常用的基因突变检测方法有哪些
1、焦磷酸测序法
测序法的基本原理是双脱氧终止法,是进行基因突变检测的可靠方法,也是使用最多的方法。但其过程繁琐、耗时长,灵敏度不高,对环境和操作者有危害,故在临床应用中存在一定的限制。
焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,而速度却大大的提高。
焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力。为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行单核苷酸多态性研究和临床检验提供了非常理想的技术操作平台。
2、微数字聚合酶链反应
该方法为将样品作大倍数稀释和细分,直至每个细分试样中所含有的待测分子数不超过1个,再将每个细分试样同时在相同条件下聚合酶链反应后,通过基因芯片逐个计数。该方法为绝对定量的方法。
3、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术
聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。该法一般用于检测已知的突变位点。
因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。
由1983年美国Mullis首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年,PCR已发展到第三代技术。1976年,台湾科学家钱嘉韵,发现了稳定的Taq DNA聚合酶,为PCR技术发展也做出了基础性贡献。
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右)。
DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
4、高效液相色谱法
该方法是基于发生错配的杂合双链DNA与完全匹配的纯合双链DNA解链特征的差异而进行检测的,可检测出含有单个碱基的置换、插入或缺失的异源双链片段。
与测序法相比,该法简单、快速,不仅可用于已知突变的检测,还可用于未知突变的扫描。但只能检查有无突变,不能检测出突变类型,结果判断容易出错。
5、单链构象异构多态分析技术
依据单链DNA在某一种非变性环境中具有其特定的第二构象,构象不同导致电泳的迁移率不同,从而将正常链与突变链分离出来。与测序法相比,灵敏性更高。
参考资料来源:百度百科-基因突变检测
只用血液标本进行基因测序是否能检测出体细胞突变
目前,液体肿瘤活检中循环肿瘤DNA突变的检测是使用二代测序技术检测外周血中的体细胞肿瘤细胞突变。原理是肿瘤组织中会有数目巨大的细胞死亡,而死亡细胞的DNA片段将进入血液。通过检测这些游离在外周血里的DNA,可以检测到源自肿瘤细胞的游离DNA中的基因突变。一般而言,还可以并行检测外周血中白细胞的遗传...
肿瘤基因检测项目纳入了医保,基因检测究竟该选择什么样本呢?
国家医保局对肿瘤基因检测项目纳入医保作出回应,指出部分地区已经将部分基因检测项目纳入医保支付范围;这个新闻引起了网友的高度关注,但是很多网友并不明白,肿瘤基因检测项目纳入医保对于普通老百姓有哪些好处呢?肿瘤基因检测一方面有助于肿瘤的诊断。比如Ras基因在很多肿瘤中存在突变,检测这个基因突变有助于...
遗传基因检测哪些项目
问题一:基因检测都包含哪些项目? 基因检测可以诊断疾病,也可以用于疾病风险的预测。疾病诊断是用基因检测技术检测引起遗传性疾病的突变基因。目前应用最广泛的基因检测是新生儿遗传性疾病的检测、遗传疾病的诊断和某些常见病的辅助诊断。中源协和目前有1000多种遗传性疾病可以通过基因检测技术做出诊断。 近年来令人非常兴奋...
HIV的耐药检测方法及应用
基因型耐药检测首先获得病毒特定的基因片段,测定基因序列,将序列提交给选定的数据库,通过数据库的比对得出对耐药突变和耐药的判断,一般可在1-2周内得到结果。表型耐药检测非常复杂,须首先获得病毒特定的基因片段,根据患者的基因突变构建假病毒,通过检测构建的假病毒在有药物存在情况下复制和生长的能力,...
你了解RET基因突变吗?
广义上讲,所有肿瘤患者均可以接受基因检测;狭义上讲,根据指南推荐,不同的病种、不同的分期、出于不同的目的,不同的患者,适合做不同的基因检测。2017年肺癌诊疗指南更新时,推荐患者检测的靶点增加至12种。 推荐检测的靶点数量增加,意味着有更多疗效确切、或有潜力的新药走入临床。 在这12种被写入...
罕见基因突变创新点 精准标靶治疗抗癌
全方位癌症治疗:基因检测的治疗价值 李杨成副院长曾治疗一名74岁女性肺腺癌第4期患者,经过长达六个月的化疗、标靶治疗和免疫疗法后,病情未见明显好转,患者出现呼吸困难。在李杨成医师的建议下,患者接受了全方位癌症基因检测,结果显示出罕见的癌细胞基因突变点,随后采用标靶药物治疗。自去年11月以来,...
