逆转录反应引物三种
RT -PCR操作步骤
然后，加入PCR反应缓冲液、MgCl2、dNTPs、DTT等，42℃反应2-5分钟。加入Superscript II酶，在42℃下进行50分钟的逆转录反应，随后70℃处理终止反应。再加入RNase H处理，以消除RNA残留，最后将样品冷藏保存。进入PCR阶段，准备反应混合物：在PCR管中，加入第一链cDNA、引物（10pM）、dNTPs、PCR缓冲液、...
反转录PCR注意事项
针对每个目标序列，需要通过单独实验来确定最佳循环数，以避免平台效应对结果解读的干扰。最后，DNA污染是PCR实验中的另一个潜在威胁。为了防范，可以使用DNA酶处理RNA样本，确保RNA样本的纯度。同时，尽量选择不同外显子的PCR引物，以消除基因和mRNA共线性带来的问题，进一步提升实验的可靠性。
RT-PCR简介
逆转录聚合酶链反应技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及...
逆转录过程中可作为复制引物的是
催化dNTP聚合生成DNA互补链，产物是RNA-DNA杂化双链，这是 RNA指导的DNA合成反应，此为逆转录作用。②杂化双链中的RNA被逆转录酶水解。③剩下的单链 DNA再作模板，由逆转录酶催化合成第二条DNA互补链，这是DNA指导的DNA合成反应。在催化 DNA合成开始时需要有引物,此引物为存在于病毒颗粒中的tRNA。
RT -PCR合成cDNA引物的选择
因此，与随机六聚体相比，Oligo(dT)引导的cDNA在数量和复杂性上通常更小。对于最特异性的cDNA合成，目标RNA的互补序列寡核苷酸作为引物是理想选择。使用这种引物，PCR反应通常从与mRNA 3'端最近的引物开始第一条链的合成。这种方法确保了只产生所需的cDNA，从而实现更精确的PCR扩增。
mRNA反转录形成cDNA的过程是怎样的
有反转录酶，可以以RNA为模版合成DNA。这过程需要引物，根据mRNA有3‘polyA尾巴的特点,可以用oligo-dT作为引物，合成cDNA,这样可以自然去除非mRNA的RNA的转录。也可以用随机引物去合成大量不同的cDNA。如果要反转录特定的mRNA，就根据它设计特异性引物反转录，这样理论上只有目的cDNA产生。
为什么用反向引物进行逆转录
同时，反向引物的特殊设计结构也可以增加PCR扩增产物的特异性，避免非特定放大，因此逆转录反应通常都需要设计特异性好的反向引物，在逆转录反应中，反向引物是用于逆转录反应的引物。逆转录反应是从RNA模板合成cDNA序列的过程，其中反向转录酶使用反向引物作为RNA模板的互补序列进行逆转录合成cDNA。
比较转录和复制的异同点
转录和复制的相同之处：都是酶促的核苷酸聚合过程；都以DNA为模板；都需要依赖DNA的聚合酶；聚合过程都是核苷酸之间生成磷酸二酯键，都从5'之3'方向延伸聚核苷酸链。区别：复制是两股链均复制，转录是模板链转录(不对称转录)原料，复制是dNTP转录是NTP。进行转录时，一个基因会被读取并被复制为mRNA，...
转录和DNA复制有什么相同点和不同点
3、转录和复制体系中所用的酶体系不同。4、转录和复制的配对的碱基不完全一样，转录中A对U，而复制中A对T。DNA复制条件 1、拓扑异构酶——帮助解开复制叉前后的超螺旋结构。2、DNA解旋酶——解开螺旋。3、Rep蛋白——帮助解开双螺旋结构。4、引物合成酶——催化RNA引物合成并与DNA链互补的反应。5...
mRNA反转录形成cDNA的步骤 高中选修3的水平就可以了
加入mRNA、逆转录酶、dNTP、寡聚T引物（或随机引物）、RNase酶抑制剂、水，在37或者42度孵育一定时间就可以了。
谢通门县西吡回答： random primer 随机引物~ 用于断裂片段的链接 等等 是一些随机的核苷酸序列
寿呼15284602761问： 定量PCR的质量评价 - ？
谢通门县西吡回答： RNA 定量的程序很多, 比较用了Ribogree,Agilent BioAnalyser,spectrophotometer,Nanodrop and the BioRad Experion 来定量同样的样品.结果显示没有哪两种方法得到同样的分析数据.所以用不同的方法进行定量是不明智的.因此,我们需要...
寿呼15284602761问： 逆转录PCR的三种循环是什么? ？
谢通门县西吡回答： 逆转录PCR三种循环①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链
寿呼15284602761问： 反转录不需要引物吗 - ？
谢通门县西吡回答： 需要.合成cDNA的试剂盒一般提供随机引物.如果是要mRNA, 反转录就用poly-A引物.
寿呼15284602761问： 请教反转录cDNA的体系中,Random 6 mers是什么啊? - ？
谢通门县西吡回答：[答案] 这个体系是TaKaRa反转录试剂盒中的体系,稍有不同的是第二个PrimeSciptTMRT Enzyme Mix I,试剂盒中为0.5μL.Total ... 包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物. Oligo dT Primer适用于具有Poly(A)Tail的RNA,因...
寿呼15284602761问： 什么叫PCR引物 - ？
谢通门县西吡回答： PCR是在体外由酶促合成特异DNA片段的一种新方法.在反应液中含有模板DNA、人工合成的目的片段的5′端和3′端PCR引物、合成DNA的四种脱氧核苷酸底物(dNTP)、一种耐热的DNA聚合酶(Taq酶),以及含各种离子的缓冲液.此反应...
寿呼15284602761问： pcr技术扩增 - ？
谢通门县西吡回答： PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能...
寿呼15284602761问： 反向PCR怎么做 - ？
谢通门县西吡回答： 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.
