把ori质粒导入大肠杆菌后用什么培养基筛选其原理是什么？
当然可以利用大肠杆菌制胰岛素，这就是基因工程方法。把胰岛素编码基因克隆到在大肠杆菌里的表达载体，通常都是可诱导型载体，以防止对大肠杆菌的毒性。然后在大肠杆菌里表达就可以得到胰岛素。
因为大肠杆菌里没有内质网（真核生物特有的细胞器），所以在大肠杆菌里合成胰岛素不需要内质网。
下面再补充点材料，能有利于加深理解，呵呵：
胰岛素具有两个特性使其能够利用基因克隆技术进行生产。一、胰岛素这种人体蛋白在翻译糖化后不再进行修饰，通过细菌合成的重组胰岛素是有活性的。二、分子量。胰岛素是相对较小的蛋白质，含有两个多肽，A链有21个氨基酸，B链有30个氨基酸。在人体中首先合成的是前胰岛素原，A链和B链通过C链相连，前端还有一段前导序列。翻译后，C链和前导序列被切除，A链和B链通过两个二硫键相连。
a) 合成和表达人工胰岛素基因
1978年合成了A链和B链的基因。人工合成的基因不一定与人体内的基因序列相同，但对应的氨基酸序列必须正确。
随后构建了两个重组的质粒，一个编码A链，另一个编码B链，每一个质粒中，人工基因都被插入到pBR322类的质粒的lacZ’读码框内。胰岛素基因就在lac启动子的控制之下进行合成，产生了的多肽含有β-半乳糖苷酶的最初几个氨基酸。两者之间的连接处是一个蛋氨酸残基，可以利用cyanogen bromide溴化氢从此处切开。最后将两条链用二硫键连接起来。效率很低。
b) 将整个地读码框B-C-A构建载体，这样就可以高效的形成二硫键。利用蛋白水解酶很容易将C链切下。
大肠杆菌的转化原理及方法
大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。
实验方法原理：质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。
实验步骤
一、实验材料准备
1. 器材
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5 ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体LB-Amp），超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。
2. 试剂
培养基（不加抗菌素），LB培养基（加抗菌素），无菌ddH2O，IPTG，X-gal。
3. 材料处理
无菌ddH2O，1.5 ml 离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%IPTG（M/V），2% X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲酰胺配）。
二、操作步骤
1. 事先将恒温水浴的温度调到42℃。
2. 从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100 μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10 min。
3. 加入5 μl 连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100 ng），轻轻震荡后放置冰上20 min。
4. 轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2 min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5 min。
5. 在超净工作台中向上述各管中分别加入500 μl LB培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1 h。
6. 在超净工作台中取上述转化混合液100-300 μl，分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
7. 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
8. 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30~60 min 直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
9. 在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。
10. 观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。
注意事项
1. 玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂。
所以，起到筛选的作用。
望采纳
质粒图谱怎么看
1.第一步，看箭头：大多数质粒都会有箭头，箭头有两种解释。一种是转录方向，转录方向主要是由启动子开始的一个大箭头，是启动子启动序列的顺序。另一种是复制起始位点的方向，复制起始位点就是该质粒在大肠杆菌等细菌或真菌中DNA复制的一个方向。还需要提到的是F1启动子（图上的f1 ori）代表的是噬菌...
说说质粒图谱那些你不知道的事...
图1：质粒——基因工程的忠实载体 解读质粒图谱的关键元素 在探索质粒图谱之前，了解其基本构成至关重要。改造过的质粒通常具备复制起点、筛选标记和多克隆位点这三个核心元件（图2）。复制起点（ori）是启动复制的关键，它决定了质粒在何处启动复制，以及在细胞中的拷贝数量。而筛选标记如氨苄青霉素抗性（...
克隆的主要载体有哪些类型?
这些质粒都含有多个基本基因，如复制起动区（复制原点Ori），便于复制扩增；抗抗生素标记（抗氨芐青霉素Apr、抗四环素Tcr等）或大肠埃希菌部分乳糖操纵子（E.coli LacZ）等，便于基因重组体的筛选；基因发动子（乳糖操纵子Lac、色氨酸操纵子Trp等）和转录终止序列，便于插入的外源基因转录、翻译表达。质粒上...
质粒图谱的认识
Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。被宿主细胞复制因子所识别，利用宿主的复制机器，复制，增加拷贝数。因宿主复制机器不同，可分为原核\/真核\/穿梭质粒。质粒转化是一个效率极低的过程，平均约10000个细胞中有1个细胞转化成功...
发根致瘤土壤杆菌Ri质粒基因转化载体是怎样构建的?
根据其诱导的冠瘿碱的不同，Ri质粒可分为3种类型：农杆碱型（agropine）、甘露碱型（mannopine）和黄瓜碱型（cucumopine）。Ri质粒具有3个功能区域，即致病区（Vir区）、转移进入植物细胞核的T-DNA区和复制起点（ori）。Ri质粒的T-DNA区上的基因不影响植株再生，野生型Ri质粒可直接用作转化载体。...
Ti质粒的起源是什么啊
目前以T-DNA转化植物细胞的标准方法大多采用Ti 质粒介导的双元载体系统。首先将目的基因插入到微型质粒,含有目的基因的重组微型质粒转化大肠杆菌后,再导入携带辅助Ti 质粒的根癌农杆菌中,经筛选后直接感染植物细胞。根癌农杆菌侵染植物细胞后,植物的创伤信号启动Ti 质粒上的vir基因,随后将微型质粒上的T-DNA切割下来,...
质粒图谱的认识
tetr 四环素，可以阻止四环素进入细胞。camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶 使 G418（长那霉素衍生物）失活。hygr 潮霉素，农杆菌里常用的。使潮霉素 β 失活 Kan（卡那霉素，常用）、Cmr（氯霉素，某些酵母表达质粒）、SM（链霉素）、3.多克隆位点 MCS：它...
