竞争法elisa注意事项
ELISA 实验注意事项知多少
竞争法ELISA不易用自视判断结果,因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异,一般均用比色计测定,读出S、P和N的吸光值。计算方法主要也有两种,即阳性判定值法和抑制率法。 a. 阳性判定值法 与间接法和夹心法中的阳性判定值法基本相同,但在计算公式中引入阳性对照A值,现举某种检测抗HBc的试剂盒为例。试剂...
直接竞争ELISA法
（1）包被：用包被液将包被抗原稀释到合适浓度，每孔100 μL加入板孔中，包被过夜。（2）封闭：将已包被的板用洗涤液洗涤2次，每孔加入120 μL封闭液，封闭一段时间，取出，甩干备用。（3）竞争反应：在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液，孵育一段...
ELISA法的缺点是什么?
ELISA实验所有方法的缺点很明显：1、重复性不好；2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性；3、不论仪器和手工操作，干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。1、直接法（directELISA）将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。优势：操...
ELISA 从原理到操作步骤全套详解
首先，样本处理要讲究效率，尤其是血清样本，抗凝后应尽快检测，以避免活性损失。分装样本并冷冻保存，避免反复冻融，必要时还需适当稀释。实验前的准备工作也需细致入微：试剂室温静置，确保活性稳定。洗涤液结晶需预先溶解，避免影响清洗效果。显色剂、稀释液、SA-HRP、抗体和标准品，务必按说明书精确配置...
如何用竞争elisa来定量检测抗体
竞争ELISA这种ELISA形式一般用于检测小分子抗原，比如抗生素、细胞因子和其它小分子药物等。而且竞争ELISA法的建立一般需要针对抗原（体）进行标记，标记的效果是未知因素。且竞争ELISA法的方法学优化需要考虑的因素也稍多。抗体作为一种蛋白质，分子量一般在70KD以上，有足够多的抗原决定簇，所以定量检测抗体...
直接竞争ELISA和间接竞争ELISA有哪些区别
直接竞争ELISA的模型为：将抗体包被在微孔板上，然后将HRP标记的抗原与样品同时加入。样品中的抗原与HRP标记的抗原竞争结合固相抗体，固相吸附的HRP标记抗原量与样品中抗原的浓度成反比。3. 抗原与抗体的结合机会 直接竞争法中，标记抗原和待测抗原均为液相，它们与固相抗体的结合机会相等，例如，如果有1...
ELISA方法类型和操作步骤
ELISA方法类型和操作步骤 ELISA，全称酶联免疫吸附测定，是广泛应用于抗原和抗体检测的技术。主要有三种基本类型：双抗体夹心法、双位点一步法、间接法测抗体、竞争法、捕获法测IgM抗体以及亲和素和生物素的ELISA。以下是各方法的操作步骤：1. 双抗体夹心法： - 将特异性抗体固相化，洗涤去杂质。
一文读懂酶联免疫吸附实验(ELISA) 丨超详细-酶联生物
实验步骤中，离心后的样本转移至EP管后，立即进行检测或冷冻保存，以保持活性。贴壁细胞的处理则需先吸去上清，用PBS清洗，然后加入RIPA裂解液，刮取细胞后离心，确保样品纯净。在ELISA准备阶段，试剂需预温，洗涤液需冷藏结晶后混匀，显色液需现配现用，而酶标记抗体和SA-HRP则需分别稀释并正确储存。...
免疫酶标ELISA的类型
2. 双位点一步法：此方法结合两个单克隆抗体，一个用于固相，一个酶标记。将样本与酶标抗体同时加入，简化了操作，提高了敏感性和特异性，提升了ELISA的测定水平。3. 间接法测抗体：抗原吸附在载体上，加入待测血清，抗体与抗原结合。随后，添加酶标记的抗球蛋白，洗涤后加底物显色，颜色深浅与抗体量...
