怎样检测PI3K激活

请教有关PI3K/AKt信号通路~

经典信号通路之PI3K/AKT信号通路
The PI3K/AKT and related pathways are important in internalizing the effects of external growth factors and of membrane tyrosine kinases. Activation of membrane kinases including epidermal growth factor receptor (EGFR) by external growth factors initiates receptor dimerization and subsequent events to activate these intraCell ular pathways. AKT is activated downstream of PI3K and has multiple targets. AKT and the cellular energy sensors LKB1 (STK11) and AMP-activated protein kinase (AMPK) exert opposing effects on mammalian target of rapamycin (mTOR), which is activated by AKT. ERK, extracellular signal regulated kinase; FKHR, forkhead; GDP, guanosine diphosphate; IRS, insulin receptor substrate; GSK3, glycogen synthase kinase 3; MAPK, mitogen-activated protein kinase; NF-B, nuclear factor-B; PIP2, phosphatidylinositol-3,4-diphosphate; PIP3, phosphatidylinositol-3,4,5-triphosphate; PKC, protein kinase C; STAT, signal transducer and activator of transcription.&NBS p;
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)信号参与增殖、分化、凋亡和葡萄糖转运等多种细胞功能的调节. 近年来发现, IA型PI3K和其下游分子蛋白激酶B(PKB或Akt)所组成的信号通路 与人类肿瘤的发生发展密切相关. 该通路调节肿瘤细胞的增殖和存活, 其活性异常不仅能导致细胞恶性转化, 而且与肿瘤细胞的迁移、黏附、肿瘤血管生成以及细胞外基质的降解等相关, 目前以PI3K-Akt信号通路关键分子为靶点的肿瘤治疗策略正在发展中.
在PI3K家族中, 研究最广泛的是能被细胞表面受体所激活的I型PI3K. 哺乳动物 细胞中Ι型PI3K又分为IA和IB两个亚型, 他们分别从酪氨酸激酶连接受体和G蛋白连接受体传递信号.IA 型PI3K是由催化亚单位p110和调节亚单位p85所组成的二聚体蛋白, 具有类脂激酶和蛋白激酶的双重活性.PI3K通过两种方式激活, 一种是与具有磷酸化酪氨酸残基的生长因子受体或连接蛋白相互作用, 引起二聚体构象改变而被激活; 另一种是通过Ras和p110直接结合导致PI3K的活化. PI3K激活的结果是在质膜上产生第二信使PIP3, PIP3与细胞内含有PH结构域的信号蛋白Akt和PDK1(phosphoinositidedependentkinase-1)结合, 促使PDK1磷酸化Akt蛋白的Ser308导致Akt的活化. Akt还能通过PDK2(如整合素连接激酶ILK)对其Thr473的磷酸化而被激活.活化的Akt通过磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白Bad 、Caspase9、NF-κB、GSK-3、FKHR、 p21Cip1和p27 Kip1等, 进而调节细胞的增殖、分化、凋亡以及迁移等.
PI3K-Akt信号通路 的活性被类脂磷酸酶PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)和SHIP(SH2-containing inositol 5-phosphatase)负调节, 他们分别从PIP3的3´和5´去除磷酸而将其转变成PI(4,5)P2和PI(3,4)P2而降解. 迄今为止, 尚未发现下调Akt活性的特异磷酸酶, 但用磷酸酶抑制剂处理细胞后, 发现Akt的磷酸化和活性均有所增加. 最近发现Akt能被一种C末端调节蛋白(CTMP)所失活, CTMP能结合Akt并通过抑制Akt的磷酸化而阻断下游信号的传递, CTMP的过表达能够逆转v-Akt转化细胞的表型. 热休克蛋白90(HSP90)亦能结合Akt, 阻止Akt被PP2A磷酸酶的去磷酸化而失活, 因此具有保护Akt的作用.
本信号转导涉及的信号分子主要包括
Integrin，FAK，Paxillin，ILK，PIP3，S6，p70S6K，RTK，Gab1，Gab2，IRS-1，PI3K，PTEN，AKT，PDK1，Cytokine Receptor，Jak1，CD19，BCR，Ag，BCAP，Syk，Lyn，GPCR，TSC1，TSC2，Gβγ，GαGTP，PP2A，PHLPP，CTMP，PDCD4，4E-BP1，ATG13，mTORC1，TSC1，TSC2，PRAS40，XIAP，FoxO1，Bim，Bcl-2，Bax，MDM2，p53，Bax，Bad，14-3-3，Wee1，Myt1，p27Kip1，p21Waf1/Cip1，CyclinD1，GSK-3，GS，Bcl-2，mTORC2，LaminA，Tpl2，IKKα，eNOS，GABAAR，Huntingtin，Ataxin-1，PFKFB2，PIP5K，AS160等。

