为什么得到单克隆抗体时,要进过两次筛选

作者&投稿:局徐 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选?~

第一次筛选:

(1)筛选对象:脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞(即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液)。另有少量多细胞聚体,因寿命短而迅速死亡,故无需特殊筛选。

(2)筛选方法:用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。(注重:HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路,而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。)

(3)筛选结果:脾-瘤细胞正常生长,其它细胞都会死亡。(析因:脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,虽有核酸合成的旁通路,但不能长期增殖;瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶,核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断,因核酸合成障碍而死亡;脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶,虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。)

第二次筛选:

(1)筛选对象:多克隆杂交瘤细胞群体。(即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。)

(2)筛选方法:抗体检测( 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等,实际上是利用稀释法,在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养,然后检查每孔中产生特定抗体的能力)。

(3)筛选结果:产生专一性抗体的杂交瘤细胞。

两次。
第一次是筛选出杂交瘤细胞,第二次是筛选出能产生特异抗体的杂交瘤细胞。

第一次筛选是排除B-B,癌细胞-癌细胞的情况,留下B和癌细胞结合的细胞;

第二次筛选时检测基因能否表达。

有的单抗实验效果未达到要求。做个筛选优胜劣汰


为什么涂板后得到的是单克隆
1、每个细胞都被分离开来。涂板可以确保每个细胞都独立地沉积在载体上,避免了不同细胞之间的杂交和杂交瘤的形成,从而得到单克隆抗体。2、能够提供足够的抗原。涂板后由于抗原在固相载体上被均匀地涂布,单克隆前体细胞可以很容易地接触到足够的抗原,从而刺激它们产生单克隆抗体。

制备单克隆抗体为什么不用浆细胞而用B淋巴细胞?
如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体,称为单克隆抗体。要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞,但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖,...

抗体的制备有哪些?
杂交瘤技术是制备单克隆抗体的经典方法。它通过将免疫小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞融合,得到能分泌单一特异性抗体的杂交瘤细胞。通过克隆和筛选,可以获得大量分泌特定抗体的杂交瘤细胞,从而制备出高特异性和高纯度的单克隆抗体。这种技术已广泛应用于医学诊断、免疫治疗和基础研究等领域。基因工程抗体技术是近年...

备单克隆抗体的途径
骨髓瘤细胞能无限增殖,B细胞能产生单一性抗体;诱导动物细胞融合通常用灭活的病毒;过程②至少需要2次筛选才能得到X细胞,第一次筛选获得杂交瘤细胞,第二次筛选获得能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞. (2)④为逆转录过程,

高中生物!制备单克隆抗体原理?要准确
用动物细胞融合的方法将b细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞 3.用特定的选择性培养基筛选出能够无限增殖并产生特异性抗体的杂交瘤细胞 4.进行体内或体外培养。体内培养就是将杂交瘤细胞注入实验动物腹腔,将来从腹水中提取。体外培养,就是利用动物细胞培养的方法,将来从培养液中提取 单克隆抗体的优点是:...

制备单克隆抗体过程中要用到那些技术
制备单克隆抗体主要是要得到杂交瘤细胞,杂交瘤细胞是免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞杂交得到的,所以这里利用了动物细胞培养、动物细胞融合,然后就是对杂交瘤细胞的筛选,这里就没有什么技术了!

单克隆抗体的制备步骤
3、选择性培养:选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基。4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化:在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。5、单克隆抗体的大量制备:...

单克隆抗体制备原理
首先取几只健康的老鼠,让它感染,然后从它的血液中提出效应淋巴细胞 然后用电击法让他们融合。然后把这些细胞放在选择培养基上培养。这就得到了相应的细胞 最后把这些细胞防在小老鼠体内。就可得到干扰素单克隆抗体 这种细胞有效应淋巴细胞与骨髓瘤细胞的基因,所以即能分泌干扰素,又能无限繁殖。

检验技师考点:单克隆抗体的制备原理
二.应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,得到杂交瘤细胞。这种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性 三.对杂交瘤细胞进行细胞培养,选出所需要的细胞群,体外或体内培养,从培养液或动物腹水中提取单克隆抗体 单克隆抗体的提纯 一般常用金黄色葡萄球菌...

什么是单克隆抗体?
只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。4.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法...

鹿泉市19261015961: 在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选 -
魏卫超肽: 第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞

鹿泉市19261015961: 为什么植被单克隆抗体要经过两次筛选 -
魏卫超肽: 第一次是筛选出杂交瘤细胞;但这些杂交瘤细胞中有些是不能产生抗体的,还有些是不能产生我们需要的抗体的; 第二次就要筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞.

鹿泉市19261015961: 为什么植被单克隆抗体要经过两次筛选 -
魏卫超肽: 第一次是筛选出杂交瘤细胞;但这些杂交瘤细胞中有些是不能产生抗体的,还有些是不能产生我们需要的抗体的;第二次就要筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞.

鹿泉市19261015961: 细胞工程中,制备单克隆抗体时,需要经过三次筛选检测,这三次的目的是什么? -
魏卫超肽:[答案] 记得只经过两次筛选 第一次是筛选杂交瘤细胞 第二次是筛选能够产生单一抗体的杂交瘤细胞 当筛选完毕就可以进行体内或体外培养了

鹿泉市19261015961: 在单克隆抗体中,为何需要多次检测细胞阳性,有何目的 -
魏卫超肽: 在单克隆抗体中,为何需要多次检测细胞阳性, 检测阳性,就是能产生特定抗体的杂交瘤细胞. 杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化.通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养.采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增.经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存.

鹿泉市19261015961: 制备单克隆抗体过程,是需要两次筛选还是三次筛选?为什么? -
魏卫超肽: 两次. 第一次是筛选出杂交瘤细胞,第二次是筛选出能产生特异抗体的杂交瘤细胞.

鹿泉市19261015961: 单克隆抗体两次筛选的理由? -
魏卫超肽: 第一2113次:筛选出AB型细胞(A:浆细胞,B:骨髓瘤细胞),不要AA、5261BB型. 第二次:筛选出有特异性的4102杂交瘤细胞,检验阳性.单克隆细胞特点:1653灵敏度高、特异性强、可大量制备 杂交瘤细胞特点:能体外大版量繁殖....忘记了...详细请看人教版生物权选修三

鹿泉市19261015961: 单克隆抗体的第二次筛选 -
魏卫超肽: 筛选出有特异性的杂交瘤细胞,因为第一次筛选出的基因虽然对的,但不一定表达.

鹿泉市19261015961: 单克隆抗体需哪2次筛选? -
魏卫超肽: 第一次筛选是在两细胞融合后 目的是选出符合要求的杂交瘤细胞 而第二次筛选则是在杂交瘤细胞培养后 此次筛选则是为了选出能产生符合要求的单一抗体的杂交瘤细胞 就是这样 这些内容在高三生物课本第七十二页有详细叙述

鹿泉市19261015961: 利用细胞………单克隆抗体时有两次筛选,第一次筛选的目的是?第二次筛选的目的? -
魏卫超肽: 第一次获得杂交细胞,第二次获得可以产生抗体的杂交细胞.

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