takara+cdna+反转录说明书
作者&投稿：征扶 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
暗黑破坏神2毁灭之王各职业的如何通关?
第一个任务：Den of Evil邪恶的巢穴，第二个任务：Sister's Burial Grounds（姐妹情深）。说明 （1）你的第一个任务是由村庄里的女巫师Akara给的，她说她是这里的首领，为 了解除诅咒，所以要你这个勇者去一趟小恶鬼的巢穴，这个巢穴就在出城之后的 不远处（其实也够远的了），而且这一代的地洞和...
青州市华迪回答： 是单链cDNA,想合成双链cDNA需要另外操作: 一、cDNA第二链的合成: 1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中保存,待电泳检测.其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega): 20ul 10*DNA Polymerase I buffer ...
欧阳疫17758436701问： 请教反转录cDNA的体系中,Random 6 mers是什么啊? - ？
青州市华迪回答： 这个体系是TaKaRa反转录试剂盒中的体系,稍有不同的是第二个PrimeSciptTMRT Enzyme Mix I,试剂盒中为0.5μL.Total RNA试剂盒中没有标明使用量,根据自己提取的RNA浓度来确定,但你这里的使用量应该有点大,试剂盒中有说明,10μL...
欧阳疫17758436701问： MicroRNA逆转录CDNA - ？
青州市华迪回答： 根据你的反转录引物而定. ①如果是普遍反转录引物,则不需要,也就是反转录用一种引物将RNA全部反转成cDNA 然后定量的时候再使用miRNA和对应的普通基因各自的定量引物. ②若使用的是特异性反转录引物 则需要分开反转录,前面的buffer、酶等能混合,最后要分开,加入各自对应的反转录引物. 无论是普遍反转录还是特异性反转录,均可进行后续的定量.貌似特异性引物更精确.
欧阳疫17758436701问： cDNA文库中的DNA来源于mRNA的反转录过程,怎么理解 - ？
青州市华迪回答： DNA转录可得到mRNA,而mRNA逆转录可得到DNA,经过此途径得到的DNA叫做cDNA.主要过程是以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下合成DNA cDNA文库中的DNA都是经过这个方法得到的,所以说cDNA文库中的DNA来源于mRNA的反转录过程
欧阳疫17758436701问： 反转录问题求教!!! - ？
青州市华迪回答： 如果你是用反转录后的cDNA跑电泳,出现好多条带或弥散状是正常的,因为你提取的RNA不可能是完整的一条链,而随机引物和特异引物扩增的时候是有肯能把大小不同的RNA同时进行扩增的.你可以用你的目的引物,用反转录第一链进行扩增,看看能不能得到目的片段.
欧阳疫17758436701问： RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?请教 - ？
青州市华迪回答： 操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水 65C反应10min,冰上放置5min后:这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开; 再加dNTP,RNaseA,BUFFER, MTV逆转录酶, 反应25℃10min:这一步是让反转录引物(oligodT,随机引物)和模板RNA退火结合 37℃60min:这一步是反转录酶的工作温度 70℃10min:这一步是变性,把合成的cDNA和RNA变性开,就拿到单链的cDNA
欧阳疫17758436701问： 反转录法获取目的基因 - ？
青州市华迪回答： 因为直接从生物体中提取的基因的编码区是不连续的有不编码蛋白质的内含子部分,而反转录来的cDNA的编码区是连续的(成熟mRNA中的序列都是由基因的编码区的外显子部分转录来的),为了节省目的基因片段的长度,选择cDNA为目的基因. 怎么不给悬赏?
欧阳疫17758436701问： 什么是反转录 - 套式聚合酶链反应(RT - nPCR)?？
青州市华迪回答： RT-nPCR实际叫做反转录-巢式PCR, 反转录PCR就是把RNA提取后反转录成cDNA,并以其为模板进行的PCR反应,通常用于检测某种RNA是否被表达,或者比较其相对表达水平 巢式PCR(nested PCR),是指利用两套PCR引物(巢式引物)对进...
欧阳疫17758436701问： 论述反转录法提取目的基因的全过程 - ？
青州市华迪回答： 以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA(cDNA),然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获取所需的基因.是基因工程中提取目的基因的重要方法之一.优缺点 优点:该方法专一性强,目的基因不含内含子,可合成自然界不存在的新基因.缺点:操作复杂,形成的mRNA为单链,生存时间短,很不稳定,要求的技术条件也较高.因为直接从生物体中提取的基因的编码区是不连续的有不编码蛋白质的内含子部分,而反转录来的cDNA的编码区是连续的(成熟mRNA中的序列都是由基因的编码区的外显子部分转录来的),为了节省目的基因片段的长度,选择cDNA为目的基因.
欧阳疫17758436701问： 设计一个检测某一基因是否转录的检测方法的实验,简述其过程与原理. - ？
青州市华迪回答： 原理:转录是以一条DNA链为模板,合成出一条mRNA的过程.所以,检测某一基因在特定条件下是否转录,可以提取样品的mRNA,反转录成cDNA,然后用扩增该基因的PCR引物扩增,如果有条带就是说明转录,没有条带就是不转录.过程:1.提取样品mRNA;2.反转录合成cDNA;3.设计该基因特异的PCR引物;4.进行PCR扩增,电泳,检测结果.
