ecor1平末端

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双隶18881205795问： 限制性内切酶EcoR1在哪里切下面的基因链 - ？
海丰县咪康回答： 1、识别位点的DNA序列呈二重旋转对称(即具有迥文结构);2、切割DNA均产生含5'-磷酸和3'-羟基的末端;3、 错位切割产生具有5'-或3'-突出的粘性末端;而沿对称轴切割双链DNA产生平头末端,也称钝性末端.4、少数不同的限制酶可识别和切割相同的位点,这些酶称为同切酶,如MboI Ⅰ和 Sau3A.

双隶18881205795问： 某一DNA被EcoRⅠ切割一次后产生哪一种末端?产生几个?() - ？
海丰县咪康回答：[选项] A. 黏性末端;2个 B. 平末端; 2个 C. 黏性末端;1个 D. 平末端;1个

双隶18881205795问： 如图为DNA分子的切割和连接过程:(1)EcoRI是一种 - -----酶,其识别序列是------,切割点是G与A之间的--- - ？
海丰县咪康回答： (1)EcoRI是一种限制酶,其识别序列是GAATTC,切割点是G与A之间的磷酸二酯键.切割结果产生的DNA片段末端形式为黏性末端. (2)不同来源的DNA片段结合需要的酶是E?coliDNA连接酶,此酶是通过在G与A之间形成磷酸二酯键,而起到“缝合”作用的.还有一种连接平末端的连接酶是T4DNA连接酶. 故答案为:(1)限制GAATTC 磷酸二酯黏性末端 (2)E?coliDNAT4DNA连接酶

双隶18881205795问： 为什么EcoR1和Nedl1两种酶切后电泳出现三条带,但是前面两条带亮度不一样,前面的亮,而后面的暗? - ？
海丰县咪康回答： 如果切的是质粒的话,很有可能是三条带.被双酶切的质粒,会有一条载体(eg.4kb)一条外源片断(eg.1kb),两条带;被单酶切的质粒,也会有一条带(5kb).但是为什么有亮暗就不太明白了. 如果切的是PCR产物的话,应该先将PCR产物跑个电泳,看一下PCR的特异性好不好.也可以把酶切之前和之后的PCR产物一起电泳,看三条带是因为PCR产生的,还是由于酶切后产生的.如果是酶切后产生的,那就是你的用的酶对你的目的基因进行了切割.

双隶18881205795问： 您好,我也是pet30表达两个很相近的条带,且表达量不大,不过还没有挂柱,请问您的这个问题怎么解决的! - ？
海丰县咪康回答： 没解决成功,因为实在是没道理,测序、挂柱、western我都做了,最后怀疑是阅读框的问题或者就是蛋白自身结构问题(比如带6个his同时末尾还有6个pro).我最后重做了,重新设计引物,重新TA克隆和连接表达载体了,很快呀,就一个周...

双隶18881205795问： 用Ecor1酶切割puc18载体.电泳时发现未切开.原因是什么?? - ？
海丰县咪康回答： 如果puc18载体上只有一处Ecor1的酶切位点,那你经过单酶切后,载体由环状变成线性,你只能看到一条带,如果是这种情况,其实已经切开了,你观察不出来而已.

双隶18881205795问： 什么是基因片段的粘性末端 - ？
海丰县咪康回答： 当限制性内切酶作用于特定的DNA时,会把这段序列沿着特定的切点切开,这个过程分两种情况: a:沿着中轴线切口(即沿着DNA双链中对应的磷酸二酯键)切开,得到的就是两个平末端; b:在中轴线的两端切口切开,得到的就是两个黏性末端. 例如:EcoRI限制性内切酶就可以识别G/AATTC的DNA序列,然后在G和A间切开,得到的就是两个黏性末端(之间可以根据碱基互补配对原则重组)

双隶18881205795问： 根据基因工程的有关知识,回答下列问题:(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有______和______.(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割... - ？
海丰县咪康回答：[答案] (1)经限制性核酸内切酶切割后能形成两种类型的末端,即平末端和黏性末端. (2)为了便于相连,两种不同限制酶切割之后所产生的黏性末端必须相同. (3)DNA连接酶分为两类:E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶.这二者都能连接黏性末端,此外T...

双隶18881205795问： 平末端是回文序列吗 - ？
海丰县咪康回答： 不是,双链DNA中的一段倒置重复序列,当该序列的双链被打开后,可形成发夹结构.这段序列被称为回文序列.其特点是在该段的碱基序列的互补链之间正读反读都相同(并非在同一条链上正读反读).例如5'GGTACC3'3'CCATGG5' 平末端的意思是当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的切口,是平整的,这样的切口叫平末端.

双隶18881205795问： 基因工程考研题目:试述将一个平末端DNA片段克隆到载体上EcoRI和Xhol限制位点之间去的方法? - ？
海丰县咪康回答： 答案的两个要点其实就是我们做载体构建两个基本侧略.平末端连接和粘性末端连接.第一种就是采用粘性末端连接的策略.通过在你的平末端目的片段两端分别加上含EcoRI和Xhol的酶切位点的接头序列,然后用这两种内切酶分别对目的片段和载体做双酶切,然后回收酶切后的载体和目的片段并连接.第二种就是采用平末端连接的策略.直接将载体双酶切后然后用DNA聚合酶补平所产生的粘性末端,然后和目的片段直接进行平末端的连接.

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