流式细胞术测阳性表达，门怎么取

流式细胞术中，线性设门是啥意思~

这个可以任意设置的啊。看你做的时候怎么设置的了。如果是histogram图，一般可以设为荧光强度(也就是信号的强弱)。 如果是散点图，那可能性就太多了。

FCM数据的存贮的方式是FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排队(List Mode)方式。易于加工处理分析，但缺乏直观性，数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种；由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。

Q1：坐标轴的意义？

1、 单参数直方图

每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布，以直方图的方式来显示。在图中，横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，其单位是道数（channel），可以是线形（line）或者对数（log）。纵坐标一般是相对细胞/粒子数（count）！

2、 二维图

在二维图的中，横坐标/纵坐标都表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，可以是线形（line）或者对数（log）。双参数图可以将样品细胞群分开，从而方便对感兴趣的细胞进行分析。

Q2：“Gate”和 “Regin”？

设门是流式细胞分析中一种重要的技术，只有通过最佳的设门方式，才能准确地获取和分析数据，从而得到临床诊断和科研中有价值的信息。

On-line gating(threshold gating)监测/获取数据
Off-line gating： 分析实验数据 散射光设门/荧光设门 散射光/荧光联合设门

多重逻辑门(组合门)多重逻辑门 G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)

其它： G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式图中的颜色与荧光颜色?

流式图中的颜色为区分不同细胞群而人为指定, 与荧光颜色无关!!

Q4：流式图中的阴/阳（N/P）如何划分?

如何做M1阴性界限？实际上，这个M1的划分完全是根据阴性(同型)对照来的！如下图：左图为同型对照，即：您所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。右图即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。

Q5: 这么巧，阴性正好在101划分？？

其实, 我们可以人为地将电压，放大倍数调到相应的大小，使阴性的右边界在某一个值上，（通常划在101附近）这样后期做sample时好看！当然也可以调到102，103次方。

Q6：为什么要进行荧光补偿？

流式细胞分析中经常要用到2种以上的荧光标记抗体进行染色，而目前所使用的多种荧光染料发射谱间有一定重叠。

“荧光补偿”这个术语是指修正荧光渗漏的过程，如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。

1.我把门设得紧一点，是不是就没有必要设置FMO了啊？文献中那些直接在图上画双阳性的，是不是意味着他们没有做FMO？
2.还是不太理解。从最初的门一路画下了，里面的细胞应该是确定的，反向设门应该是最下级门内细胞一直在上级门内才对啊，和非特异性染色有关吗？
望不吝赐教。

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银州区15547838087： 请教,流式细胞术结果应该用设门法还是平均荧光强度统计 - ？
邲郭力博： 这个要看你具体的实验.一般的原则是先gate出所需要的细胞群,然后再看染色.流式检测大多数情况都是检测相对的百分比,而不是平均荧光强度.同一种荧光通道,都是阳性细胞,可以比较荧光强度

银州区15547838087： 流式细胞术图像如何分析 - ？
邲郭力博： 那些方框叫做圈门,旁边的数字说的是门里面所占的百分比,后面那2张图是计数,右上计数的是48%那群的,下图是计数45%那个门里面的, 整张图的横坐标左边是阴性,右边是阳性

银州区15547838087： 如何看流式细胞术结果中的图 - ？
邲郭力博： 博凌科为解答:FCM数据的存贮的方式是FCS2.0(flow cytometry standard),采用列表排队(List Mode)方式.易于加工处理分析,但缺乏直观性,数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种;由数据还可以做出标准曲...

银州区15547838087： 流式细胞分析的反向设门是什么? - ？
邲郭力博： 流式细胞术数据分析目的就是需要确定所要研究的目的细胞器,这就涉及到设门.设门就是划定某一区域的细胞群体,对其单独加以分析或分选.门的形状可任意,方法有几种:(1)阈值设门.FSC(前向散射光)是最常用的阈值参数.FSC ...

银州区15547838087： 用流式细胞仪怎么检测MICA/B的表达 - ？
邲郭力博： MICA/B为膜蛋白,可以做活细胞的检测.细胞分为2组.第一组先用抗MICA/B抗体孵育,洗脱,再用荧光二抗识别,洗脱.上机检测.第二组用非特异性抗体(和抗MICA/B抗体同型),洗脱.再用荧光二抗识别,洗脱.上机检测.荧光阈值按照第二组设置.第一组超过阈值的部分为阳性细胞.

银州区15547838087： 流式细胞仪 白细胞中各细胞类型分离 - ？
邲郭力博： 如果要求不是太严格的话,增加两种荧光抗体即可,也就是说得同时标记4种分子.1、抗CD3荧光抗体.CD3为TCR成分之一,表达于T细胞.流式细胞分析时,CD3阳性细胞群即为T细胞群.2、抗CD19或抗CD20荧光抗体.CD19表达于B细胞和滤泡树突状细胞,如果样本不是淋巴结等免疫器官,用CD19抗体就能够代表B细胞群了.CD20表达于B细胞群,不表达于浆细胞.要分析你感兴趣的两种分子在B细胞的表达情况,选择CD19或CD20阳性细胞进行进一步分析即可.CD3、CD20双阴性的细胞即为其他细胞.

银州区15547838087： hoechst 33342 流式细胞术检测用哪个通道？
邲郭力博： “通道”这个称呼一般只用于特定的机器,大多数的流式细胞仪上来来说,是要看光谱来匹配所要使用的检测头.该荧光染料的光谱如下 从图中可以看出,最大激活在350nm波长,所以要使用紫外激光.而最强释放波长在450nm左右.在选机器的检测器的时候,首先要选是针对紫外激光器的探头,然后看探头前方滤镜的通过波长,一般是450/50这样的.就可以了.和DAPI通用.

银州区15547838087： 如何用流式细胞术测定细胞转染率 - ？
邲郭力博： 如果你转染的质粒上有编码荧光蛋白的序列,那么转染成功的细胞就应该是该荧光蛋白表达阳性的.可以直接上机检测看有多少阳性率.如果不带荧光蛋白,那就要用带荧光标记的抗体去染色细胞,然后看阳性率了.

银州区15547838087： 如何检测外周血中表达在特定细胞上一种膜蛋白的阳性比例 细胞流式技术 - ？
邲郭力博： 这是流式细胞仪最常用的方法之一,首先,你需要能分辨这种“特定细胞”,不管是通过FSC/SSC,还是通过荧光标记.总之,这种特定细胞必须有一个细胞群可以被gate出来.然后,你需要可以识别膜蛋白的荧光抗体来染色.在前面选中的gate的基础上,再看该抗体染色的阳性率

银州区15547838087： 流式细胞术怎么检测 autofluorescence - ？
邲郭力博： 所谓autofluorescence就是细胞在没有使用荧光抗体或者荧光染料染色时所发出的荧光.细胞内的很多大分子都可以被激发而发出荧光.因为流式细胞仪是检测的相对荧光强度,所以必须要有对照才能进行比较. 一般把未染色的细胞作为阴性对照,其发出的本地荧光作为阴性的阈值,高于该阈值的,认为是染色所导致的阳性信号.