PH
用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。
4.过滤
滤纸或棉花进行过滤。（有时可以省去）
5.分装
一般 培养基 放在三角瓶或试管中灭菌使用。
(1)三角瓶
若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角瓶，最多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。
(2)试管分装
液体培养基一般装4-5ml，约试管的1/4高度；固体斜面 培养基 一般装3-4ml，约试管的1/5高度。
6.包扎
分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

7.灭菌
按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使 培养基 的颜色变深。
8.摆斜面
灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。
9.贮存
培养基 在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。

培养基的灭菌

灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。
加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内 蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。
湿热灭菌有煮沸消毒法和高压蒸汽灭菌法两种，煮沸消毒法是注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注射器等用纱布包好，然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约15～30min，对于芽孢则需煮沸约1～2h。
高压蒸汽灭菌法是高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。

培养基注意事项
1、确认工作细胞库是否被污染，确认毒种工作种子批是否被污染，确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染，均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验 培养基 的灵敏度进行验证。实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。
2、其它：高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证，确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证，后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。
3、另外，应将有毒区与无毒区严格分开，并有各自独立的空气净化系统及孵室，有毒区对无毒区应保持相对负压，防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。

---

荷塘区19835131355： 微生物中的培养基的配制与灭菌的具体操作是怎样的? - ？
枞哄奥力： 培养基的配制与灭菌1目的 1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法 1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术. 2原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料.由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研...

荷塘区19835131355： 如何做培养基的配制,灭菌验证 - ？
枞哄奥力： 培养基干粉是有菌的,配置好后,如果不及时灭菌,细菌就会大量繁殖,消耗营养成分,导致培养基失去原有作用,所以必须及时灭菌. 如果怕高压不充分,培养基灭菌不彻底,可一每次多配置一小份同样的培养基,高压后将该培养基放置培养...

荷塘区19835131355： 微生物培养需要对培养基采用什么方法进行灭菌 - ？
枞哄奥力： 要根据你的培养基成分来选择灭菌方式. 1.如果你的培养基中所有的成分都可以耐高温,那就用压力蒸汽高温灭菌的方式:121℃或者115℃30分钟. 2.如果你的培养基中有些成分不耐高温,就可以用除菌过滤的方式除菌:用除菌滤器过滤培养基至已灭菌的培养器中. 3.如何要求不高,部分试验用培养基,可以用煮沸的方式灭菌. 不知你是哪种培养基.

荷塘区19835131355： 举例说明一种培养基的配方和制作过程 - ？
枞哄奥力：[答案] 植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基.MS培养基的配制包括以下步骤. 培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍...

荷塘区19835131355： 配制培养基的基本步骤有哪些?应注意什么问题 - ？
枞哄奥力：[答案] 按配方计算培养基中各种成分的用量→称量,(一般动作要迅速一些,因为其中可能有些成分容易吸潮)→溶化(将称好的各种成分溶解在水中,如果是固体培养基,需要使用凝固剂,如琼脂等,熔化时,注意搅拌,防止糊底)→调pH→灭菌(高...

荷塘区19835131355： 细菌和真菌培养的四个步骤是___、___、___、___. - ？
枞哄奥力：[答案] 培养细菌和真菌的一般方法和实验步骤:(1)配置培养基,首先要配置含有营养物质的培养基,原因细菌的生活需要营养物质,而不是琼脂,琼脂是一种沸腾冷却后能胶化成固体的物质. (2)高温灭菌,对配置的培养基和培养皿进行灭菌,防止其...

荷塘区19835131355： 基础培养基的配方是什么 - ？
枞哄奥力： 最常用的是MS培养基,有:硝酸铵1650 mg/l 硝酸钾1900mg/l 七水硫酸镁370mg/l 无水氯化钙332mg/l 磷酸二氢钾 170mg/l 铁盐40 mg/l 微量元素你自己去查一查,一般书上都有的,再加蔗糖20 g/l,琼脂5.8g/l

荷塘区19835131355： 对培养基进行灭菌,应采用什么方法 - ？
枞哄奥力：[答案] 培养基需用湿热高温灭菌,至于对待不同的培养基灭菌条件都有所不同,如植物组培使用的培养基与微生物中使用的就不同 有帮助请点好评或者采纳 祝你新的一学期学习进步!

荷塘区19835131355： 微生物培养基配置的基本步骤??? - ？
枞哄奥力： 1,配方制定,确定配置体积,计算要配制体积下的各组分需称量的质量. 2,称量. 3,溶解. 4,定容,用蒸馏水补加,将配制的溶液体积达到规定体积. 5,分装. 6,消毒. 7,使用. 注,固体培养基的情况略有不同,分装有区别.

荷塘区19835131355： 培养基的常规配制程序是什么? - ？
枞哄奥力： 1、称量好培养基的各个成分,如果是商品化的干粉培养基则按说明称取. 2、加入足量的水,溶解混匀,必要时调节PH值. 3、如果有必要,可进行分装. 4、灭菌,一般来说,含糖培养基115℃20min,不含糖培养基121℃20min 5、如果是配置平皿培养基,则趁凝固前倾注平皿.