做抗菌活性实验时如何数细菌落数?
食品中菌落总数的测定
2 原理
样品经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、PH、需氧性质等) ,
所得1 mL 检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得的结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
3 试剂
3.1 氢氧化钠溶液,150g/L
3.2 生理盐水
3.3 乙醇溶液,750g/L
3.4 营养琼脂培养基:将10g蛋白胨、3g 牛肉膏、5g 氯化钠溶解于 1000mL 蒸馏水中,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正PH至7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。
4 仪器
4.1 温箱:36±1℃
4.2 恒温水浴:46±1℃
5 操作步骤
5.1 样品处理:用点燃的酒精棉球烧灼瓶口灭菌,用石碳酸纱布盖好,再用灭菌开瓶器启开后进行检验。
5.2 检样稀释及培养
5.2.1 以无菌操作,吸取酱油样品25 mL,加入装有225mL灭菌蒸馏水的灭菌玻璃瓶内经充分振摇做成1:10 的均匀稀释液。
5.2.2 用 lmL 灭菌吸管吸取 1:10 稀释液 lmL,沿管壁徐徐注入含有 9mL 灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成 1:100 的稀释液。
5.2.3 另取 lmL灭菌吸管,按 5.2.2操作顺序,做10 倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,
即换用1 支lmL灭菌吸管。
5.2.4 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2 一 3 个适宜稀释度,分别在做10 倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移 lmL 稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
5.2.5 稀释液移入平皿后,应及时将凉至 46℃营养琼脂培养基(可放置于 46±1℃水浴保温)注入平皿约 l5mL,并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有lmL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
5.2.6 待琼脂凝固后,翻转平板,置36士 l℃温箱内培养 48 士 2h。
5.3 菌落计数方法
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板的
菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
5.4 菌落计数的报告
5.4.1 平板菌落数的选择
选取菌落数在30 一 300 之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落;如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。
5.4.2 稀释度的选择
5.4.2.1 应选择平均菌落数在30 一 300 之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。
5.4.2.2 若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30 一 300 之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于 2 则报告其中较小的数字。
5.4.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
5.4.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30, 则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
5.4.2.5 若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1 乘以最低稀释倍数报告之。
5.4.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30一300之间, 其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30 或300 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
5.4.3 菌落数的报告
菌落数在100 以内时,按其实有数报告,大于100 时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数, 也可用10的指数来表示。
涂板,数菌落数。
或者直接用细菌计数板计数。
平板对峙培养法
如此重复即可).将药片置于PDA 平板一侧.然后在冰箱内存放3O分钟使药剂充分扩散.将供试菌进行前培养.用打孔器制成直径5毫米菌块,并置于平板另一侧.25±1℃ 培养48~72小时,当分离物具有抗菌活性 时,菌丝扩展受到抑制而形成抑菌带,大体上就是这样吧,我现在也在做这个实验。
抗菌剂的测试
AATCC 100-2012 纺织材料抗菌整理剂的评定 AATCC 90-2011 纺织品抗菌性能测定 琼脂平板法 AATCC 147-2004 织物材料抗菌活性测定:平行条纹法 AATCC 30-2004 纺织材料抗真菌性的评定:纺织材料的防霉防腐性 AATCC 194-2006 纺织品在长期测试条件抗室内尘螨性能的测定 AATCC 174-1998 地毯的抗菌性能评价 ASTM E2149-...
单宁酸 体外实验
2. 抗癌活性 单宁酸在某些体外实验中也显示出抗癌活性。该化合物可以通过抑制癌细胞的增长、诱导凋亡或防止癌细胞的迁移来发挥其抗癌作用。3. 抗炎活性 单宁酸还可以发挥抗炎作用,这意味着它可以减轻炎症反应。在体外实验中,单宁酸可以通过抑制炎症介质的产生来发挥其抗炎作用。4. 抗菌活性 单宁酸还具有...
细菌培养药敏报告中MIC\/RAD的意义。
最小抑菌浓度是指(Minimuminhibitoryconcentration)或(Minimalinhibitionconcentration)的缩写,测定抗菌药物抗菌活性大小的一个指标。指在体外培养细菌18~24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度,该实验通过在Nuns96孔板上进行抗菌培养实验得到测试化合物的抗菌能力大小。
科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白,这种蛋白质具有极强的抗菌能力...
