细菌双杂交系统
酵母双杂交系统的简介
酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid system）的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。反式转录激活因子，例如酵母转录因子 GAL4在结构上是组件式的（modular），往往由两个或两个以上结构上可以分开，功能上相互独立的结构域（domain）构成，其中有DNA...
酵母双杂交法的原理?
酵母双杂交法的原理：典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作...
酵母双杂交的基本原理
双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。80年代的工作表明，转录激活因子在结构上是组件式的（modular）, 即这些因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成, 其中有DNA结合结构域（DNA binding domain，简称为BD）和转录激活结构域（a...
酵母双杂交技术与蓝白斑筛选的区别
酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质分别克隆（融合)到酵母表达质粒的转录激活域(如GAL4等)的DNA结合结构域(DNA-BD)和转录激活域(AD)上，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子。蓝白斑筛选主要为基因互补与...
快问快答12| GAL4系统酵母双杂的原理
原理揭秘 首先，GAL4系统的核心是真核生物中常见的转录激活因子GAL4，其结构独特，分为DNA结合域（BD, DNA-binding domain）和转录激活域（AD, Transcriptional activation domain）。在双杂交实验中，我们将两个待测蛋白分别融合到BD和AD的载体上，如Bait（诱饵）和Prey（猎物）载体。当这两种融合蛋白在...
如何用酵母双杂交系统探究蛋白质的功能
这项改进不仅简化了实验操作, 而且也提高了双杂交的筛选效率。在研究蛋白质的结构功能特点、作用方式过程中, 有时还要通过突变、加抑制剂等手段破坏蛋白质间的相互作用。 针对实际工作中的这种需要, Vidal等人发展了所谓的逆双杂交系统(reverse two-hybrid system)［10,11］。 这项技术的关键是报道基因U...
研究蛋白质之间相互作用的实验方法有哪些?
一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、...
酵母双杂交实验操作步骤大全的信息你有吗?
最近在做龙须菜高温胁迫表达cDNA文库的构建，选择的是CaM做诱饵质粒构建表达载体pGBKT-CaM，利用SMART技术将重组质粒转化到酵母菌Y187中，搜集了部分资料找到了一份比较全的酵母双杂交实验操作步骤。一.酵母双杂交系统的原理 酵母的转录激活因子GAL4由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域(domain)组成，N...
细菌的蛋白都可以用细菌双杂交来做吗
应用细菌双杂交系统可以研究环境因子对固氮调节蛋白NifL和NifA相互作用的影响。但实验结果中发现有假阳性的干扰。对照组大肠杆菌一种融合蛋白的质粒，也可导致菌株β－半乳糖苷酶活性的上升或生长在MacConkey\/麦芽糖平板上菌落呈浅红色的假阳性结果。改用薄层层析法检测菌体抽出液中特异性的钙调蛋白依赖型...
酵母双杂交系统的逆双杂交系统
针对实际工作中的这种需要,Vidal等人发展了所谓的逆双杂交系统（reverse two-hybrid system）。这项技术的关键是报道基因URA3的引入。URA3基因在这里起到了反选择的作用，它编码的酶是尿嘧啶合成的关键酶。该酶能把5-氟乳清酸（5-FOA）转化成对细胞有毒的物质。Vidal等人通过改造在URA3基因的启动子内...
临沧市基多回答： 细菌双杂交系统是新近建立的一种研究蛋白质间相互作用的方法.应用细菌双杂交系统可以研究环境因子对固氮调节蛋白NifL和NifA相互作用的影响.但实验结果中发现有假阳性的干扰.对照组大肠杆菌一种融合蛋白的质粒,也可导致菌株β-半乳糖苷酶活性的上升或生长在MacConkey/麦芽糖平板上菌落呈浅红色的假阳性结果.改用薄层层析法检测菌体抽出液中特异性的钙调蛋白依赖型腺苷酸环化酶活性,结果显示这一改进可排除细菌双杂交系统中可能出现的假阳性.
法梦19851984270问： 做细菌双杂交时为什么要用共转化呢?共转的效率好低啊.可否先把诱饵质粒转进去,做成感受态,再转文库? - ？
临沧市基多回答： 如果两种质粒同时转入细菌效率低的话,可以分两步转化:先转化一种质粒,然后把转化该质粒的细菌做成感受态,再转入另一种质粒,这样的效率会高很多. 转化效率低的一个原因是,制备感受态时细菌超过生长对数期了,变老了,这样对转化效率有很大的影响,尤其是在做双杂交的实验.
法梦19851984270问： 蛋白质互作方面的信息哪些生物论坛会有这方面介绍？
临沧市基多回答： 基因组的序列信息并不足以解释及推测细胞的各种生命现象,蛋白质才是细胞活性及功能的最终执行者,蛋白质之间复杂的相互作用决定着生物体的复杂程度,你可以到生物帮那里了解,那儿提供最新、领先、精准、高效、全面的生物产品和技...
法梦19851984270问： 酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 - ？
临沧市基多回答： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
法梦19851984270问： 如何用酵母双杂交系统探究蛋白质的功能 - ？
临沧市基多回答： 大多数双杂交系统往往同时使用两个甚至三个报道基因, 其中之一是LacZ. 这些改造后的基因在启动子区有相同的转录激活因子结合位点, 因此可以被相同的转录激活因子(如上述的Gal4蛋白)激活. 通过这种双重或多重选择既提高了检测灵...
法梦19851984270问： 酵母双杂交的局限性 - ？
临沧市基多回答： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
法梦19851984270问： 酵母单杂交系统与酵母双杂交系统的异同点? - ？
临沧市基多回答： 酵母双(单)杂交系统:Y2H膜蛋白系统;Grow' ' n' ' Glow GFP酵母单(双)杂交系统;Grow´ n´ Glow ACE1酵母双杂交系统;Y2H膜蛋白系统cDNA文库;酵母载体;酵母菌;酵母转化和质粒提取;β -半乳糖苷酶活性检测试剂盒; 噬菌体展示:pSKAN噬菌体展示系统;Anti-plll (g3p)抗体;抗体;pSKAN8载体;pMAMPF3-PSTI4载体;Lambda PS噬菌体裂解物;Anti-hPSTI 基因文库:Y2H cDNA文库;Lambda PS基因文库;
法梦19851984270问： 酵母双杂交系统有哪些优缺点 - ？
临沧市基多回答： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
法梦19851984270问： 哪位高人能帮我翻译一下这段英文生物文献 题目(Interaction between two murein (peptidoglycan)) - ？
临沧市基多回答： 我们还尝试去研究PBP1B和His-PBP3之间在相反设定值下的相互作用,即绑定His-PBP3来固定PBP1B.然而,His-PBP3强力跳回控制表层,32313133353236313431303231363533e58685e5aeb931333236363439使得(我们)不可能去研...
法梦19851984270问： 酵母双杂交系统的介绍 - ？
临沧市基多回答： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
