茎尖脱毒的实例

茎尖培养脱毒分为哪几个步骤？~

茎尖培养脱毒的基本程序与具体操作方法与常规的组织培养相同，一般包括以下几个步骤，即培养基的选择与制备、待脱毒材料的消毒处理、茎尖剥离与培养、诱导分化和小植株的增殖、诱导生根和移栽。
取材可在春、秋两季，选择田间生长旺盛的新梢，摘取2～3cm长，去掉较大叶片，用自来水冲洗片刻即可消毒。对于多年生植物，休眠的顶芽和腋芽也可作为试验材料。
幼叶和叶原基的剥离、茎尖的切取操作最好在双目解剖镜下用解剖针进行。茎尖培养不仅用于获得无病毒植株，而且适合于保存和繁殖无病毒材料。无病毒材料的离体保存是一种最为安全和经济有效的方法，在有限的空间内可长期保存大量的种质材料。

茎尖是指茎端分生组织以及由数个叶原基组成的部分。茎尖培养又叫分生组织培养或生长点培养。
茎尖培养脱毒是利用病毒在植物体内分布的不均匀性而实现的。一般来说，种子、根尖和茎尖生长点附近的分生组织病毒浓度低，大部分细胞不带病毒，取顶端生长点培养可获得无病毒植株。
但在生长点部位，不含病毒的部分是极小的，一般不超过0.10.5mm，这样小的无病毒组织无法通过常规的方法繁殖利用，但可以借助组织培养技术获得无病毒植株。
分生组织的形态大小依植物品种、生长期以及外界环境的影响而有变化，剥离茎尖的难易程度也不相同，因此，不同植物以及一种植物要脱去不同的病毒所需茎尖大小是不同的。通常茎尖培养脱毒效果的好坏与茎尖大小呈负相关，即切取茎尖越小，脱毒效果越好，但成活率越低。所以，具体应用时既要考虑脱毒效果，又要考虑其提高成活率，一般切取0.20.3mm带有12个叶原基的茎尖作为培养材料较好。

（一）、茎尖脱毒
1、茎尖脱毒的依据。
病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒。
2、茎尖培养法脱除植物病毒的技术关键
（1）、被脱毒植物携带病毒的诊断及其在体内的分布
再脱毒之前，应了解植物携带何种病毒，病毒在体内的分布位置，以确定培养茎尖的大小
（2）、母体植株的选择和预处理
母体的选择：
欲脱毒材料的品种典型性：关系到脱毒以后的脱毒苗是否保持原品种的特征特性
植体健康程度选择：应选感病轻、带毒量少的健康植株作为脱毒的外植体材料，这样更容易获得脱毒株。
外植体预处理：
（3）、茎尖的剥离
在剥取茎尖时，把茎芽置于解剖镜下（8~40倍），一只手用镊子将其按住，另一只手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，解剖针要常常蘸入90%酒精，并用火焰灼烧以进行消毒。但要注意解剖针的冷却，可蘸入无菌水进行冷却。当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织切下来，为了提高成活率，可带1-2枚幼叶，然后将其接到培养基上。接种时确保微茎尖不与其他物体接触，只用解剖针接种即可。剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。可在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，有助于防止茎尖变干。
将接种好的茎尖置于25℃左右的温度下。每天以16小时 2000-3000lx的光照条件下培养。由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。微茎尖需数月才能成功。
继代培养得到足够的检测苗、进行病毒检测。
（4）、脱毒效果检测
A 指示植物鉴定(indicator test plants) 所谓指示植物是指具有能够辨别某种病毒的专化性症状的寄主植物。
每种病毒都有自己敏感的植物，例如：
马铃薯病毒的敏感植物有千日红、黄花烟、心叶烟、毛叶曼佗罗
大丽花病毒的敏感植物为：矮牵牛、黄瓜、苋色蓠
菊花病毒：矮牵牛、豇豆
指示植物鉴定病毒的方法
a.摩擦接种法：
取培养植株的叶片置于研钵中，加入少量的水和等量的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0），磨成匀奖，将其涂抹在指示植株叶片上，在指示植物的叶片撒上金刚砂，通过轻轻摩擦使汁浸入叶片表皮细胞而又不损伤叶片。5分钟后用清水清洗叶面。将指示植株放于防蚜虫网罩的温室内。然后视其病斑的有无，来判断是否脱除了病毒。
例如：植物液接种后如使千日红叶片枯斑，黄花烟、心叶烟呈花叶，证明该植物体内具有马铃薯X病毒
b、嫁接法
有些病毒不是通过汁液传播，而是通过专门的介体传播的，例如草莓黄花病毒、草莓丛枝病毒是通过一种特殊的蚜虫为介体进行传播的。这种病毒的鉴定，需将培养植株的芽嫁接在敏感植物上，根据敏感植株的病症来判断是否脱除了病毒
B 血清鉴定(serologic test) 试管沉淀反应；免疫双扩散；酶联免疫吸附测定(ELISA)。
a、试管沉淀反应
在抗原-抗体最适比例的条件下，观察有无沉淀的产生来确定被测植株是否带病毒。试管沉淀反应操作简单，需注意的问题：
①、叶绿体的自发凝聚
可用磷酸缓冲液提取汁液，再用氯仿处理除去叶绿体，pH 保持在6.5-8.5）
② 、抗原抗体的比例要适当，当抗原过量时回抑制沉淀的形成
b、免疫双扩散
在半固体凝胶中测定在其中扩散的抗原和抗体间的沉淀反应的方法。与沉淀法比较起来有两个优点：一是节约血清，二是汁液不用特殊处理。
步骤：
①倒胶，一般厚2mm
②打孔，多打成梅花型
③加样，加血清和汁液。
一般加样后在37℃恒温过夜，即可进行结果观察。有扩散沉淀的即为带毒株，没有则为不带毒株
c、酶连免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）
它是将抗原、抗体的免役反应和酶的高效催化反应有机结合起来的一种综合性技术。即通过化学的方法将酶与抗体或抗原结合起来，形成酶标记物。然后将它与相应的抗原或抗体起反应，形成酶标记的免疫复合物。结合在免疫复合物的酶，在遇到相应的底物时，催化无色底物生成有色底物，通过比色计可以准确测定。优点是灵敏度高，测定快速，每次可以同时测定多个样品。