(1)抗菌活性蛋白是一种蛋白质,可利用电泳法分离蛋白质的原理进行分离,其原理是根据蛋白质分子的电荷(带电情况)、大小及形状不同,在电场中的迁移速度不同而实现分离的,分子量越大,其迁移速度越快.(2)金黄色葡萄球菌属于细菌,作为培养细菌的培养基,必须有碳源和氮源,牛肉膏和蛋白胨主要为...
MIC和MBC的区别
1、 定义不同:MIC:最低抑菌浓度,在微生物鉴定的稀释法中以在试管内或小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度。MBC:最低杀菌浓度(MBC),能够杀灭培养基内细菌(即杀死99.9%供试微生物)的最低浓度。2、目的不同:MIC: 测量抗菌药物抗菌活性大小 MBC:测量该微生物对受试药物耐...
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耐药试验简介
稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性,分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时,抗菌药物的浓度通常经过倍比(lg2)稀释,能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度(MIC),一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点(敏感、中介和耐药)的浓度,同时也应该包含质控...
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但进行本试验必须获得病原菌。(四)细菌β内酰胺酶活性测定 不少致病菌能产生β内酰胺酶,后者水解青霉素和头孢菌素结构中的β内酰胺环而使之失去抗菌活性,如金葡菌、淋球菌和流感杆菌等对青霉素G或氨苄西林的耐药性。因此临床实验室在对上述细菌进行药敏试验的同时,检测细菌β内酰胺酶的产生,对临床...
关于防霉和抗菌测试具体有哪些标准
市面上有许多防霉抗菌类产品,大大地提高了人们的生活品质。通过添加防霉剂、抗菌剂等方式,具有抑制霉菌孢子萌发及菌丝体生长的能力,使得其产品具有妨碍细菌(或真菌)生长繁殖及其活性的过程。防霉抗菌检测有CMA资质单位:中科检测 防霉抗菌检测范围:纺织品、高分子材料、塑料及其制品、陶瓷及其制品、木料...
酉待丹泽: 涂板,数菌落数.或者直接用细菌计数板计数.
象州县17565068715: 求细菌平板拮抗实验目的和实验原理,实验器材,实验步骤.... - ?
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象州县17565068715: 抗菌试验所用的细菌应是迟缓期,对数期还是稳定期? - ?
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象州县17565068715: 菌落计数法抗菌实验和粉末抗菌的区别 - ?
酉待丹泽: 平板菌落计数法,是种统计物品含菌数的有效方法.方法如下:将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液涂布到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞;统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数.
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酉待丹泽: 首先对样品进行随机取样25克,放在装有无菌生理盐水225毫升的均质袋中,进行均质,吸取1ml均质液接种平板,需要接种两个平板,然后倾到约15毫升灭菌好并冷却到45度左右的菌落计数琼脂.琼脂冷却凝固后翻转平板进行培养,四十八小时后进行菌落计算.这实际上是因为接种的样品中含有迁徙性生长的细菌,而产生的一种正常现象. 当然,有迁徙性生长的细菌,自然是妨害菌落计数的,因此如果迁徙范围不大没有超过一半,可以计数另一半的菌落总数并乘以二,如果迁徙范围大,只能以其他稀释度来计算了.
象州县17565068715: 供拭菌为酵母菌放线菌或霉菌如何测定抗生素的抗菌活性 - ?
酉待丹泽: 在平板上分别均匀涂布供试菌,然后将沾有一定浓度的抗生素的圆形滤纸片贴在平板上.很稳培养过夜,看抑菌圈大小.
象州县17565068715: 我做微生物的抑菌试验时,用到金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,白色念珠菌三种菌,其中有一步是制菌悬液,要求的浓度是1*10的4次方到9*10的4次方,也就... - ?
酉待丹泽:[答案] 其实很简单,首先,如果你要长期这么做的话,建议你测定一下这三种菌的生长曲线,有了生长曲线之后,你每次只需要进行紫外测定OD值来计算菌液的浓度.具体的要知道某种菌悬液浓度的方法:首先,取一定量菌悬液,测定其OD值,...
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