质粒载体的基本特征
按质粒复制的调控及其拷贝数可分两类：严紧控制（stringent control）型质粒的复制常与宿主的繁殖偶联，拷贝数较少，每个细胞中只有1个到十几个拷贝；另一类是松弛控制（relaxed control）型质粒，其复制宿主不偶联，每个细胞中有几十到几百个拷贝。每个质粒DNA上都有复制的起点，只有ori能被宿主细胞复制...
请问一下下面的这个质粒里面的英文代码都是什么意思,有什么用,谢谢_百 ...
Ptac：启动子 cyc2 gene：应该是插入的外源基因 His Tag：组氨酸标签，用来纯化蛋白 Km：卡那霉素抗性标记 Sm：妥布霉素 rep：编码REP蛋白，对质粒复制起正调节作用 mob：编码的MOB蛋白能与其他宿主产物起作用使质粒可以在宿主间转移 Ori：复制起始位点 ...
如何快速了解新接触的质粒(一)
表达质粒载体：是指在克隆载体基本骨架上，加入一些表达元件等，使得插入的外源DNA(目的基因)在宿主细胞中复制，转录和翻译。3. 按照进入受体细胞的类型 真核质粒 原核质粒 穿梭质粒是指能在两种宿主细胞内复制的质粒，只要是具有真核和原核两种不同的复制子。如下图pCMV6质粒所示，有ori和SV40ori两个...
焦罚金鸡： 质粒上一般包含抗生素抗性基因,转入大肠杆菌中后,一般用含相应抗生素的固体培养基(如2YT培养基、LB培养基等).重组质粒因其含有抗生素抗性,转入大肠杆菌后,可以在含相应抗生素的培养基中生长.而其他质粒不含抗性,转入大肠杆菌后,无法生长.所以,起到筛选的作用.望采纳
同江市17826942300： 质粒导入大肠杆菌要用什么处理该菌,以使其处于什么细胞状态,从而吸收DNA分子 - ？
焦罚金鸡： 质粒图一般有三条带,因为提取的质粒有超螺旋,欢型和线性三种形态,三种形态的质粒由于形态的差异在琼脂糖胶电泳的速度有差异,所以会形成三条带.一条很快,离另外两条较远,另外两条很近~
同江市17826942300： 把目的质粒放到大肠杆菌中表达培养的方法叫什么的,有几种方法,及其原理? - ？
焦罚金鸡：[答案] 转化 目前实验室常用的主要有热激转化和电转化 热激转化主要运用氯化钙处理大肠杆菌细胞,使其细胞壁细胞膜出现“穿孔”,这样通过冰浴及热激作用将重组质粒转进细胞内. 点击转化则主要通过短时高压使细胞“穿孔”进而将重组质粒导入细胞.
同江市17826942300： 重组质粒已成功转入大肠杆菌内, - 20°冻存,怎样复活,扩大培养? - ？
焦罚金鸡： 首先要进行菌种活化,可以先从保存的菌种液中吸5ul,接种到加入了相应抗生素的5ml LB培养基中,200转每分钟,37摄氏度过夜. 然后根据需要,如果要扩大培养,就按1:100的比例接种到大瓶的LB培养基(加抗生素)中,37°C 200转每分...
同江市17826942300： 质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞再热激以后进行活化培养,这时培养基为什么不加入抗生素 - ？
焦罚金鸡： 活化培养用的一般是SOC培养基,这种培养基比LB培养基营养,此时进行的活化培养只是为了让大肠杆菌迅速复苏,恢复分裂活性,此时的细胞还不具抗性,加入抗生素会细胞会死亡.
同江市17826942300： 如图为重组质粒形成示意图. 将此重组质粒导入大肠杆菌,然后将大肠杆菌放在四种培养基中培养:a - 无抗生素的培养基,b - 含四环素的培养基,c - 含氨苄青... - ？
焦罚金鸡：[选项] A. a B. a和c C. a和b D. b和c
同江市17826942300： 若用重组质粒转化大肠杆菌,一般情况下先用什么处理大肠杆菌,目的是 - ？
焦罚金鸡： 用钙离子处理细胞.目的是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程.
同江市17826942300： 如何将一个质粒dna转入到大肠杆菌感受态细胞中?并且如何鉴别是否转化成功 - ？
焦罚金鸡： 在楼上说的“通常使用选择培养基来筛选大肠杆菌.例如重组质粒上带有抗四环素基因,那么使用带有四环素的选择培养基,将待测大肠杆菌接种到选择培养基,只有成功转入重组质粒的大肠杆菌才能在选择培养基生长”的基础上,也可将待测大肠杆菌接种到另一种抗生素培养基中,转化成功则不长,也是一种加强的反向验证.
同江市17826942300： 将重组质粒导入大肠杆菌,为什么先用氯化钙溶液处理大肠杆菌 - ？
焦罚金鸡： 0℃,CaCl2的低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热冲击处理,促使细胞吸收DNA复合物,在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增值,被转化的细菌中,重组子中基因得到表达,在选择性培养基平板上,可选出所需的转化子.
同江市17826942300： 在DNA测序前,将目的基因转化入大肠杆菌后,用来培养大肠杆菌的固体培养基中加入的药品是什么及作用? - ？
焦罚金鸡： LB培养基 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 10g/L 琼脂粉15g/L 作用:养细菌 抗生素,Amp+ Kan+什么的 作用:做筛选,质粒上有抗性基因,转入质粒的阳性菌就会在抗生素平板上活下来.现在很少用蓝白斑了,公司的载体都很好,自连的概率在可接受范围了已经.
