质粒载体的基本特征
能在宿主细胞中保存并大量复制,有多个限制酶切点
质粒(plasmid)是细菌或细胞染色质以外的,能自主复制的,与细菌或细胞共生的遗传成分。其特点如下:
是染色质外的双链共价闭合环形DNA
(covalently closed circular DNA,cccDNA),可自然形成超螺旋结构,不同质粒大小在2-300kb之间,<15kb的小质粒比较容易分离纯化,>15kb的大质粒则不易提取。 能自主复制,是能独立复制的复制子 (autonomous replicon)。一般质粒DNA复制的质粒可随宿主细胞分裂而传给后代。按质粒复制的调控及其拷贝数可分两类:严紧控制(stringent control)型质粒的复制常与宿主的繁殖偶联,拷贝数较少,每个细胞中只有1个到十几个拷贝;另一类是松弛控制(relaxed control)型质粒,其复制宿主不偶联,每个细胞中有几十到几百个拷贝。每个质粒DNA上都有复制的起点,只有ori能被宿主细胞复制蛋白质识别的质粒才能在该种细胞中复制,不同质粒复制控制状况主要与复制起点的序列结构相关。有的质粒的可以整合到宿主细胞染色质DNA中,随宿主DNA复制,称为附加体,例如细菌的性质粒就是一种附加体,它可以质粒形式存在,也能整合入细菌的DNA,又能从细菌染色质DNA上切下来。F因子携带基因编码的蛋白质能使两个细菌间形成纤毛状细管连接的接合(conjugation),通过这细管遗传物质可在两个细菌间传递。
质粒对宿主生存并不是必需的
这点不同于线粒体,线粒体DNA也是环状双链分子,也有独立复制的调控,但线粒体的功能是细胞生存所必需的。线粒体是细胞的一部分,质粒也往往有其表型,其表现不是宿主生存所必需的,但也不妨碍宿主的生存。某些质粒携带的基因功能有利于宿主细胞的特定条件下生存,例如,细菌中许多天然的质粒带有抗药性基因,如编码合成能分解破坏四环素、氯霉素、氨芐表霉素等的酶基因,这种质粒称为抗药性质粒,又称R质粒,带有R质粒的细菌就能在相应的抗生素存在生存繁殖。所以质粒对宿主不是寄生的,而是共生的。医学上遇到许多细菌的抗药性,常与R质粒在细菌间的传播有关,F质粒就能促使这种传递。
分子生物学使用的质粒载体都已不是原来细菌或细胞中天然存在的质粒,而是经过了许多的人工的改造。从不同的实验目的出发,人们设计了各种不同的类型的质粒载体,发展很快,新的有特定用途的质粒不断被创建。图20-2给出最常用的大肠杆菌克隆用质粒pUC19的图谱,此质粒的复制起点处序列经过改造,能高频率起动质粒复制,使一个细菌pUC19的拷贝数可达500-700个;质粒携带一个抗氨芐青霉素基因,编码能水解β-内酰胺环,从而破坏氨芐青霉素的酶,当用pUC19转化细菌后放入含氨芐青霉素的培养基中,凡不含pUC19者都不能生长,结果长出的细菌就是都含有pUC19的;pUC19还携带细菌lac操纵元中的lacI和lacZ基因编码,β-半乳糖苷酶N端状146个氨基酸的段落,当培养基中含有诱导物IPTG和Xgal时,lacz ' 基因被诱导表达产生的β-半乳糖苷酶N端肽与宿主菌表达的C端肽互补而具有β-半乳糖苷酶活性(质粒和宿主编码的肽段各自都没有酶活性,两都融为一体而具酶活性,称为α-互补,α-complementation),半乳糖苷酶水解Xgal而使菌落呈现蓝色;在lacz '中间又插入了一段人工设计合成的DNA序列,其中密集多个常用的限制性核酸内切酶的位点,使外来的基因和序列能很方便地被插入此位置,当外来序列插入后则破坏了lac 'z编码的半乳糖苷酶活性,生长的菌落就呈白色,这种颜色标志的变化就很容易区分和挑选含有和不含有插入序列或基因的转化菌落,称为蓝白筛选法。
除常用的大肠杆菌质粒载体外,还发展了许多人工构建的其它能用于微生物、酵母、植物等的质粒载体。含有不止一个ori、能携带插入序列在不同种类宿主细胞中繁殖的载体称为穿梭载体(shuttle vectors)。
4. 质粒载体的特征有哪些啊?
能在宿主细胞中保存并大量复制,有多个限制酶切点
质粒载体的简介
质粒在所有的细菌类群中都可发现,它们是独立于细菌染色体外自我复制的DNA分子。自然界中,质粒是在营养充足时出现的,它在结构、大小、复制方式,每个细菌的拷贝数,在不同的细菌体内的繁殖力不同,在菌种之间的转移力等方面都会变化,可能最重要的是质粒所携带的特征的改变。大多数原核生物的质粒是双链...
质粒载体的分类
低拷贝数的质粒载体由 pSC101派生来的载体特点是分子量小的拷贝数。它有特殊的用途:当有些被克隆的基因的表达产物过多时会严重影响寄主菌的正常代谢活动,导致寄主菌的死亡时,就需要低拷贝的载体。失控的质粒载体这是一类温度敏感型复制控制质粒。如pBEU1、 pBEU2。插入失活型克隆载体。载体的克隆位...
如何快速了解新接触的质粒(一)
2. 按照质粒载体功能 克隆质粒载体:一般是高拷贝的就是上面讲的松弛型质粒,将需要的目的基因插入到质粒后倒入到细菌中,进行大量克隆扩增目的片段。表达质粒载体:是指在克隆载体基本骨架上,加入一些表达元件等,使得插入的外源DNA(目的基因)在宿主细胞中复制,转录和翻译。3. 按照进入受体细胞的类型 ...