C 电镜检查法
采用电子显微镜，可直接观察样品材料有无病毒存在，还可以进一步鉴定病毒颗粒大小、形状和结构，这些特征相当稳定，因此电镜检查法即准确又有效，但需要有一定的设备和技术。
D 分子检测法
例如RT-PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reation）将待测的样品的总RNA与cDNA合成的试剂盒进行反应，合成cDNA，然后利用病毒DNA特有的序列设计引物进行PCR反应，即可知道在寄主中是否有病毒基因的表达
n 脱毒苗的离体保存与繁殖:一般是在实验室进行，一般每月继代一次，可以在培养基中加入生长延缓剂，如B9和矮壮剂可2-3个月继代一次，也可放到液氮或4℃冰箱中保存
n 建立脱毒种苗生产繁殖网络体系：如果试管苗生产成本过高或移栽困难，可将试管苗选择种植在一定的控制区域，从繁殖技术和环境隔离上保证较高水平，使得繁殖的种苗能有效的防止病毒的再侵染
（5） 影响脱毒效果的因素
n 母体材料病毒侵染的程度:单一病毒感染的植株脱毒较容易,而复合浸染的植株脱毒较难
n 外植体的生理状态:顶芽的脱毒效果比侧芽好,生长旺盛的芽比休眠芽或快进入休眠的芽好
n 起始培养的茎尖大小:不带叶原基的生长点培养脱毒效果最好,带1-2个可获得40%脱毒苗
实例：

1.马铃薯是用块茎种植的无性繁殖作物，在生长期间容易被病毒侵染造成
病毒性退化，并常受晚疫病、环腐病、青枯病和黑胫病等多种病害侵袭。所
以马铃薯虽然是高产作物，但常常并不高产、稳产。特别是病毒性退化，是
各地马铃薯生产的主要威胁。为了解决这一问题，我国于70 年代引进了马铃
薯茎尖脱毒技术，80 年代逐渐普及到各省、市、自治区。现在许多研究单位
均已掌握了马铃薯脱毒苗的生产与快繁技术，脱毒薯正在迅速推广，并比一
般种薯增产30％～50％，甚至一倍以上，很受农民欢迎。同时我国各地在马
铃薯生产过程中，因地制宜地创造了多种保种技术，如一季作地区的夏播留
种；中原二季作地区的阳畦留种和春季早收留种并实行秋播；云南一些地区
的三季薯留种法等。这对防止马铃薯种薯的迅速退化和减产都有显著作用。
脱毒薯和留种技术相结合，既能增产，又能延长种薯使用年限。
2.南罗平小黄姜的茎尖脱毒组培快繁

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合水县15212526273： 哪位仁兄可以帮我列举一些关于茎尖脱毒的实例,急用!~<br/>越? ？
宠怕补益： (一)、茎尖脱毒1、茎尖脱毒的依据.病毒在植物体内分布是不均一的,越接近生长点约(0.1-1mm区域),病毒浓度越稀,因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植...

合水县15212526273： 利用琼脂培养基进行马铃薯茎尖组织培养无病毒植株时发现 离体茎尖大小和叶原基数目会影响分生组织形成植株的能力以及脱毒效果 实验结果如下表所示.... - ？
宠怕补益：[答案] (1)植物的茎尖病毒极少甚至无病毒(2)小好 0.27mm(3)步骤2:取生长状况相同的马铃薯植株无菌条件下切取0.60mm带有4个叶原基的茎尖若干平均分为5组,分别接种到5个培养基中,除A组外其他各组均去除叶原基. 步骤3:在相同且适宜的...

