rt-pcr实验结果分析
qRT-PCR差异分析及P值计算
T检验是用t分布理论来推论差异发生的概率,从而比较两个平均数的差异是否显著。在R语言中T检验用的方法为:t.test(),如果数据不符合正态分布,也就是数据当中有较大的离群值时,可选用非参数秩和检验法,如Wilcoxon test,R语言中对应的方法为:wilcox.test()。关于数据类型及检验方法的选择可参考: 差异统计检验如何...
保姆级别qRT-PCR从理论知识(△Ct,△△Ct,2^-△△Ct)到实践操作_百度知 ...
数据处理采用经典的2^-△△Ct公式（表4），Excel提供了方便的工具，如t-test（图4-5）进行统计分析。通过比较对照组和处理组的数据，我们可以得出显著差异的结论，这为实验结果提供了坚实的基础。最后，图形化数据是结果呈现的重要方式，无论是Excel、Origin还是GraphPad，都能帮助我们清晰呈现实验结果（...
RT-PCR里的CT值到底代表什么意思?
Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值，因此只要获得...
实时定量PCR的结果是怎样分析的?
但HBV DNA拷贝数含量<10^5时，两种模式的相关性差(r=0．706)，此时，最大二阶导数法得出的数值要比样点拟合法低(t=2．61，P<0．05)，且易出现假阴性结果。结论 虽然样点拟合法步骤较多，但其结果更可靠，因此进行结果分析时，建议使用样点拟合法。而且当样本中HBV DNA拷贝数<10^5时只能使用...
今天做T载体连接后的菌落PCR,都挑的白色克隆,PCR后只有淡淡的二聚体...
以后要做阳性和阴性对照，否则不能肯定你的PCR是成功的，那么问题就没有针对性。不过我假设你的PCR是成功的，意思就是说引物和PCR条件都是可行的。出现这种原因的可能性在于，蓝白班筛选会有些滞后，蓝色显色过慢。你再放一段时间可能就变蓝色了。
PCR产物的检测方法有哪些?都有什么原理
这是实验室最常用的方法，简便易行，只需少量DNA即可进行实验。其原理是不同大小的DNA分子通过琼脂糖凝胶时，由于泳动速度不同而被分离，经溴化乙锭（EB）染色，在紫外光照射下DNA分子发出荧光而判定其分子的大小。用于电泳检测PCR产物的琼脂糖浓度常为1%—2%，应该使用纯度高的电泳纯级琼脂糖，这种琼脂...
pcr试验是什么意思?
D)用pGEM-T或pGEM-T Easy载体,连接pGEM-T正对照,转化高频率感受态细胞(10(8次方)cfu\/ug),按照指定的实验步骤,可得100个菌落,其中60%应为白斑,如产生>20-40蓝斑, 没有菌落或少有菌落,连接有问题。 4)对照实验结果好,却没有回收到目的片段,实验出了什么问题? A)连接用室温保温1小时,能满足大多数克隆,为...
pcr T检验单尾还是双尾
单尾和双尾取决于H0。当H0使用等号而H1使用不等号时，进行双尾检查。H0为定向时，单尾检查。H0和H1是完整的事件组，彼此相对，并且仅建立了其中一个。
解释个概念
他发表了第一个单纯且短暂性基因复制（类似PCR前两个周期反应）的实验。而现今所发展出来的PCR则于1983由 Dr. Kary B. Mullis发展出的，Dr. Mullis当年服务于PE公司，因此PE公司在PCR界有着特殊的地位。Dr. Mullis 并于1985年与 Saiki 等人正式表了第一篇相关的论文。此后，PCR的运用一日千里，...
PCR扩增的反应特点
PCR扩增产物分析PCR产物是否为特异性扩增 ，其结果是否准确可靠，必须对其进行严格的分析与鉴定，才能得出正确的结论。PCR产物的分析，可依据研究对象和目的不同而采用不同的分析方法。凝胶电泳分析：PCR产物电泳，EB溴乙锭染色紫外仪下观察，初步判断产物的特异性。PCR产物片段的大小应与预计的一致，特别是...
