实时荧光定量PCR可以用来精确测定DNA浓度吗
不是用来测浓度的，可以用来做基因的拷贝数。测浓度最经典的还是紫外分光光度计，当然会有偏差，不过总体来说还是可以的。也可以用酶标仪。
用已知浓度的DNA样本（通常是质粒）梯度稀释成一系列的样本。做实验的时候，这些标准品和待测样本加在同样一块96孔盘的不同孔内。一起做PCR。
首先,分光光度计测量的样品必须是均一的,摇匀后再测量结果会准确些.它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器. 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能.可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA.核酸的最高吸收峰的吸收波。
标准品的荧光强度和已知的浓度作图，可以得到一条标准曲线。而待测样本的荧光强度测出以后，就可以在标准曲线上算出样本浓度了。
实时荧光定量PCR不是用来测浓度的，可以用来做基因的拷贝数。但是如果你的产物单一，有相应的标准品，也是可以测浓度的，浓度的准确性和你的标准曲线相关。
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
检测指标是：各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
精确测定DNA浓度的方法：
DNA纯度和浓度的检测:分光光度(紫外吸收)法
1.预热紫外分光光度计10-20分钟。
2.取所需的比色杯（4ml），其中一只装入3 mlH2O溶液，作为空白液，用来校正分光光度计零点及调整透光度至100。
3. DNA纯度及浓度的测定：
①取3微升的DNA样品加入比色杯，加dH2O至3000微升，混匀。
②将比色杯置入分光光度计中，调入射光波长，分别用空白溶液调整零点（T为100，OD为0），测待测样品在260nm、280nm、230nm的OD值。
③计算浓度：
DNA浓度（ug/ml）=A260×50ug/ml×稀释倍数
对于双链DNA 1.0 OD260=50 ug/ml
对于单链RNA 1.0 OD260=40 ug/ml
4. 纯的DNA溶液其OD260/OD280应为1.8，OD260/OD230应大于2.0。
⑴ OD260/OD280大于1.9时，说明有RNA污染，小于1.6时表明有蛋白质或酚污染。
荧光定量分为 绝对定量 和相对定量
我之前做的都是相对定量
绝对定量应该可以吧
实时荧光定量PCR可以用来精确测定DNA浓度吗
实时荧光定量PCR可以用来精确测定DNA浓度吗 实时荧光定量PCR不是用来测浓度的，可以用来做基因的拷贝数。但是如果你的产物单一，有相应的标准品，也是可以测浓度的，浓度的准确性和你的标准曲线相关。实时荧光定量PCR：实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国...
什么是实时荧光定量PCR?有什么作用?请详细说明。
实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。实时荧光定量PCR 技术的主要应用：1...
什么是实时荧光定量pcr
实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的C...
实时荧光定量 PCR
实时荧光定量 PCR ,简称 RT-QPCR, 属于 Q-PCR 的一种,目前该技术已得到广泛应用,如:扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、 SNP 分析等。荧光定量 PCR 常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法。 SYBR Green I 是一种结合于所有 dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的荧光染料, 可与所...
实时荧光定量PCR的结果该怎样分析?
1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；2、一般都是相对量，则用deltadeltaCT方法来计算；3、引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性；4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们...
实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什...
荧光定量PCR主要是用来定量分析和确定基因转录水平的，普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段，定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作，反之不行。5、二者测量成本不同 定量PCR仪价格较为昂贵，普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多，而且运行成本也要低很多。实时荧光定量...
rtpcr和实时荧光定量pcr区别是什么?
rtpcr和实时荧光定量pcr区别如下：1、所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增。2、RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reverse transcription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也简称RT-PCR，但是这是不对的，不推荐。...
pcr做出基因表达增加1000多倍对吗
基因表达水平一般是通过该基因转录的mRNA的多少来衡量的，PCR之后可以通过产量的多寡来判断。但是普通PCR一般只能定性判断基因表达量，实时荧光定量PCR可以通过PCR扩增来定量计算RNA含量（通过比较内参的ct值）。所以，传统曲线只能定性判断，实时荧光定量PCR曲线可以定性判断。PCR有两种解释：1，最常用的理解：...
实时荧光定量pcr与基本pcr相比有什么优点
荧光定量PCR与普通PCR相比具有以下优点：1、高灵敏性 可检测单个细胞基因；2、高特异性和精确性 将DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精准性融合，应用荧光探针和光电传导，直接探测基因扩增过程中荧光信号的变化，以获得定量结果，相当于在PCR反应过程中自动完成了Northern杂交；3、操作简便、速度快 通过...
荧光pcr检测原理
Real-time qPCR技术的定量原理 扩增曲线 在Real-time qPCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号，随着反应的进行，监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线，即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。在Real-time qPCR扩增早期，扩增的荧光信号被荧光背景信号所...
麻贪复方： 不是用来测浓度的,可以用来做基因的拷贝数.测浓度最经典的还是紫外分光光度计,当然会有偏差,不过总体来说还是可以的.也可以用酶标仪.
邵阳市19875758238： 实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么? - ？
麻贪复方：[答案] 原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光. 反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段....
邵阳市19875758238： 什么是实时荧光定量PCR?有什么作用?请用自己的话详细说明. - ？
麻贪复方： 荧光定量PCR是将荧光素结合到PCR的反应物上,然后随着反应的进行检测荧光的强度可以实时的检测产物的量.
邵阳市19875758238： 为什么荧光定量pcr可以准确定量 - ？
麻贪复方： 为什么荧光定量pcr可以准确定量 实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间.同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定量的意义了 用已知浓度的DNA样本(通常是质粒)梯度稀释成一系列的样本.做实验的时候,这些标准品和待测样本加在同样一块96孔盘的不同孔内.一起做PCR. 标准品的荧光强度和已知的浓度作图,可以得到一条标准曲线.而待测样本的荧光强度测出以后,就可以在标准曲线上算出样本浓度了.
邵阳市19875758238： 定量PCR可以准确的定量一大类微生物吗 - ？
麻贪复方： Realtime PCR(实时定量PCR) 定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术,即实时定量PCR.实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,...
邵阳市19875758238： 实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? - ？
麻贪复方： 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...
邵阳市19875758238： 实时荧光定量pcr仪的医疗应用 - ？
麻贪复方： 目前,采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定.与传统的检测方法相比具...
邵阳市19875758238： 什么是RT - PCR、Real - time PCR及其应用 - ？
麻贪复方： RT-PCR是反转录PCR,是将提取的mRNA逆转录为cDNA后进行PCR的实验.可定性或半定量mRNA的量. Real time PCR是实时定量PCR,可以精确测定起始模板的量.用于定量测定.
邵阳市19875758238： 什么是实时荧光定量PCR?有什么应用领域?与传统PCR有什么区别? - ？
麻贪复方： .荧光共振能量传递 (FRET) 某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光,当另一屏蔽基团与其距离合适时,原发射光将会被屏蔽基团所吸收,并转化为其他波长的发射光或热能,称之为FRET.2.荧光化学:荧光定量PCR所使用的荧...
邵阳市19875758238： 实时荧光定量PCR仪和基因扩增仪的区别是什么? - ？
麻贪复方： 荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,而反之就不行了,况且这样代价太大了,一般的实验室都不允许这样做的.总之两者的功能不能互相取代.
