逆转录实验流程
反转录的实验步骤
反转录实验的详细步骤如下：首先，从细胞中提取总RNA是关键步骤。使用GIBCO公司的Trizol试剂，将细胞离心后去除细胞液，向沉淀中添加1ml Trizol，充分混匀并保持5分钟，直到细胞完全裂解形成均匀溶液。接着，加入200ul氯仿，振荡15秒后静置5分钟，然后在4℃、12000rpm离心5分钟，取出上清液，加入500ul异丙醇...
反转录的实验步骤
2. 在PCR过程中，需要严格控制温度、时间和引物的浓度等参数，以获得最佳的扩增效果。四、分析和鉴定反转录产物。1. 通过电泳、测序等方法对反转录产物进行分析和鉴定。这些分析可以确认反转录的效率和准确性，以及目标基因的表达情况。2. 根据实验结果，可以进行进一步的数据分析和解释，如基因表达量的...
实验小白,求问。如何根据目的基因筛选转录因子?
为了进一步验证预测的结合位点，可以使用JASPAR数据库进行验证。输入感兴趣的转录因子名称，该数据库将提供更为详细的信息，包括结合位点的具体序列、与转录因子的结合模式等。这些信息有助于评估预测结果的准确性。在进行实验时，根据实际情况调整和优化方法。以上步骤仅为一种参考流程，实际操作中还需结合实验...
逆转录PCR的实验步骤用到哪些试剂和仪器
一、实验器具与材料：1、移液器：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头：1ml、200μl、20μl 3、匀浆管：5ml 4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个 5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125ml的白色试剂瓶（...
CEL-seq 的特点和原理
由于之前一篇文章已经写过了👉 SMART-seq的特点和原理 ，而在技术原理上，CEL-seq最大的差异点便是 为逆转录中的oligo(dT)VN Primer增加了条形码标签 。实验流程图如下：（2）逆转录： 加入逆转录酶、dNTP、还有Barcode的oligo(dT)VN Primer等，对mRNAs进行反转录，获得cDNA第一条链，同时...
真核生物基因的转录过程和调控方式有哪些
实验证实,对于通过滑动搜索起始的转录过程来说,mRNA的翻译活性依赖于5’端的帽子结构。b.3’-加尾:3’UTR序列及结构调节mRNA稳定性和寿命 简述真核生物基因的转录是如何让调控的? 基因组水平,转录水平,转录后水平,翻译水平,翻译后水平 叙述真核生物基因的调控序列 启动子,增强子,沉默子,绝缘子。自己百度,这些都是...
列出5S rRNA基因的转录起始步骤。稳定转录起始复合物是在哪一点形成的...
【答案】：TFⅢA结合到C框上，引来TFⅢC，接着TFⅢB定位于起始位点的上游。从这点上讲，前起始复合物是稳定的，不需要TFⅢA或TFⅢC的持续存在。这可在体外用纯化了的组分进行这一反应来验证。结合上TFⅢB后，用高盐处理洗掉TFⅢA和TFⅢC，TFⅢB依然结合在上面，并能引来聚合酶Ⅲ。
真核生物的转录
在早期的实验指出,另外有一个转录因子TFⅡA会结合到起始复合体上并稳定其结构,但目前已证实TFⅡA只是在纯化TFⅡD时一起沉淀下来的蛋白而巳,在转录的起始过程中并非是必需的因子。 步骤二:TFⅡB 如图三,转录因子TFⅡB对起始复合体的结合与否,为转录起始作用过程的速率限制步骤(rate-limiting step)。而RNA聚合酶...
简述RNA转录的基本过程和特点?
除启动子外,真核生物转录起始点上游处还有一个称为增强子的序列,它能极大地增强启动子的活性,它的位置往往不固定,可存在于启动子上游或下游,对启动子来说它们正向排列和反向排列均有效,对异源的基因也起到增强作用,但许多实验证实它仍可能具有组织特异性,例如免疫球蛋白基因的增强子只有在B淋巴细胞内活性最高,胰岛素...
RT -PCR简介
在应用RT-PCR时，模板RNA的选择较为灵活，可以是细胞中的总RNA、mRNA，或者是体外转录的RNA产物。关键在于要确保所使用的RNA样品中不含RNA酶和基因组DNA的污染，这一步骤至关重要以保证实验结果的准确性。在反转录过程中，引物的选择取决于实验需求。对于真核细胞中短且无发卡结构的mRNA，可以选择随机...
