平板克隆实验怎么加药

平板克隆实验怎么加药~

铺满细胞后，加药培养两周，可见白点克隆时停止培养，用遇冷的甲醇固定细胞15min，结晶紫染色30分钟，用流动水清洗。
拓展资料
1、取对数生长期的单层培养细胞，用0.05%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，把细胞悬浮在10%胎牛血清的培养液中备用。
2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，以适当的细胞密度(根据增殖能力)接种于培养皿中。一般分每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃,5% CO2 及饱和湿度的环境下，静置培养2～3周。
3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。
4、弃去上清液，用PBS 小心清洗2次。加入甲醇固定，15min。弃去固定液，
5、加适量Giemsa 染色液染色10～30min，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。

软琼脂克隆形成实验加药处理怎么做
1).细胞培养至70%贴壁时准备试验，试验前夜更换培养液； 2). 称取两份1g 低熔点琼脂糖胶，分别置入新鲜制备的MiliQ水，配成10%和2%，高压灭菌，维持于40℃勿使冷却凝固； 3). 取少量含10%FBS的RPMI1640培养液，预热至37℃； 4). 将维持于40的10%低熔点胶溶液按10:1比例与预热至37℃RPMI1640培养液混合，取5ml，置入直径为6cm的无菌培养皿中，冷却凝固，至于37℃,5% CO2培养箱中备用； 5). 将培养中细胞用0.25%胰酶消化成单个细胞，20℃ 800′g离心15min，轻轻倒掉上清； 6). 用少量10% FBS＋RPMI1640 将细胞吹打悬起；计数；稀释500 cell/ml； 7). 将维持于40C的2% 低熔点胶溶液按10:1比例与细胞悬液混合，充分混匀后取2ml注入步骤4).中制备的底层琼脂糖上； 8). 待加入的琼脂糖凝固后，置于37℃,5% CO2培养箱中； 9). 将维持于40的2% 低熔点胶溶液按10:1比例与10% FBS＋RPMI1640混合，充分混匀后取1ml注入步骤7).中制备的琼脂糖上； 10). 待加入的琼脂糖凝固后，再加入5ml10% FBS＋RPMI1640； 11). 置于37℃,5% CO2培养箱中培养7天；转化的LA795（MAGE-A3）细胞和LA795细胞各作3份； 12). 观察形成的细胞集落；并计数克隆形成率： 13). 两组细胞克隆形成率，以配对样本的秩和检验作统计分析；以SPSS 10.0辅助计算；P＜ 0.05视为差别有显著性的依据；

铺满细胞后，加药培养两周，可见白点克隆时停止培养，用遇冷的甲醇固定细胞15min，结晶紫染色30分钟，用流动水清洗。

拓展资料

1、取对数生长期的单层培养细胞，用0.05%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，把细胞悬浮在10%胎牛血清的培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，以适当的细胞密度(根据增殖能力)接种于培养皿中。一般分每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃,5% CO2 及饱和湿度的环境下，静置培养2～3周。

3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。

4、弃去上清液，用PBS 小心清洗2次。加入甲醇固定，15min。弃去固定液，

5、加适量Giemsa 染色液染色10～30min，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。

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青白江区15094501429： 细胞平板克隆形成实验培养基要加双抗吗 - ？
乾于巴柳： 可以不加,有时候加了会有拮抗作用.1)24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验.细胞孵育过夜;(2)准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,至少5个梯度);(3)细胞孵育...

青白江区15094501429： 软琼脂克隆形成实验加药处理怎么做 - ？
乾于巴柳： 软琼脂克隆形成实验加药处理怎么做1).细胞培养至70%贴壁时准备试验,试验前夜更换培养液; 2). 称取两份1g 低熔点琼脂糖胶,分别置入新鲜制备的MiliQ水,配成10%和2%,高压灭菌,维持于40℃勿使冷却凝固; 3). 取少量含10%FBS...

青白江区15094501429： 软琼脂克隆形成实验加药处理怎么做 - ？
乾于巴柳： 细胞培养至70%贴壁时准备试验,试验前夜更换培养液;

青白江区15094501429： 请问,Amp可以在倒完平板后,象x - gal,IPTG一样涂布吗...我打算是用来筛选克隆子,如果可以用量是怎样的,谢谢 - ？
乾于巴柳： 可以的,我经常这样做.这样做不会使加到板中的Amp随着板子放置时间的延长而失效.但是必须要涂均匀,并且让涂上去的Amp干透才可以涂菌.用量按照板子的体积计算,一般每块板20微升Amp储液(储液浓度200微克每微升),加80微升无菌水稀释到100微升总体积,涂板即可.

青白江区15094501429： 能在平皿上直接涂一层抗生素来筛选菌落么 - ？
乾于巴柳： 阴性平板上长几个克隆一般的原因是抗性板是筛选压力稍有不足.出现这种情况的原因可能是抗生素母液部分失效或者到平板时加抗生素时培养基的温度过高.你可以用新鲜的抗生素母液重新配置抗性板,如果还出现这种情况,还有可能是感受态细胞的问题.如果阳性实验平板上长的克隆比较多,可以继续挑单克隆摇菌做进一步验证.如果样品实验板上长的克隆也很少,可能是实验本身出了问题. 查看>>

青白江区15094501429： puc19质粒怎么会有氨苄抗性基因 - ？
乾于巴柳： 因为如果检测pBR322中的插入片段,那么要符合氨苄青霉素平板可以生长(带有质粒)并且双抗性平板(氨苄青霉素和四环素)不能生长(带有插入片段,四环素抗性基因被破坏),这就是2轮平板培养. 而使用lacZ的时候只要在平板上加入氨苄和x-gal之后,可以生长的克隆带有质粒;之后加入IPTG诱导,不变蓝的克隆就带有插入片段,所以只要一次培养.

青白江区15094501429： 求分子克隆具体实验步骤一份~~多谢各位大侠啦~ - ？
乾于巴柳： 分子克隆实验流程 第一天 一:目的片段的扩增(PCR) PCR反应的基本成分包括:模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的高...

青白江区15094501429： 细胞铺板后怎样换液? - ？
乾于巴柳： 细胞都附着到培养板表面以后,如果需要换液,只需用移液枪吸出旧的培养基,然后加入预先温到37度的新鲜培养基即可.

青白江区15094501429： ...能否继续在阳性平皿上挑单克隆?转化后涂布(已加抗生素),阴性对照培养皿上长有一两个菌落,能否在阳性对照的平板上挑取单克隆,进行后续的实验... - ？
乾于巴柳：[答案] 阴性平板上长几个克隆一般的原因是抗性板是筛选压力稍有不足.出现这种情况的原因可能是抗生素母液部分失效或者到平板时加抗生素时培养基的温度过高.你可以用新鲜的抗生素母液重新配置抗性板,如果还出现这种情况,还有可能是感受态细胞...

青白江区15094501429： 平板克隆实验和软琼脂克隆实验的区别 - ？
乾于巴柳： 干细胞一般具有sphere-forming的能力,所以两个都可以做.