流式细胞分析

怎样分析流式细胞~

每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布，以直方图的方式来显示。在图中，横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，其单位是道数（channel），可以是线形（line）或者对数（log）。纵坐标一般是相对细胞/粒子数（count）！

流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点。

将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷流式细胞术酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。

流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。

这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，也可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。

检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。

细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。

流式细胞分析是通过分析仪来看的，具体如下：
（一）单参数直方图
　　单参数直方图是一维数据用得最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X-Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同，横坐标可以是线性标度或对数标度。用"信道"来表示，实质上是所测的荧光或散射光的强度。纵坐标一般表示的是细胞的相对数。只能显示一个参数与细胞之间的关系是它的局限性。
　（二）双参数直方图
　　双参数直方图是一种细胞数与双测量参数的图形。常见有以下三种：
　　1.二维点图：能够显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系。横坐标和纵坐标分别为与细胞有关的两个独立参数，平面上每一个点表示同时具有相应坐标值的细胞存在。可以由二维点图得到两个一维直方图，但是由于兼并现象存在，二维点图的信息量要大于两个一维直方图的信息量。所谓兼并就是说多个细胞具有相同的二维坐标在图上只表现为一个点，这样对细胞点密集的地方就难于显示它的精细结构。
　　2.二维等高图：类似于地图上的等高线表示法。它是为了克服二维点图的不足而设置的显示方法。等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等高”。曲线层次越高所代表的细胞数越多。一般层次所表示的细胞数间隔是相等的，因此等高线越密集则表示变化率越大，等高线越疏则表示变化平衡。
　　3.假三维图：是利用计算机技术对二维等高图的一种视觉直观的表现方法。它把原二维图中的隐坐标-细胞数同时显现，但参数维图可以通过旋转、倾斜等操作，以便多方位的观察“山峰”和“谷地”的结构和细节，这无疑是有助于对数据进行分析的。假三维图列表模式其实只是多参数数据文件的一种计算机存储方式，三个以上的参数数据显示是用多个直方图、二维图和假三维图来完成的。
（三）三参数直方图
　　目前，由于计算机软件的发展，很多商品化的软件均提供三参数直方图功能，意指这一类直方图的三维坐标均为参数而非细胞数。这种立体图以点图为显示方式，同样可以作全方位旋转以便仔细观察。
（四）流式细胞仪的多参数分析
　　当细胞标记了多色荧光在流式细胞仪上被激光激发后，所得到的荧光信号和散射信号可以根据需要组合分析以获得所需的信息，这就是流式细胞仪的多参数分析。

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香洲区15041435112： 流式细胞分析 - ？
薄泄尤力： 流式细胞分析是通过分析仪来看的,具体如下:(一)单参数直方图单参数直方图是一维数据用得最多的图形显示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析,形同一般X-Y平面描图仪给出的曲线.根据选择放大器类型不同,横坐标可以是线...

香洲区15041435112： 如何看流式细胞图 - ？
薄泄尤力： 流式的图一般是两种形式.一是柱状图,X轴是信号强度,Y轴是计数.数据通常显示为峰值.比如阴性或者信号弱的峰在左侧,而阳性或者信号强的就位于右侧.柱状图一次只能显示一个通道信号,通常用来判断阳性,阴性的区别或者单个通道信号在不同样本间的变化. 另外一种形式是散点图.就是把两个通道的信号同时显示在图上.优点是由于同时显示两个通道的信号,可以提供比柱状图更多的信息.多色流式样本检测一般都是通过上下级关系的图来显示不同的图.比如在上一级的图中先针对某个细胞群画了个门,然后该门内所有细胞又可以用其他通道的信号显示到另外一个图上进行进一步的分析.

香洲区15041435112： 流式细胞分析术有什么功能? ？
薄泄尤力： (3)流式细胞分析术:用以了解肿瘤细胞分化的一种分化,分析染色体DNA倍体类型、DNA指数等,结合肿瘤的病理类型用以判断肿瘤恶性程度及推测预后.

香洲区15041435112： 流式细胞检测的优缺点分别有哪些? ？
薄泄尤力： 流式细胞检测的优点有: (1)一次可检测数十万个细胞上的多种标记,敏感性高,分析全面. (2)更容易区分良恶性,恶性细胞的系列及成熟度. (3)可帮助确定免疫治疗的靶点并监测疗效. (4)快速、简便、重复性好. 流式细胞检测的缺点有: (1)不能确定组织结构,一些罕见的大细胞难以分析. (2)—些细胞粘附性高,骨髓穿刺难以抽出,无法分析. (3)预后价值不如染色体和基因.

香洲区15041435112： 请问怎样利用流式细胞仪分析细胞存活率、细胞周期和ROS?希望前辈们帮忙, - ？
薄泄尤力：[答案] 1 测定细胞存活率 1.1取对数生长期的细胞,均以4*10 5 /mL 密度接种于6孔细胞培养板上;1.2培养过夜后,用相应药物处理细胞;1.3 消化收集细胞,包括培养液中悬浮的死细胞;1.4 300g离心5 min,去上清;1.5 加1mL PBS缓冲液重悬细胞,再...

香洲区15041435112： 什么是流式细胞术 - ？
薄泄尤力： 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,与传统的荧光镜检查相比,具有速度快、精度高、准确性好等优点,成为当代最先进的细胞定量分析技术.

香洲区15041435112： 如何看流式细胞术结果中的图 - ？
薄泄尤力： 博凌科为解答:FCM数据的存贮的方式是FCS2.0(flow cytometry standard),采用列表排队(List Mode)方式.易于加工处理分析,但缺乏直观性,数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种;由数据还可以做出标准曲...

香洲区15041435112： 医学常识中流式细胞术是指什么呢? ？
薄泄尤力： 流式细胞术是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术.流式细胞仪的发展综合了激光技术、计算机技术、显微荧光光度测定技术、流体喷射技术、分子生物学和免疫学等多门学科的知识.

香洲区15041435112： 流式细胞仪的原理是什么? - ？
薄泄尤力： 流式细胞仪(flow cytometer,FCM)是进行流式细胞分析的仪器,它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论、细胞荧光化学技术及单克隆抗体技术于一体,被誉为实验室的“CT”. 流式细胞术则是一种在功能水平上对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析和分选的检测技术,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术.自1969年第1台流式细胞仪问世,流式细胞术已经发展成为日益完善的细胞分选和分析技术. 生物帮上面有更加详细的介绍,sds-page视频 http://v.bio1000.com/show-844.html