ripa和pmsf提取蛋白的原理

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独孤独19254836295问： 关于人细胞蛋白提取的问题？
会同县金钱回答： 既然只是做western的就不用这么麻烦,我通常是用RIPA、PMSF、磷酸酶抑制剂(视情况加)裂解细胞离心后,收集上清,加入loading沸水煮15min,然后直接做western. reducing condition:就是还原状态,二硫键被打开时,蛋白恢复成链状态,而不是缠绕成高级结构,用RIPA提取时,部分蛋白被还原,由于还原和非还原两种状态即跑出两条带,如果所用的抗体是结合在非缠绕部分,结果曝光即会出现两条相邻的带

独孤独19254836295问： 常用蛋白质提取缓冲液有哪些 - ？
会同县金钱回答： 1.SDS:强烈,可以把疏水性蛋白也充分提取出来,如膜蛋白2.尿素:有膜蛋白的损失3.RIPA:用于磷酸化蛋白的温和裂解,不破坏磷酸基团

独孤独19254836295问： 怎样提取干细胞中的蛋白? - ？
会同县金钱回答： 你的问题我没学过,以下是我在网上找的,希望对你有用! 细胞内蛋白质的提取: 1、Trixon-100或NP-40裂解液裂解; 2、冻融裂解法; 3、研磨法; “经典的就是分子克隆2讲的,用RIPA裂解,然后刮下来,冰裕30min,超生,4度离心10...

独孤独19254836295问： 如何取小鼠的脂肪组织 - ？
会同县金钱回答： 你好,提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分钟.

独孤独19254836295问： 提取细胞蛋白质:细胞加入裂解液后离心,是取上清液还是取沉淀物,上清液是什么成分多,沉淀物又是什么细胞加入RIPA和PMSF后,14000转离心5分钟... - ？
会同县金钱回答：[答案] 取上清液,上清液中主要含有蛋白质、糖类、核酸等;沉淀主要是一些细胞碎片,包括一些细胞器等等.

独孤独19254836295问： 用RIPA裂解液提取的蛋白可以用作elisa吗? - ？
会同县金钱回答： 不太推荐从提取蛋白自身的角度来考虑,RIPA裂解液可以使蛋白质的空间结构破坏,即破坏蛋白质分子的二级和三级结构,从而使抗原决定簇得以充分暴露在外,更有利于被检测出来; 而从试剂盒本身的角度来考虑,以双抗体夹心法为例,提取的蛋白中含有RIPA裂解液,当加入到包被的孔板当中时,可能同样会对孔板中的包被的抗体起到了裂解作用(如SDS),从而使其失去该有的特异性,这方面可能需要考虑在内的

独孤独19254836295问： 蛋白质的分离方法有哪些?它们各依据蛋白质的什么性质或特点? - ？
会同县金钱回答：[答案] (一)水溶液提取法 稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解.提取的温度要视有效成份性质而定.一方面,多数蛋白质的溶解...

独孤独19254836295问： 有了ripa裂解液怎么提取蛋白 - ？
会同县金钱回答： ripa裂解液提取总蛋白的效率不高,可以使用全蛋白提取试剂盒产品编号BSP003

独孤独19254836295问： 小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了吗 - ？
会同县金钱回答： 小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了 提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分钟. 胰腺组织含多种类型的细胞,要想提取胰岛A细胞的RNA,首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来,可以用流式细胞分选或磁珠分选等. 获得高纯度的胰岛A细胞后,再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了.

独孤独19254836295问： 细胞系裂解液和提取,有了ripa裂解液怎么提取蛋白 - ？
会同县金钱回答： 加到细胞培养皿里面 摇15分钟 然后刮下来吸出来 是做western的话加Loading buffer 再95°煮10分钟

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