不同细菌感受态制备方式相同吗

电击法制备感受态细胞的方法与化学法的不同点是什么?~

两种方法的原理不同：
电击法: 使用瞬时高压电（数千伏特）处理细胞悬液，微生物细胞膜在高压电的作用下发生去极化，产生微孔，悬液中溶解的核酸即可通过细胞膜上的孔洞进入细胞内部。

化学法：使用低渗溶液处理细胞悬液（0.1M CaCl2），微生物细胞膜结构会发生一些变化，使得细胞在热激时（42度90秒）变得很容易从溶液中摄取DNA。具体机理目前仍然不是十分清楚，但是很有效.

做电击转化时，悬液中有近70%的细胞会因电击而死亡，但是这种方法很直接，转化效率很高。当需要高的转化效率时，比如制作基因文库，可以采用电击转化，另外，做酵母等真核生物转化时一般都是电击。

化学转化法操作简单，不需要特殊设备，转化效率足以满足一般克隆实验的需要，故使用范围非常广。

感受态细胞的制备时的注意事项：
1、培养温度。较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了 Inoue 的高效感受态制备方法，它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一个非常理想方法。
2、在保存感受态时，DMSO 要比甘油的效果要好，它会使感受态的效率增加。
3、液氮速冻也会使感受态的效率提高，因此推荐用液氮速冻感受态，然后保存于超低温冰箱内。
4、冻存的感受态用一次拿一管，不要反复冻融。化冻之后立即使用，不要冰上放太久。
5、操作时可以轻弹轻甩，尽量避免用移液器吹吸。

扩展资料：
感受态细胞（competent cell）：理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。
主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说，使得细胞膜表面出现一些孔洞，便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性，这种孔洞会被细胞自身所修复。

将构建好的载体转入感受态细胞进行表达，不仅可以检验重组载体是否构建成功，最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验，如蛋白质表达纯化等工作。
参考资料来源：百度百科--感受态细胞

