高相液相色谱法的原理，它的流动相的作用是什么

高效液相色谱分析法的原理是什么？~

高效液相色谱分析原理：
（一）高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。
（二）高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。
不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

高效液相色谱原理大多是分配色谱，就是说样品被固定相（柱子填料）吸附以后，在流动相洗脱过程中，样品的极性不同，在流动相中溶解的浓度也不同，有的可以互溶，有的不容，有的有一定溶解度。就可以根据这个原理进行分离。

流动相的选择与注意事项1.流动相性质（1）液相色谱的流动相根据作用可分为底剂和洗脱剂。底剂决定基本的色谱分离情况，洗脱剂对某几个组分选择分离。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。正相柱的底剂用低极性溶剂，洗脱剂则选用极性较强的针对性溶剂。（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。反相柱通常以水为流动相的主体，再加入不同配比的有机溶剂做调节剂。

高效液相色谱原理大多是分配色谱，就是说样品被固定相（柱子填料）吸附以后，在流动相洗脱过程中，样品的极性不同，在流动相中溶解的浓度也不同，有的可以互溶，有的不容，有的有一定溶解度。就可以根据这个原理进行分离。

原理简单来说就是利用流动相带动样品在柱子的固定相的不断吸附和解析，由于不同的物质与固定相的吸附解析能力不同，从而达到把样品分离的作用！
流动相主要起到运载样品的作用，同时他和固定相的的作用也起到分离的作用

不同的样品洗脱体积是不同的，以保留时间计算，大概在7min-15min出峰为宜，当然这是对单一样品来说的，如果目标峰或干扰峰较多，则首先要考虑的是分离度。这样计算的话（1ml/min的流速），一个样品大概需要10-20ml的流动相，另外色谱柱的平衡也需要消耗流动相。

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巫溪县17036647369： 高效液相色谱法的原理是什么? - ？
狄艺罗立：[答案] 转载自分析测试百科网:“高效液相色谱仪结构及原理”高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术上,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9´107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填...

巫溪县17036647369： 高效液相色谱的原理及分析方法 - ？
狄艺罗立： 分析色谱图 手动进样步骤 配置好流动相,将滤嘴洗头放入流动相页面内,打开泵和检测器,快跑排除气泡,设置既定流速,稳定一段时间,让基线跑平,用液相针吸取称量融配脱气后的对照(含量已标定),打开定量环将液相针里的液体匀速...

巫溪县17036647369： 高效液相色谱法怎么描述 - ？
狄艺罗立： 高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等.高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析.该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术

巫溪县17036647369： 高效液相的工作原理及使用 - ？
狄艺罗立： HPLC是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析.

巫溪县17036647369： 高效液相色谱分析法的原理是什么? - ？
狄艺罗立： 用一句话概括叫:相似相溶. 具体的是这样描述:由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统,然后输出,经流量与压力测量之后,导入进样器.被测物由进样器注入,并随流动相通过色谱柱,在柱上进行分离后进入检测器,检测信号由数据处理设备采集与处理,并记录色谱图.废液流入废液瓶

巫溪县17036647369： 高效液相色谱仪是以什么为流动相 - ？
狄艺罗立： 干净,没有小颗粒,以免堵塞色谱柱. 对样品有合适的洗脱作用,这个要进行测试.还有就是在检测器上的响应不应该干扰样品的检测. 其他要求就是柱子的要求了,在一定范围的pH内,流动相的极性,这些在色谱柱的说明书上都会有写明,可以参照执行.

巫溪县17036647369： 请帮忙介绍高效液相色谱原理？
狄艺罗立： 1、采用高效液相色谱(HPLC)法分离单糖和寡糖,较多采用氨基柱,乙腈和水作为流动相,此法具有完全分离麦汁、发酵液和啤酒中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和麦芽三糖的优点.本文采用HypersilNH2柱分析麦汁、发酵液和啤酒中三糖...

巫溪县17036647369： 高效液相色谱仪的原理谁知道? - ？
狄艺罗立： 高效液相色谱仪的系统组成、工作原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成.储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来.

巫溪县17036647369： 高效液相色谱法中样品稀释为什么选用流动相 - ？
狄艺罗立： 不一定非要使用流动相稀释,甲醇,乙腈,水等都可以,主要看测的什么物质,选用流动相稀释主要目的应该是减少溶剂的冲击,实际上每次进样几微升,这点溶剂的冲击几乎可以忽略不计.

巫溪县17036647369： 反相高效液相色谱的固定相是什么,流动相有什么什么? - ？
狄艺罗立：[答案] 反相即指流动相极性比固定相大的液相色谱法 同一根柱子,可能是正相,也可能是反相,例如安捷伦 ZORBAX CN柱,用正己烷-异丙醇作流动相就是正相HPLC,用水-甲醇/乙腈就是反相HPLC 固定相一般是非极性的,如十八硅烷C18