TAT 2012）在荷兰首都阿姆斯特丹召开。TAT2012是欧洲肿瘤内科学会（ESMO）官方合作会议，由阿姆斯特丹NDDO教育基金会赞助，美国国立癌症研究所（NCI）协办。　　磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）通路常被发现在肿瘤患者中被激活，它在肿瘤进展和对抗肿瘤药物（包括细胞毒类化疗药和靶向药物）耐药方面发挥重要作用。影响该通路关键组成部分的分子畸变有几种，其中包括基因突变和扩增（PIK3CA、AKT）以及负调控因素功能丧失（PTEN）。　　PI3K通路抑制剂仍处于临床研发早期阶段，它们包括：（a）单纯pan-PI3K抑制剂；（b）双靶点PI3K/mTOR抑制剂；（c）AKT抑制剂；（d）mTOR复合物1和2抑制剂；（e）PI3K亚型特异性抑制剂。研究已经在多种类型肿瘤（乳腺癌、妇科肿瘤、前列腺癌、肺癌、间皮瘤、肉瘤和淋巴瘤）中发现这些抑制剂可使肿瘤部分缓解，延长疾病稳定期，但效果不及预期。　　药效动力学（PD）研究表明，降低肿瘤和相关组织关键通路的激活水平，可显著降低增殖标志物水平和FDG-PET显示的摄取值，从而证明靶标被击中。相关临床益处并不局限于PI3K通路激活的肿瘤患者，PD标志物也未被发现有明确的预测价值。　　需要强调的是，基于临床前研究，PI3K通路抑制剂对癌基因控恶性肿瘤（例如携带PIK3CA和PTEN突变）的抗肿瘤活性仍不清楚。但是，当前已经清楚的是，抑制PI3K通路可导致代偿性受体酪氨酸激酶兴奋和适应性负反馈，从而证明癌基因网络的适应性能力。因此，今后关于PI3K通路抑制剂的研究应聚焦于联合治疗策略，包括联合BRAF、MEK、EGFR和HER2抑制剂等靶向制剂。在联合用药研究中弄清PI3K通路抑制剂发挥的作用至关重要。如果研究结果发现PI3K通路抑制剂缺乏临床活性，但原因是通路未能被有效地抑制，研究者应当改良用药剂量和方案，前提是毒性反应可以耐受。相反，如果是别的原因，就应当在肿瘤生物学研究上下大功夫。这些研究是值得期待的。

检测PI3K信号通路的激活程度，一般都是western Blot或者免疫组化的方法，检测anti-pAkt（Ser473）或者anti-pAkt （Thr308），这两个磷酸化位点都行，都能说明问题，你要是经费充足的话，可以两个都做。
至于你说的“还有，需要anti-Akt进行对照 吗？”，怎么还进行对照？是这样：Akt磷酸化以后才有活性，所以你要是经费有限，可以只检测pAkt的水平，这样也能说明问题，也能发文章。但是要是想 把实验做得完善的话，还是应该加上Akt的总体蛋白水平。大部分文章还是把总蛋白和磷酸化蛋白都来检测的，这样比较完善。

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博野县19258514926： pi3k基因检测哪里做? - ？
颜韦羚羊： 用户你好答案如下满意请采纳:检测PI3K信号通路的激活程度,一般都是western Blot或者免疫组化的方法,检测anti-pAkt(Ser473)或者anti-pAkt (Thr308),这两个磷酸化位点都行,都能说明问题,你要是经费充足的话,可以两个都做.至于你说的“还有,需要anti-Akt进行对照 吗?”,怎么还进行对照?是这样:Akt磷酸化以后才有活性,所以你要是经费有限,可以只检测pAkt的水平,这样也能说明问题,也能发文章.但是要是想 把实验做得完善的话,还是应该加上Akt的总体蛋白水平.大部分文章还是把总蛋白和磷酸化蛋白都来检测的,这样比较完善.