山城区缬沙回答： 需要样本间平行比较. 目的基因/GAPDH比值越大,说明目的基因表达量越高.比如1号样本目的基因/GAPDH比值等于0.5;2号样本目的基因/GAPDH比值等于0.8;那就说明2号样本中目的基因的表达量比1号样本高.
虿影19324344649问： RT - PCR结果怎么统计分析 - ？
山城区缬沙回答： 描述统计法.统计描述是统计分析的最基本内容,是指应用统计指标、统计表、统计图等方法,对资料的数量特征及其分布规律进行测定和描述
虿影19324344649问： RT - PCR融解曲线详解 - ？
山城区缬沙回答： 融解曲线是荧光定量PCR仪出现后为了考察染料法结果的特异性产生的.大家使用荧光定量PCR的目的(也是荧光定量PCR的宣称优点)有快速、准确及无污染,其中快速的前提之一是不用跑电泳就可以通过扩增曲线考察初始拷贝数的量;准...
虿影19324344649问： RT - PCR数据分析菜鸟请教大虾:已知目的基因、GAPDH、目的基因/GAPDH比值怎么分析数据呢? - ？
山城区缬沙回答：[答案] 需要样本间平行比较. 目的基因/GAPDH比值越大,说明目的基因表达量越高.比如1号样本目的基因/GAPDH比值等于0.5;2号样本目的基因/GAPDH比值等于0.8;那就说明2号样本中目的基因的表达量比1号样本高.
虿影19324344649问： RT - PCR如何用来分析基因的时空表达? - ？
山城区缬沙回答： rt-PCR不知道基因的时空表达,但它能分析某个时空(时,发育阶段;空,取材组织或部位)的样本中mRNA的数量.mRNA被反转录成cDNA,实时监控每轮pcr后产物的量,达到分析不同mRNA的含量,mRNA的含量反映了基因的表达.
虿影19324344649问： 转录组的结果与q - pcr验证结果怎么作图分析 - ？
山城区缬沙回答： 区分你的模板里面是否有基因组污染的方法:在做逆转录反应的同时,做一个阴性对照,其他所有都和实验组相同,除了不加入逆转录酶.得到RT-PCR产物后跑胶,如果该阴性对照里也扩增出来明显条带的话,你的模板就是有基因组污染,否则就是正常.
虿影19324344649问： RT - PCR 结果,请教问题可能出在哪一部分.谢谢？
山城区缬沙回答： 你提取的四个RNA中,除了2号浓度很低之外,另外三个肯定符合做RT-PCR的要求了,CDNA也是,浓度是够的. 而电泳图中PCR产物的1234都是引物二聚体,没有出现你的目的基因 所以我的判断是:问题出在PCR这一过程.有可能是引物设...
虿影19324344649问： RT - PCR如何用来分析基因的时空表达? - ？
山城区缬沙回答：[答案] rt-PCR不知道基因的时空表达,但它能分析某个时空(时,发育阶段;空,取材组织或部位)的样本中mRNA的数量. mRNA被反转录成cDNA,实时监控每轮pcr后产物的量,达到分析不同mRNA的含量,mRNA的含量反映了基因的表达.
虿影19324344649问： 实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? - ？
山城区缬沙回答： 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...
虿影19324344649问： rt - pcr产物做测序结果有双峰,这个结果就完全不能用了吗? ？
山城区缬沙回答： 要看你出现的双峰是个别碱基还是所有碱基,如果是个别碱基,那么也有可能是基因多态性,可能还有重大发现呢.如果是测序结果开始没有问题,后面出现问题,有可能是测序本身的问题,再试试看.如果所有位置都有双峰,那问题比较倾向于实验本身的问题,还要看你实验目的是什么:如果RT-PCR结果是用来分析基因的表达,那么两种不同片段都被计算在表达量上了,因此就彻底没有什么用了,重新开始吧.如果你是想克隆一个基因或者一个基因片段,那么没有关系,把RT-PCR扩增的片断纯化后装到任何一个载体里面,转化大肠杆菌,获得阳性克隆.按照概率,其中一部分应该是你需要的目的基因,酶切后进行测序鉴定,找出你需要的克隆就可以了.