不同细菌感受态制备方式相同
方法一：
细菌转化的方法多以Mendel和Higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。
用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞，常用于成批制备感受态细菌。本法适用于大多数大肠杆菌菌株，且迅速、重复性好。操作过程简述如下。
1．从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌DH52），或1ml新鲜的16～20h过夜培养物，转到一个含有100mlLB培养基的1L或500ml烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养约2～3h（旋转摇床200～300r/min），每隔20～30min测量OD600值≈0.4。 2．在无菌条件下将细菌转移到一个，用冰预冷的50ml聚丙烯离心管中，在冰上放置10～20min。
3．于4℃用SorvallGS2转头（或与其离心管相配的转头）以4000r/min离心10min，以回收细胞。
4．倒数培养液，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。 5．以10ml用冰预冷的0.1mMCaCl2重悬每份沉淀，放于冰上。
6．于4℃用SorvallGS3转头（或与其相应的转头）以4000r/min离心10min，以回收细胞。
7．倒出培养液，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。
8．每50ml初始培养物用2ml冰预冷的0.1M CaCl2重悬每份沉定，此时，可以迅速将细胞分装成小份，液氮中冰冻，-70℃贮存备用。
9．用冷却的无菌吸头从每种感受态细胞悬液中各取200μl转移到无菌的微量离心管中，每管加DNA或连接反应混合物（体积≤10μl，DNA≤50ng），轻轻旋转以混匀内容物，在冰中放置30min。
10．将离心管放到预加温到40℃的循环水浴中的试管架上，放置90s～2min，不要摇动试管。
11．快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1～2min。 12．每离心管加800μlSOC培养基，用水浴将培养基加温到37℃，然后将管转移到37℃摇床上，温育45min使细菌复苏，并且表达质粒编码的抗生素抗性标记基因。 13．将适当体积（每个90mm平板可达200μl）已转化的感受态细胞转移到含200mmol/l MgSO4和相应抗生素的SOB培养基上。 14．将平板置于室温至液体被吸收。
15．倒置平皿，于37℃培养，12～16h后可出现菌落。
方法二：
CASsuper One-Step Competent Cell Preps Kit 采用一种简单便捷的方法处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，便于质粒DNA的转化，可满足一般实验的要求。与CaCl2法相比具有多种优点：使用方便，只需一步即可完成感受态细胞的制备；转化效率略高于CaCl2法，一般可达106-108cfu/μg，满足一般实验需要；感受态细胞制成后即可保存于-70℃,无须加入甘油，并且经长期保存活力无明显下降。 准备工作：
1． 从液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌冻存菌，在LB平板上划线，37度过夜至长 出单菌落。挑形态饱满的单菌落2个，分别接种5ml LB培养基中，37℃，250rpm， 过夜培养。
2． 次日从5ml LB培养物吸取200μl转入50ml LB培养基中（250ml 锥形瓶），37 ℃，250rpm培养2小时，此时OD600约0.4—0.5。 感受态细胞的制备：
3． 吸取1ml菌液到1.5ml离心管里，5000rpm离心5分钟，弃去上清。 4． 加入100μl预冷的Solution A，悬浮菌体，冰浴30分钟。 5． 此时感受态细胞已经制成可立即使用或-70℃保存。 细胞转化：
6． 在感受态细胞中加入100pg-10ngDNA，混匀，冰浴30分钟，然后42℃ 1分钟热 击，再次冰浴2 分钟。加入0.9ml LB 培养基，20μl Solution B，37℃，振荡 培养1小时。
7． 取适当菌液（100-200μl）涂布相应抗性的平板。 8． 过夜培养约16个小时，数菌落数，计算转化率。 补充说明：
1． 所用器具一定要清洁；
2． 操作步骤2 中培养基的装量也是很重要的，建议装量不要高于此值：500ml 锥形 瓶装100ml培养基，250ml锥形瓶装50ml培养基；
3． 在收获菌体前半小时还可以在培养基中加入20mM的MgCl2 ，效果会更好一些； 4． 为保证细胞处于对数生长期，培养后的菌体的OD值不要高于0.6； 5． 制备感受态细胞时所有操作尽量保证在冰上操作；
6． 细胞转化操作步骤6中也可以不必进行热击，冰浴后直接加入新鲜LB，简化操作 步骤，但转化效率低于热击方法，适用于对转化率要求不高的实验。
方法三：
1、取1%大肠杆菌E.coli接种于含2ml LB培养基的试管中，37℃振荡培养过夜 2、取0.1ml过夜培养物转种于含10ml LB培养基的三角瓶中，37℃振荡培养3h至OD600=0.3
ml离心管中，冰浴10min。 4、在4℃下以4000rpm离心5min，去上清液

5、把菌体悬浮于15m1冰冷的0.1M CaCl2溶液中，置冰上30min 6、然后再在4℃下以4000rpm离心10min，去上清液
7、将菌体悬浮于0.1ml CaCl2溶液中，冰浴放置4-12hr备用。
方法四：
（1）将1ml过夜培养的细菌（如DH52、TG1、TM101）接种于100ml2×YT培养于500ml
烧瓶。于37℃刷烈振荡，通常≥200rpm培养的细菌密度约OD550=0.2～0.5(5×107
cells/ml),需2～4h。
（2）将培养物放于冰上致冷10min，于4℃离心细菌培养物，10000rpm离心10min。 （3）弃除上清，将细菌悬浮于原始培养体积的一半（约50ml）的50mMCaCl2和10mm Tris·HCl（pH8.0）无菌冷冻液体中。
（4）将细菌悬浮放在冰上约5min，然后将悬浮物于4℃10000/rpm离心10min。
（5）弃上清，悬浮细菌于原始培养体积的1/15的50mMCaCl和10mMTris·HCl（pH8.0）无菌冷冻中。此时的细胞是感受态细胞，即可用于转化。200μl分装于无菌的1.5ml微量离心管中，贮存于-80℃冰箱中。
方法五：
TSB法（也是本人热衷的方法） 1.药品制备
1M Mg2+
(1M MgSO4 和 1M MgCl2等体积混合)，用0.22um滤膜超滤除菌。 TSB液（30mL/ 80mL菌液）（现配现用）： PEG3350 3g Tryptone 0.3g Yeast extract 0.15g NaCl 0.3g 2. 步骤： （1）活化菌株
（2）挑单菌落培养于5mL 的液笨培养基中
（3）取液体培养物50uL于80mL的液体培养基中进行扩大培养
（4）370
C培养3－4小时，OD600在0.4－0.6 （5）离心，去上清
（6）加入20mLTSB，重悬 （7）离心，去上清
（8）加入10mLTSB，再加入15－20%的甘油，分装保存 注，整个操作过程均应在冰上进行。所用药品均需灭菌。
转化程序 （1）取出200μl感受态细胞慢慢使其溶化，并立即放于冰上，加入DNA或连接反应混合物，DNA量通常≤50mg。用手指弹打试管10次，使之混匀，然后放在冰上40～45min。 （2）将管放于42℃水浴中2min。
（3）然后每管直接加入1.0ml2×YT培养基，倒置混匀，并于37℃培养8～12h，干浴或水浴，不需振摇。此期间使细菌生长并开始表达抗菌素。
（4）每200μl转化混合物分别于6个2×YT琼脂培养板上补充相应抗生素，并含有X-gal（20mg/ml）、IPTG（200mg/ml）。

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单县18483658367： 感受态细胞制备步骤6和8中都加入了cacl2目的一样吗?它们的作用分别是什么 - ？
俎的双黄： 不同细菌感受态制备方式相同 方法一:细菌转化的方法多以Mendel和Higa(1970)的发现为基础,其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌,使之进入感受态得以转化.用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞,常用...

单县18483658367： 哪些细菌可以制备感受态 - ？
俎的双黄： 大肠杆菌DH5a 大肠杆菌BL21 这是实验室常用的两种感受态细胞,前者用于扩增质粒,后者用于表达蛋白.

单县18483658367： 感受态细胞的制备时有什么注意事项 - ？
俎的双黄： 感受态细胞的制备时的注意事项: 1、培养温度.较低的温度培养有利于感受态的形成,这样可以获得较高的感受态,但太低又不实用,因而产生了 Inoue 的高效感受态制备方法,它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一 个非常理想...

单县18483658367： 制备感受态的时候,先前的CaCl2重悬细菌,然后再离心,最后在用100 - 200μlCaCl2重悬细菌,即可用于转化,那么先后两步用CaCl2的目的是否一样?不一... - ？
俎的双黄：[答案] 目的一样,但两次可以充分达到制备感受态细胞的效果,造成一个低渗的环境.有条件当然需要超净工作台,但一个酒精灯也够了. 注意事项嘛:保持低温;据分子克隆介绍,做好的感受态细胞在4度冰箱过夜可提高转化效率;分装保存在低温冰箱,...

单县18483658367： 感受态细胞常用的制备方法有哪些? - ？
俎的双黄： 受体细胞经过一些特殊方法 (如:CaCl,RuCl等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) .

单县18483658367： 几种感受态细胞制备 的效果比较 - ？
俎的双黄： 现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状.将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养,即可筛选出转化子(Transformant,即带有异源DNA 分子的受体细胞).目前常用的感受态细胞制备方...

单县18483658367： 感受态细胞是如何制备的？
俎的双黄： 1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟. 2、 弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟. 3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液. 4、 感受态细胞分装成200μl的小份,贮存于-70℃可保存半年.

单县18483658367： 常用感受态细胞制备方法有哪些?？
俎的双黄： 最常见的是CaCL2法,后来经过改良,很多实验室都在使用TFB或者FB法.就是对处理溶液添加了很多微量离子提高感受态效率.具体试剂可以再百度一下

单县18483658367： 制备感受态细胞的关键是什么 - ？
俎的双黄： 制备感受态细胞的关键是将外源DNA分子引入受体细菌,使之获得新的遗传性状. 主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞.由于细胞膜的流动性,这种孔洞...

单县18483658367： CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞原理? - ？
俎的双黄： 原理:转化:将外源DNA分子引入受体细菌,使之获得新的遗传性状. 受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株,不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-,M-),可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代.受体细胞经过一些特...