CancerSEEK的无创检测方法有什么优点?
能通过检测血样中16种与癌症相关的基因突变及8种蛋白质,查出卵巢癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、结直肠癌、肺癌与乳腺癌。研究人员在最新一期美国《科学》杂志上发表报告说,他们利用1005名癌症尚未转移的患者以及850名健康对照者进行了测试,发现该方法的特异性为99%,这意味着健康人被误诊的可能性不...
基因突变与染色体变异
所谓效率较高便是产生更多的基因突变和较少的染色体畸变。所谓专一便是产生特定类型的突变型。②害虫防治。用诱变剂处理雄性害虫使之发生致死的或条件致死的突变,然后释放这些雄性害虫,便能使它们和野生的雄性昆虫相竞争而产生致死的或不育的子代。③诱变物质的检测。多数突变对于生物本身来讲是有害的,人类的癌症的...
如何通过ngs来检测基因组变异
由于基因突变而使不论哪一种有关 DNA损伤修复的酶失活时,都必然导致细胞对于紫外线或其他诱变剂的杀伤作用变得更为敏感。可是就诱变结果来讲,则要看这酶是涉及无误修复,还是易误修复。如果属于前者,那么有关的基因发生突变时将使突变更易发生,如果属于后者,那么有关的基因发生突变时将使突变更不...
罕见基因突变创新点 精准标靶治疗抗癌
让医师有更完整的治疗蓝图,有助提升用药与治疗计画的精准度。加入【】,天天关注您健康!LINE@ ID:@ 订阅【健康爱乐活】影音频道,阅读健康知识更轻松 : \/beauty\/article\/42485 关键字:癌症精准医疗, 台南市立医院, 血液肿瘤科, 李杨成, 全方位癌症基因检测, 癌细胞基因突变 ...
池诚温经: 1ر核酸分子杂交技术以检测样本中是否存在与探针序列互补的同源核酸序列.常用有以下方法.(1)限制性内切酶分析法.此方法是利用限制性内切酶和特异性DNA探针来...
特克斯县13527813516: 基因突变试验包含哪些种类?基因突变试验包含哪些种类? ?
池诚温经: 基因突变试验1、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 又称Ames试验,检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力.试验...
特克斯县13527813516: 当前有哪些筛选基因突变的有效方法? - ?
池诚温经: 1.功能互补法:使突变株表达,与空白相对比2.核酸杂交法:使用突变株基因单链与原基因杂交,能完全配就未能成功3.定位克隆4.差别杂交分离目地基因
特克斯县13527813516: 基因检测方法有好几种,哪一种方式比较好 - ?
池诚温经: 需要按照实际需求去选择,没有哪个最好的说法,合适的就是最好的 常用基因诊断技术: 一、Southern印迹法(Southern blot)基本原理是:硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强,当电泳后凝胶经过DNA变性处理,覆以上述滤膜...
特克斯县13527813516: 基因诊断的主要技术方法有哪些? ?
池诚温经: 基因诊断是利用分子生物学技术,检测DNA、RNA结构或基因表达水平变化, 诊断疾病的方法,主要目的是检测引起疾病的基因突变.根据基因突变的类型不同,所采用...
特克斯县13527813516: dna检测复杂吗,有没有简单点的方法? - ?
池诚温经: 基因突变检测方法: (1) PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变.其基本原理为单链DNA在中性条件下会...
特克斯县13527813516: 基因突变只做EGFR可以吗 - ?
池诚温经: 目前用于EGFR基因突变检测的主要方法有直接测序法、AEMS、DHPLC、HRM、PCR-SSCP、突变富集体PCR及微数字PCR等.下面将对这些检测方法进行简单介绍: 1、直接测序法 直接测序法利用的是Sanger测序法的原理,是目前公认的...
特克斯县13527813516: 基因检测有哪些方法 - ?
池诚温经: 检测基因表达的方法: 转录水平检测:RT-PCR,real-time PCR,northern blot 翻译水平检测:western blot 还有直接检测,如报告基因、融合荧光蛋白等.
特克斯县13527813516: 如果得到了一株突变菌株,如何进行基因鉴定,有哪些方法? - ?
池诚温经:[答案] 要具体看你是怎样得到突变菌株的了. 如果是采用化学或物理诱变育种,得到的,则有可能是点突变.只能通过SNP、AFLP等方法找突变位点了.当然也可以通过蛋白质组技术找蛋白质的差异 如果是采用转座子诱变的方法,则可以直接克隆转座子插入...