南关区根痛回答：[答案] 你按照买的反转录试剂盒来做就行.(1)、从细胞中提取细胞总RNA用GIBCO公司的Trizol试剂提取细胞总RNA.按试剂使用说明操作:离心收集细胞,倾去细胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107细胞),混匀至室温5分钟,用1 ml加...
岳亲19145761117问： RNA反转录为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用RNA反转录过程步骤如下:将提取的RNA用DEPC水吹起,加入引物1、引物2,加... - ？
南关区根痛回答：[答案] 第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开,便于引物结合. 第一次冰浴1min为了退火,让引物能够结合RNA. 37度水域是让cDNA聚合. 第二次70℃水浴是再变性,让引物脱离模板RNA和cDNA第一链. 第二次冰浴是为了让cDNA-RNA复性成为cDNA-...
岳亲19145761117问： 培养细胞如何提取mRNA,如何逆转录? - ？
南关区根痛回答： 1 细胞总RNA的提取 1)、6孔板细胞(CNE-2)汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂(Gibco公司) 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5分钟(观察:液体变粘稠,细胞脱壁). 2)、将各孔内消化好的细胞...
岳亲19145761117问： PT - PCR操作流程 - ？
南关区根痛回答： 是RT-PCR啊. 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个60ml的棕色...
岳亲19145761117问： RNA的提取和反转录的实验步骤? - ？
南关区根痛回答： 小麦总RNA的提取 实验目的 从黄化小麦苗中提取总RNA,可以为cDNA文库的构建做好准备.我们重点是要保证RNA的完整性、产率、防止修饰和纯度,尤其是完整性、防止修饰和纯度.RNA是单链,2'OH是它的化学性质远比DNA活泼.所...
岳亲19145761117问： 由mRNA反转录形成cDNA的过程大致分为哪些步骤? - ？
南关区根痛回答：[答案] 在PCR仪中,95度变性,72度延伸,Tm温度退火,来回30-35个循环,最后4度,就能得到反转录的cDNA.
岳亲19145761117问： 逆转录PCR的PCR各步骤的目的是什么呢? ？
南关区根痛回答： 一步法操作简便,而且可以降低反应的污染风险,价格相对来说也贵一点,BIOG的一步法荧光定量PCR试剂我们实验室用过,实验效果的确还不错,特别方便.
岳亲19145761117问： rt pcr的扩增检测需要首先经过什么过程后才能进行pcr循环? - ？
南关区根痛回答： RT-PCR 称逆转录聚合酶链式反应 1、从RNA(或mRNA)反转录合成cDNA第一链: 2、于95℃加热5~10min,灭活反转录酶,使RNA—cDNA杂交体变性,然后迅速冰浴冷却.扩展资料 影响因素 RT-PCR反应受多个因素影响,如硫酸镁的浓...
岳亲19145761117问： 基因表达谱的获得与表示有哪些? ？
南关区根痛回答： 在基因芯片的实验中,首先选取来自不同状态的样本,如正常组织与肿瘤组织、不同发育阶段组织,或用药前后的细胞或组织等.其中一种被称为实验样本,另一种就是相...
岳亲19145761117问： 目前流行的甲型流感病毒的遗传物质是RNA,设计了以下实验来证明其遗传信息的传递方向,请补充实验步骤并 - ？
南关区根痛回答： 要证明甲型流感病毒遗传信息的传递方向,可设计以下实验;(1)将提取到的病毒RNA均分为两份,放入试管A、B;(2)向试管A中加入一定量的核糖核苷酸和RNA聚合酶(转录过程),向B试管中加入等量的脱氧核苷酸和逆转录酶(逆转录过程),在适宜条件下培养;(3)一段时间后,提取A、B两试管中产物利用甲基绿、吡罗红试剂判断结果. 预期结果结论:若是RNA复制过程,则A试管中能产生RNA,呈现红色,而B试管中不能产生RNA,不呈现红色;若是逆转录过程,则B试管中产生DNA,呈现绿色,A试管中不能产生DNA,不呈现绿色. 故答案为:(2)RNA聚合脱氧核苷酸逆转录 (3)①RNA复制 ②逆转录