博野县19258514926： 检测磷酸化PI3K水平到底能用western 么 - ？
颜韦羚羊： 检测PI3K信号通路的激活程度,一般都是western Blot或者免疫组化的方法,检测anti-pAkt(Ser473)或者anti-pAkt (Thr308),这两个磷酸化位点都行,都能说明问题,你要是经费充足的话,可以两个都做. 至于你说的“还有,需要anti-Akt进行对照 吗?”,怎么还进行对照?是这样:Akt磷酸化以后才有活性,所以你要是经费有限,可以只检测pAkt的水平,这样也能说明问题,也能发文章.但是要是想 把实验做得完善的话,还是应该加上Akt的总体蛋白水平.大部分文章还是把总蛋白和磷酸化蛋白都来检测的,这样比较完善. 本回答由电脑中国络分类达人 郭强推荐

博野县19258514926： PI3K/Akt通路中,Akt和p - AKt抗体选择求助 - ？
颜韦羚羊： PI3K/Akt通路中,Akt和p-AKt抗体选择求助 检测PI3K信号通路的激活程度,一般都是western Blot或者免疫组化的方法,检测anti-pAkt(Ser473)或者anti-pAkt (Thr308),这两个磷酸化位点都行,都能说明问题,你要是经费充足的话,可以两个都做. 至于你说的“还有,需要anti-Akt进行对照

博野县19258514926： 抑制剂筛选分析,什么是PI3K酶如题 谢谢了 - ？
颜韦羚羊： 1、一种PI3K酶抑制剂的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)虚拟筛选 A.用软件将目标化合物和PI3Kγ进行分子对接,获得目标化合物与PI3Kγ 的理论结合自由能; B.用式I计算目标化合物的IC50 -LogIC50=-4.134(±0.825)-0.994(±0.087...

博野县19258514926： PI3K通路抑制剂:我们应当如何深入其中? - ？
颜韦羚羊： TAT 2012)在荷兰首都阿姆斯特丹召开.TAT2012是欧洲肿瘤内科学会(ESMO)官方合作会议,由阿姆斯特丹NDDO教育基金会赞助,美国国立癌症研究所(NCI)协办. 磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)通路常被发现在肿瘤患者中被激活,它在...

博野县19258514926： 细胞实验中wortmannin怎么使用 - ？
颜韦羚羊： 细胞实验中wortmannin怎么使用 在细胞实验中 Wortmannin是一种常用的phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K)抑制剂.Wortmannin可以通透细胞,和PI3K的110kD催化亚基相结合,特异性抑制PI3K,抑制PI3K/Akt信号途径,包括常见的抑制Akt磷酸化等.可以用来做体外研究,体内研究,MLCK酶活实验,动物实验.常见使用浓度范围为1~100微摩尔.具体的最佳工作浓度可以参考相关文献,或根据实验目的,以及所培养的特定细胞和组织,通过实验进行摸索和优化.

博野县19258514926： 如何证明是通过pi3k/akt途径发挥作用 - ？
颜韦羚羊： 雷帕霉素的作用机制和CsA及FK506均不同.CsA和FK506分别与细胞浆 内环抱亲和素和FKBP12结合,抑制Calcinen,阻止细胞因子如白介素.2(IL一2) 的表达和转录,抑制T细胞活化的早期阶段4]l.RPM与FK506具有相似的分子 结构,也能与FKBP12结合,RAPA.

博野县19258514926： 白带检查中的白细胞酯酶阳性是怎么回事 -- ？
颜韦羚羊： 白细胞酯酶是人体白细胞内含有的一种特异性酶类,临床常用这种酶类来检测标本中有无白细胞存在,但这种酶类只在中性粒细胞内存在,其它的细胞内则没有,所以不能检测其它类型的白细胞,只能检测中性粒细胞,也就是通过常说的炎性细胞.这个结果阳性说明所检测的标本中有白细胞存在,也就是中性粒细胞,表示有炎症存在,但不能说明是什么病原感染.

博野县19258514926： 打印机是否与电脑联机怎样查看 - ？
颜韦羚羊： 工具/材料:以win7电脑为例. 1、首先,点击桌面左下角“开始”图标. 2、然后在该界面中,点击“设备和打印机”选项. 3、之后在该界面中,显示所有打印机,未连接的打印机,是灰色的.4、最后在该界面中,显示所有打印机,连接的打印机,是彩色的.

博野县19258514926： 如何检查电脑的显卡工作是否正常 - ？
颜韦羚羊： 可以在设备管理器中检查电脑的显卡工作是否正常. 1、右击桌面上的“我的电脑”或“此电脑”图标,在展开的菜单中点击“属性”按钮: 2、在打开的窗口左侧区域点击“设备管理器”按钮进入电脑的设备管理器:3、在设备管理器中,找到“显示适配器”这一项并展开显示适配器,双击里面的显卡名称,在弹出的窗口中可以查看显卡是否工作正常: