为什么用trizol试剂提取玉米胚乳时,在加入氯仿,离心后,上清是冻状的呢?
少吸点,够用就行。
上层无色,接近透明色的为RNA;中层白色(很薄)的为DNA;下层红色的为蛋白质.基本的层次和颜色是这样的,但是植物材料考虑到色素的问题,颜色会有细微的差异.三相中DNA最薄,另外两相差不多,RNA相比蛋白质厚一点.
冻状是什么意思?果冻状的?我用trizol提取过很多类型的RNA,但是没碰到过这种情况。不过你先加入氯仿后有没有剧烈震荡?或者是你的样品量太多了,1ml的trizol不要超过100ug样品TRIZOL使用方法
TRIZOL使用方法详解:首先,准备样品,对于富含蛋白质、脂肪和多糖的样本,可能需要额外的分离步骤。使用匀浆器将组织磨碎,然后在2-8°C条件下以12,000×g离心10分钟,去除不溶解物质,得到的沉淀包含细胞外膜和高分子量DNA,而上层清液中含有RNA。对于脂肪组织,需去除最上层的脂肪层。接着进行分离阶段...
TRIzol的作用机理是什么?
1、TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚得到释放。2、苯酚虽可有效地变性蛋白质,但不能完全抑制RNA酶活性,因此TRIzol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(RNA酶)。
提取总RNA时用Trizol裂解细胞,而不像提DNA那样用表面活性剂SDS、CTAB裂 ...
TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIzol在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,因此对纯化DNA及标准化RNA的生产十分有用。CTAB为十六烷基三甲基溴化铵,CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl (pH8....
thermo Trizol 裂解液
TRIzol 超级裂解液:分子生物学家的信赖之选 Invitrogen的TRIzol裂解液凭借其在数万篇科研文献中的广泛引用,证明了其在分子生物学领域的卓越性能。这款高效试剂不仅适用于各种生物源材料,如人类、动物、植物、酵母和细菌,甚至包括病毒,旨在提供高质量、完整无损的RNA提取解决方案。适用于的原始样本类型包括...
用trizol法提取RNA的方法及每一步的原理.
1、 TRIZOL 主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质,但不能完全抑制RNA酶活性,因此TRIzol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(RNA酶)。TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂,在...
怎样用TRIzol 法提取动物血清总RNA
1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol。注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管,用手剧烈摇荡离心管15秒,静置5min,12,000rpm离心5min。3、...
trizol可以用来提取植物组织叶片总RNA吗?毒性如何?
操作相对麻烦些时间长,也需要去DNA污染。里面含有大量毒性物质,尤其是苯环类的,易挥发的苯酚。切忌戴口罩,手套,遮眼睛等。华越洋自主研发的植物RNA提取试剂盒,10多分钟完成一个样品的提取,而且绝对无DNA污染。同时也销售自产和代理invitrogen的TRIZOL。希望有用得到的朋友,前来咨询。
请教用TRIZOL提取RNA
b. 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。c. 细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞...
TRIzol法提取RNA每个步骤的作用是什么?
TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中间层可回收DNA;用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。
trizol成分作用是什么
在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用。1. 提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进...
端木贴独圣:[答案] 冻状是什么意思?果冻状的?我用trizol提取过很多类型的RNA,但是没碰到过这种情况.不过你先加入氯仿后有没有剧烈震荡?或者是你的样品量太多了,1ml的trizol不要超过100ug样品
雷州市18048196780: 动物RNA的提取 - ?
端木贴独圣: RNA的提取 一、准备试剂: 氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制). 二、操作步骤: 1. 匀浆处理: a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理....
雷州市18048196780: trizol成分作用是什么 - ?
端木贴独圣: 在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA制备工作.若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜.在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免...
雷州市18048196780: trizol可以用来提取植物组织叶片总RNA吗?毒性如何? - ?
端木贴独圣: 华越洋生物为你解答:是的,可以.不过比试剂盒提出来粗糙些,操作相对麻烦些时间长,也需要去DNA污染.里面含有大量毒性物质,尤其是苯环类的,易挥发的苯酚.切忌戴口罩,手套,遮眼睛等.华越洋自主研发的植物RNA提取试剂盒,10多分钟完成一个样品的提取,而且绝对无DNA污染.同时也销售自产和代理invitrogen的TRIZOL.希望有用得到的朋友,前来咨询.
雷州市18048196780: 做实时定量pcr需要哪些试剂? - ?
端木贴独圣: 1.提取mRNA所需试剂: (1)Trizol,很多公司都有卖的,可以看你们实验室经常购买的公司是哪种,问公司技术员; (2)异丙醇、无水乙醇、氯仿; (3)RNase-free水,或DEPC处理水; 2.逆转录所需试剂: 一般使用现成的逆转录试剂盒,要实时定量PCR专用的.TAKARA公司的DRR036和DRR037就不错. 3.实时定量PCR所需试剂: 使用现成的实时定量PCR试剂盒.TAKARA公司和TOYOBO公司都有很多种,具体的要看你的实验要求,可以咨询对应公司技术员.
雷州市18048196780: 请问Trizol试剂提取RNA相关问题,请问下为什么在Trizol试剂提取RNA时,加入氯仿离心后RNA在上层水相,DNA在中间层,蛋白质在下层有机相,但用... - ?
端木贴独圣:[答案] 我记得是pH值的关系 不过也没那么严格,实际上提取RNA后如果可能,还是需要一步加入DNase消化的过程
雷州市18048196780: 提取RNA的实验中各个试剂的作用是什么?如果RNA的提取过程中有杂质是何原因? - ?
端木贴独圣:[答案] 氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离.DNA提取过程 有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和DNA脱离,DNA进入水相.但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离,否则DNA会释...
雷州市18048196780: 为什么trizol提不出来rna - ?
端木贴独圣: trizol提不出来rna的原因有可能是以下原因: 1)你的Trizol试剂核有无问题? 2)研究材料是否新鲜,RNA容易降解,应妇80度保存. 3)如果都没问题,你的操作有无问题? trizol提取rna的步骤:(仅供参考) 用户需自备的试剂和材料 无水乙...
雷州市18048196780: 怎么提取RNA? - ?
端木贴独圣: 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~
雷州市18048196780: trizol和试剂盒提rna的区别 - ?
端木贴独圣: trizol和试剂盒提rna的区别 目的掌握RNA提取的基本技术,了解RNA提取过程中的各种注意事项.二、原理RNA提取是分子生物学实验中难度较大的实验技术.RNA提取和DNA提取有类似的地方,因为它们都是核酸,都具有较好的水溶性.提取RNA首先破碎细胞,然后用提取液将RNA溶出,反复抽提去除蛋白质 ……