求助一份莱克多巴胺试剂盒说明书

莱克多巴胺检测用什么提取液最好~

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如果你是HRP的二抗，显色液A、B的成分一般是H2O2和TMB（或OPD），至于具体A是那一个B是那一个你要看说明书。
HRP催化过氧化物H2O2，其反应式如下：D＝TMB（或OPD）
DH2+ H2O2＝ D+2H2O
上式中，DH2为供氧体，H2O2为受氢体。在ELISA中，DH2一般为无色化合物，经酶作用后成为有色的产物，以便作比色测定。

莱克多巴胺(Ractopamine)快速检测试剂盒说明书
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿和猪肝等样本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被上偶联抗原，样本中的莱克多巴胺将和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含莱克多巴胺量成负相关，与标准曲线比较即可得出莱克多巴胺含量。

一、概要简介
莱克多巴胺（Ractopamine）属于beta兴奋剂， β-兴奋剂是营养重分配剂一种，是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上 腺素的苯乙醇胺类衍生物，它可以加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率。在欧盟β-兴奋剂已被禁止用于家禽的生长促进剂，我国在《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中也有明文规定， 但由于莱克多巴胺属于非处方药，且价格远低于克仑特罗，因此其非法应用者不断增多。我公司研制的莱克多巴胺ELISA快速检测试剂盒可用于动物组织、饲料、尿液中莱克多巴胺的残留检测。
试剂盒特性：
试剂盒灵敏度 0.5ppb
样本回收率：
尿样…………………………… 80%±10%
肌肉肝脏……………………… 75%±10%
饲料…………………………… 60%——120%
交叉反应率：
莱克多巴丁胺 ………………………22.3%
二、试剂盒组成
1、 96孔板酶标板 X 1块
2、 标准液X6瓶,800l/瓶，为Ractopamine水溶液 ： 0ng/ml, 0.5ng/ml，1.5ng/ml, 4.5ng/ml,13.5ng/ml,40.5ng/ml
3、酶标记物12ml ………………………………红色帽
4、Ractopamine抗体 7ml…………………………绿色帽
5、底物液 A液 7ml………………………………白色帽
6、底物液 B液 7ml………………………………红色帽
7、终止液 7ml………………………………黄色帽
8、20倍浓缩洗涤液 40ml…………………………透明帽
9、4倍浓缩复溶液50ml …………………………透明帽

三、操作步骤
样本处理
检测室须具备的仪器：
——均质器
——振荡器
——离心机
——20l，50l，100l，200l微量加样器
试剂
——甲醇
——乙醇
——二氯甲烷
配液：
buffer 1：
无水Na2CO3 48g
NaCL 15g
去离子水 100ml
1 尿样本处理
尿样不用处理，清亮尿样，用试剂盒提供的缓冲液以1：10倍稀释后，取50l进行测定，暂不使用的样品应冷冻保存。
注：样本被稀释了10倍，尿液中检测下限为10ppb（因部份样本存在一定的杂质干扰）
2 组织样本
1）称取组织3g±0.1g ，加入无水乙晴9ml， 充分振荡10min。
2) 3000g ，15℃以上离心10min 。取上清夜3ml.在氮气流下吹干。
3）加入（buffer 1） 1ml混合后，加入3ml异丁醇振荡萃取5min，3000g ，15℃以上离心5min，取出上层有机相，再加入3ml异丁醇振荡萃取5min 。合并两次萃取的有机相，氮气流下吹干。
4）用2ml 已稀释了的复溶液溶解，取50l进行分析。
注：样本被稀释了2倍，检测下限为1ppb
3 饲料样本
1）准确称取2.0±0.1g饲料于40ml离心管中。
2）加入10ml甲醇:乙醇（1:1；V/V），充分振荡10min， 4000rpm离心10min。
3）取上清2ml，氮气吹干。
4）加入1ml二氯甲烷，溶解残留物，再加入1ml 复溶液，充分混合5min，10000rpm离心10min，取上层液用试剂盒提供的缓冲液根据饲料的种类来进行不同倍数的稀释。
配合料按1：10倍稀释，浓缩料、预混料按1：30倍进行稀释，然后取50l用于ELISA分析。
注： 配合料被稀释了50倍。检测下限为25ppb
浓缩料、预混料被稀释了150倍.检测下限75ppb

四、酶标免疫分析程序
1、将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从盒中取出，置于室温（20-24℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用蒸馏水或去离子水稀释至800ml备用。（按需量稀释）
3、取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃不要冷冻。
4、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做2孔。
5、用加样器每孔加标准品或样本50l 后，每孔再加50l抗体溶液。
6、用盖板膜盖板后置于25℃环境反应1h。
7、小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液每孔250l充分洗涤4－5次，每次间隔15－30秒，用吸水纸拍干。
8、加酶标记物：每孔加入100l。用盖板膜盖板后置25℃
环境反应30min，取出重复第7步。
9、显色：每孔加入底物液A液50l，再加底物液B液50l，轻轻振荡混匀25℃环境避光显色30min。
10、测定：每孔加入终止液50l，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测定每孔OD值。
四、结果
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含莱克多巴胺量成负相关。
1、用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样品1的吸光度值为0.301, 样品2的吸光度值为0.812, 标准品吸光度值分别是：0ng/ml为1.500；0.5ng/ml为1.280；1.5ng/ml为1.080； 4.5ng/ml为0.710； 13.5ng/ml为0.405；40.5ng/ml为0.250。则样品1的浓度范围是13.5ng/ml-40.5ng/ml; 样品2的浓度范围是1.5ng/ml-4.5ng/ml。
2、所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B
百分吸光度值（%）＝ — ×100%
B0
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值
以莱克多巴胺浓度(µg/L)的自然对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度(µg/L)可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法，计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软件，更便于大量样品的快速分析。
五、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及标本没有回到室温（20-24度）会导致所有标准的OD值偏低（非常关键）。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。（非常重要）
3、混合要均匀，洗板要彻底，在EIA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性（非常重要）。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度的降低。不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。
0标准的吸光度 （450/630nm）值小于0.5个单位（A450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。

http://www.instrument.com.cn/show/download/shtml/007939.shtml

上面网址有 说明书下载

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瓜州县15814132807： 常用的快速检测试剂盒有哪些? - ？
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瓜州县15814132807： ELISA试剂盒冷冻后可以使用吗？
妫季阿莫： 这个还是要看的,试剂盒拆分后,里面的试剂都是有 温度标识的,如果错放了就不一定好用的

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妫季阿莫： 试剂盒的假阳性几率不是太大,跟公司产品质量关系最大.目前国内的主要用绿诗源品牌的,性价比高;国外的基本用拜发

瓜州县15814132807： 莱克多巴胺酶联法试剂盒检测中尿样中抗原为什么会优先酶标抗原与包被抗体结合? - ？
妫季阿莫： 不是优先,尿样中的酶标抗原与抗体是一种平等的竞争关系.

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妫季阿莫： 深圳市三方圆的这款盐酸克伦特罗酶联试剂盒是通过了国家备案的,除了这款产品,还有莱克多巴胺酶联试剂盒、孔雀石绿酶联试剂盒等. 这个你可以上网上查到的.