请教间接竞争ELISA
间接竞争ELISA 间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原。加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结。洗去多余未键结二次抗体，...
河北省赛乐回答： ELISA试剂盒操作注意事项: 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存. 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果. 3.各步加...
雪冰19839188655问： elisa过程中有哪些注意事项? - ？
河北省赛乐回答： ELISA实验通用规则1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%.可用水和电子天平进行确定.但最好有专业人员进行矫正. 2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支.吸取不同的液体后,要更换枪头.即使是吸取标准品时. 3、...
雪冰19839188655问： Elisa中加样应该注意哪些问题 - ？
河北省赛乐回答：Elisa中加样须注意如下问题: 1. 吸取样品时,加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体,这样会导致液体残留在吸头上,加样不准确! 2. 不要将吸头伸入孔中,一方面若接触孔底可能压弯吸头,另一方面可能会将孔中的液体吹起来,加样不准确! 正确的加样方法应为45度,吸头贴着孔壁加入,应注意: 1. 角度太小,会使液体残留在孔壁上,导致加样不准确! 2. 吸头应当贴着管壁和液面的交界处!
雪冰19839188655问： 做ELISA实验需要注意哪些问题 - ？
河北省赛乐回答： Elisa实验中应该注意的问题,包括样品稀释、试剂盒平衡、样品和试剂的混匀、加样、温育等问题,希望对你有用处.Elisa试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点,深受广大用户朋友的喜爱.然而,在实验过程中,也需要注意很多...
雪冰19839188655问： 酶联的方法中竞争法洗涤时要洗涤彻底又不能洗涤过猛原因? - ？
河北省赛乐回答： (一)双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下: (1)将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质. (2)加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载...
雪冰19839188655问： 不同elisa检测方法的优缺点格是什么 - ？
河北省赛乐回答： 1. 直接法(direct ELISA) 将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要. 优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响. 缺陷:实验中的一抗都得用酶符号,但不是每种...
雪冰19839188655问： 直接竞争ELISA法 - ？
河北省赛乐回答： (1)包被:用包被液将包被抗原稀释到合适浓度,每孔100 μL加入板孔中,包被过夜.(2)封闭:将已包被的板用洗涤液洗涤2次,每孔加入120 μL封闭液,封闭一段时间,取出,甩干备用.(3)竞争反应:在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液,孵育一段时间.(4)洗板:用洗涤液洗涤5次.(5)显色反应:每孔加入显色溶液100 μL,孵育一段时间.(6)终止:每孔各加入终止液,在酶标仪上测定各孔的吸光值.
雪冰19839188655问： 如何用竞争elisa来定量检测抗体 - ？
河北省赛乐回答： 竞争ELISA这种ELISA形式一般用于检测小分子抗原,比如抗生素、细胞因子和其它小分子药物等.而且竞争ELISA法的建立一般需要针对抗原(体)进行标记,标记的效果是未知因素.且竞争ELISA法的方法学优化需要考虑的因素也稍多. 抗体作为一种蛋白质,分子量一般在70KD以上,有足够多的抗原决定簇,所以定量检测抗体一般用双抗体夹心法或者直接法,采用这些形式建立方法比较容易,试剂容易订购,方法学指标一般要优于竞争ELISA法.
雪冰19839188655问： ELISA实验检测抗体的实验步骤? - ？
河北省赛乐回答： 操作步骤: (1)将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原.洗涤除去未结合的抗原及杂质. (2)加稀释的受检血清,保温反应.血清中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物.经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体,...
雪冰19839188655问： 用于ELISA检测相应的抗原)需要纯化吗 - ？
河北省赛乐回答： 用于ELISA检测相应的抗原)需要纯化 ELISA实验所有方法的缺点很明显:1、重复性不好;2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰,易出现假阳性;3、不论仪器和手工操作,干扰因素较多.影响最大的是温度和时间.1、直接法(direct ELISA) ...