合水县15212526273： 植物细胞工程应用的十五个事例 - ？
宠怕补益： 微型繁殖(荷兰的兰花生产),植物脱毒(茎尖组织培养技术脱毒培育出的马铃薯和草莓),人工种子(植物组织培养得到的胚状体经过人工薄膜包装得到的种子),单倍体育种(单育1号烟草品种,中花8号、11号水稻,京花1号小麦),突变体应用(抗花叶病毒的甘蔗、抗盐碱的野生烟草、抗除草剂的三叶草)细胞产物工厂化生产(人参皂甙干粉、紫杉醇)

合水县15212526273： 下图利用三倍体香蕉的茎尖培养脱毒香蕉植株的过程的示意图,下列叙述正确的是 ① ② ③ ④ 茎尖组织 → X → 胚状体 → 幼苗 → 脱毒植株 - ？
宠怕补益：[选项] A. ①③过程中发生了有丝分裂和减数分裂 B. 对香蕉进行花药离体培养可获得单倍体 C. ②阶段为脱分化过程 D. X代表愈伤组织 我想知道ABC错在哪里

合水县15212526273： 茎尖组织如何培养脱毒技术? ？
宠怕补益： 取材和消毒.剥取茎尖可用植株分枝或腋芽,但 大多采用块茎发出的嫩芽.经过催芽处理的块茎在温室内 播种,待幼芽长至4 ~5厘米,幼叶未展开时,剪取上段2 厘米长的茎尖,剥去外面叶片,放人烧杯,用纱布封口, 在自来水下冲洗30分钟,然后在超净工作台上进行严格的消毒.消毒方法是先用75%酒精浸15秒,无菌水洗2次; 再用5%次氯酸钙浸泡15 ~ 20分钟,然后用无菌水冲洗3 ~ 5次,放在灭过菌的培养皿中待用.

合水县15212526273： 如何用马铃薯的茎尖组织培养脱毒薯? ？
宠怕补益： 马铃薯的母株一旦感染病毒病,便可通过块茎传给后代,使其退化变劣.但利用茎尖组织培养法,进行脱毒培养,可繁殖出不带病毒的植株,对防止马铃薯的退化有较好的...

合水县15212526273： 请说明植物茎尖培养脱毒技术原理及其影响因素? - ？
宠怕补益： 原理:病毒在植物体内通过维管束和胞间连丝传播,因此在植物体内含量不均匀,顶端分生组织带毒少,病毒含量低. 影响因素: 1、茎尖大小,茎尖越大脱毒率越低. 2、叶原基有无,有则难以脱毒. 3、病原的侵染程度越大脱毒越难. 4、培养基.

合水县15212526273： 茎尖培养为什么能脱出植物病毒? - ？
宠怕补益： 茎尖培养脱毒原理 感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀,病毒的数量随植株部位及年龄而异,越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低,生长点(约0.1-1MM区域)则几乎不含或含病毒很少.这是因为分生区域内无维管束,病毒只能通过胞间连丝传递,赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度.在切取茎尖时越小越好,但太小则不易成活,过大又不能保证完全出去病毒. 茎尖培养脱毒,由于其脱毒效果好,后代稳定,所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径

合水县15212526273： 植物组织培养技术可以培育出大量不含病毒的幼苗,提高作物产量.下面是培育脱毒草莓的基本过程,请回答:植物茎尖→A→愈伤组织→B→丛芽→草莓幼苗... - ？
宠怕补益：[答案] (1)利用组织培养技术培育脱毒草莓幼苗的原理是细胞的全能性,培育时,一般选取植物茎尖作材料,其依据是茎尖不含病毒(或含病毒极少).(2)组织培养中,细胞从分化状态转变为未分化状态的过程为脱分化,即图中A...

合水县15212526273： 比较热处理脱毒及茎尖培养脱毒 两种方法如何选择 - ？
宠怕补益： 热处理脱毒主要是利用病毒受热的不稳定性而失去其活性达到脱病毒目的.一般采用35—55℃的热水或高温蒸汽、高温空气处理,温度越高处理的时间越短.通常是将热处理中伸长生长出的新梢顶端部分嫩枝嫁接到无病毒砧木上,或进行进一步的茎尖培养,或茎尖微芽嫁接以增大脱去病毒的机率.茎尖脱毒是利用植物茎尖组织培养,结合血清病毒检测技术,在防蚜传毒条件下,将影响植物正常生长的植物病毒脱除的高新农业生物技术.几种方法的配合使用是提高植物脱毒效果的关键:1、高温热处理与微茎尖脱毒培养技术.2、高温热处理与微(体)茎尖嫁接培养技术.3、化学处理与茎尖脱毒培养技术.4、愈伤组织热处理与化学处理配合.