质粒载体图谱是怎样的?
具体如下:图谱中的ori表示质粒的复制起点。质粒的复制起点决定了质粒的宿主及质粒的拷贝数相关,它是质粒中的一段特定序列,富含AT和重复序列。图谱中的AmpR、KanaR等表示质粒载体中的筛选标签,多为抗生素抗性基因,方便后续通过抗生素筛选阳性克隆。特点是单词最后会以大写R或上标r结束。图谱中的MCS或者...
质粒载体中的复制原点
是碱基对.复制的起始需要启动子,启动子就是基因序列上的碱基对,就像复制或者转录终止需要终止密码子一样,终止密码子也是碱基对.
基因克隆的基因克隆技术
3)载体分子中最好具有两个以上的容易检测的遗传标记(如抗药性标记基因),以赋予宿主细胞的不同表型特征(如对抗生素的抗性)。4)载体本身最好具有尽可能多的限制酶单一切点,为避开外源DNA片段中限制酶位点的干扰提供更大的选择范围。若载体上的单一酶切位点是位于检测表型的标记基因之内可造成插入失...
质粒载体的种类有哪些啊?
在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr),并含有27种限制性内切酶的单一识别位点。如果将DNA片段插入EcoRI切点,不会...
dna载体的最基本性质是
自我复制能力。dna载体的最基本性质是自我复制能力。基因载体本身是DNA,除根据其来源分为质粒载体、噬菌体载体、病毒载体等外,还可以根据它们的主要用途分为克隆载体与表达载体。自我复制能力是基本性质。
游离在细胞质基质的dna(比如质粒)能转录吗
这要看你用的是哪一种质粒载体,有些质粒就在细胞中进行表达,不整合入基因组中,比如腺病毒类的表达载体;有些质粒上有整合的序列,可以整合到细胞基因组上进行表达。一般的表达质粒上后面有自带的polyA序列,所以产生的mRNA是带polyA尾巴的。
闭翔滇白:[选项] A. ①③⑤⑦ B. ②④⑥⑧ C. ①③⑥⑧ D. ②④⑤⑦
天祝藏族自治县17675869607: 质粒是基因工程中最常用的运载体,它的主要特点是()①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋 - ?
闭翔滇白: ①质粒必须能自主复制,以保证能在宿主细胞中稳定存在并复制,①正确; ②质粒必须能自主复制,②错误; ③质粒为小型环状DNA,其结构很小,③正确; ④质粒的化学本质是DNA,不是蛋白质,④错误; ⑤质粒为小型环状DNA,⑤错误; ⑥质粒为小型环状DNA,⑥正确; ⑦质粒必须能“友好”地“借居”,以便于目的基因的稳定存在和复制,⑦正确. 故选:C.
天祝藏族自治县17675869607: 质粒是基因工程中最常用的运载体,它的主要特点是() ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④成分为蛋白质 ⑤环状RN - ?
闭翔滇白:[选项] A. ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居”A、①③⑤⑦ B. ②④⑥ C. ①③⑥⑦ D. ②③⑥⑦
天祝藏族自治县17675869607: 质粒是基因工程常用载体,它的特点是() ①能自主复制②不能复制③结构简单④单链DNA⑤环状DNA⑥含有标记基因. - ?
闭翔滇白:[选项] A. ①②⑤⑥ B. ③④⑤⑥ C. ①③⑤⑥ D. ②③⑤⑥
天祝藏族自治县17675869607: 简述质粒载体的结构特点和用途 - ?
闭翔滇白: 把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector).细菌质粒是重组DNA 技术中常用的载体. 质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的.与天然质粒相比,...
天祝藏族自治县17675869607: 结合PBR322质粒载体构建过程,总结质粒载体的特点和质粒载体构建的原则? - ?
闭翔滇白:[答案] 基因载体的条件;一、能自主复制或随受体细胞染色体DNA一起复制.二、易于鉴定和筛选.三、限制酶对其作用的切割点少.四、易与引入受体细胞. 质粒 是细菌染色体外的小型环状双链DNA,质粒可以自我复制,而且质粒上有多个限制性内切酶的酶...
天祝藏族自治县17675869607: 用质粒做载体有什么特点? ?
闭翔滇白: 质粒是一种裸露、结构简单、独立于 细菌染色体之外,并且具有自我复制能 力的双链环状DNA分子.它能够在细 胞内自我复制,或整合到染色体DNA 上,随染色体DNA进行自我复制.质粒 具有一个或多个限制性内切酶切点,便 于供外源DNA插人,而且具有特殊的遗 传标记基因,例如抗四环素、氨苄青霉素 等,供重组DNA的鉴定和选择用.
天祝藏族自治县17675869607: 质粒作为基因工程载体的优点 - ?
闭翔滇白:[答案] :(1)具有较小的分子量.经验表明,为了避免在DNA的纯化过程中发生链的断裂,克隆载体的分子大小最好不要超过10Kb.pBR322质粒这种小分子量的特点,不仅易于自身DNA的纯化,而且可容纳较大的外源DNA片段;(2)具有两种抗菌素抗性基因...
天祝藏族自治县17675869607: 质粒有哪些特点使之在基因工程中广泛应用 - ?
闭翔滇白:[答案] 一,能够在宿主细胞中复制并稳定保存;二,具有多个限制酶切点;三,具有某些标记基因便于进行筛选. 所以,质粒在基因工程中经常被用作运载体.