敲低和过表达实验原理
脂质代谢物如何过表达和敲低
脂质代谢物过表达和敲低方法如下：1、过表达是指通过基因工程手段使得目标基因在生物体内表达的水平高于正常水平。在研究脂质代谢物的过程中，可以使用过表达技术来增强某些脂质代谢相关基因的表达，以提高某些脂质代谢产物的合成或降解速率。2、敲低是指通过基因敲除、RNA干扰、基因编辑等技术手段，使得目标...
过表达和敲低同时进行可以吗
过表达和敲低，是针对基因的表达量进行拷贝数的增加或是降低，通过过量的表达富集和低量的显著减少，来查看因蛋白量的多少对细胞行为或功能产生的影响变化。共培养概念要搞清楚，共培养是2种或2种以上的细胞生长在同一环境下，显然你这里不会把过表达和敲低的细胞放在一个培养皿培养。至于需要做几种，...
ceRNA机制研究案例(二)
在细胞分化时，Lnc-MD1断裂释放miR-133前体使miR-133表达升高，miR-133结合到HuR mRNA的3’-UTR上抑制HuR的表达从而使得Lnc-MD1又可作为miR-133的前体。作者首先进行荧光素酶实验检测HuR与Lnc-MD1的关系以及对Lnc-MD1过表达和敲低后检测HuR的表达，表明LncMD1对HuR的促进作用。随后分别用RIP和RNA pul...
“基因过表达”的原理步骤和应用是什么?
基因过表达的基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。 基因过表达的步骤是: 1,构建克隆。将目的基因连接在特定的载体上,载体种类依据表达系统差异而不同。在载体上一般含有增强基因转录的promoter,不同系统中采用的promoter完...
过表达敲低RNAseq找靶基因分析思路讨论
凡是做分子机制的研究，必做分子（mRNA\/lnc\/circ\/miRNA\/piRNA ...）的过表达敲低实验，观察细胞\/动物表型改变，说明分子的功能。那么我们要找该分子的下游调控通路，比如该分子调控了下游哪个分子，通过哪个信号通路呢？ 确定表型有改变的，而...
[实验思路]miRNA靶基因鉴定
实验验证相对复杂，主要通过荧光定量PCR和Western blot来检测miRNA影响下的基因表达变化，确认靶基因关系。转染或敲低miRNA的方法包括构建过表达载体（如pri-miRNA序列）和瞬时表达人工合成miRNA。荧光素酶报告基因法则是鉴定miRNA靶位点的常用技术，通过改变miRNA表达并检测荧光素酶活性来确认靶位点。总的来说，...
过表达质粒和敲低质粒有什么区别
原核过表达质粒：能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体。2、特性不同：真核过表达质粒：该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。原核过表达质粒：启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并...
什么是基因的“过表达”?
过表达，即表达过度，当基因表达（转录）的严格控制被打乱时，基因可能不恰当被“关闭”，或以高速度进行转录。高速转录导致大量mRNA产生，大量蛋白质（protein）产物出现。在RNA聚合酶的催化下，以DNA为模板合成mRNA的过程称为转录。在双链DNA中，作为转录模板的链称为模板链或反义链；而不作为转录模板...
RIP-qPCR实验验证技术
进行RIP-qPCR验证时，需要考虑实验设计的重复性，确保数据的可靠性。包括使用过表达组进行低表达蛋白检测，严格抗体选择和质控，以及微量IP样本的处理。同时，数据分析时应结合信号强度、文献支持和批量验证，提高验证成功率。尽管RIP-qPCR具有高通量获取互作库的优势，但其也存在RNA库质量难以保证、技术难度高...
Cancer:CDK5可能是诊断和治疗舌鳞状细胞癌的分子标记物
在进行CDK5敲除实验时，选择了SCC25和Cal27细胞系，因为它们的CDK5表达水平相对较高。选择SCC15细胞系用于CDK5过度表达研究。慢病毒构建了CDK5低表达和过表达细胞系。实验显示，CDK5敲除细胞的增殖能力显著降低，产生菌落数量减少。与对照组相比，注射CDK5敲除细胞的小鼠获得的异种移植肿瘤较小，而注射CDK5过...
临桂县普威回答： 转基因是过表达原有基因或者新表达原来没有的基因,而基因敲入是利用基因同源重组,将外源有功能基因(基因组原先不存在、或已失活的基因),转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组.基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种...
堵削19237252128问： 如何稳定敲低特定的miRNA - ？
临桂县普威回答： miRNA通过与转录本的相互作用,关闭或抑制基因的表达.最近的研究表明它们影响了约三成的基因.miRNA在多个组织中差异表达,这就让表达图谱分析成为研究的重点.同时,miRNA的过表达和抑制也是近年来常用的研究方法. 然而, ...
堵削19237252128问： 如果一个基因的表达量本身就很低,再敲降该基因有意义吗?q - pcr ？
临桂县普威回答： 有意义的.基因的表达还需要考虑RNA的稳定性,和蛋白酶的催化活性强弱.另外,基因的转录高低与生长环境(例如,培养基成份和温度),与时空性(不同组织和生长阶段)有关.你可以先NCBI搜索该基因的同源基因功能,再作判断.
堵削19237252128问： 在桌面上放三个相同的玻璃杯,在每个杯子装入不同的水,用筷子敲击哪个杯子音调高,哪个音调低?还要证明猜想 - ？
临桂县普威回答： 水越少,音调却低,敲击水杯,水越少,音调越高 原因如下 吹瓶子时,是瓶中空气振动发声,水越少,气柱越长,频率越低,音调越低. 敲击时,是瓶体振动发声,有水的部分瓶壁会因为水的不可压缩的特性,振动衰减很多,因此只是没水部分的瓶壁振动发声,水越多,发声瓶壁越少,频率越高,音调就越高
堵削19237252128问： 如何通过构建突变载体的方法使细胞内基因低表达 - ？
临桂县普威回答： 构建突变载体的方法主要是采用高GC多位点定点PCR扩增发,引起扩增时载体序列重叠,从而获得和构建突变载体.当然,突变载体要和目标低表达基因有同源性或相近性,在复制和表达时,可以实现替代.然后将突变载体导入宿主细胞中进行突变载体与宿主细胞基因之间进行同源重组,或进行变性复制等,可以将目的基因进行定点敲除,进而实现细胞内基因的低表达.
堵削19237252128问： 某一蛋白与细胞器互作有关,设计实验证明该蛋白的定位及生理功能与细胞器互作? - ？
临桂县普威回答： 蛋白定位的话做个免疫荧光就好了,功能试验做个敲低和过表达就行,然后看该细胞器功能有没有受到影响.关键是你这个问的太宽了,不太好针对性回答.
堵削19237252128问： 设计一个检测某一基因是否转录的检测方法的实验,简述其过程与原理. - ？
临桂县普威回答： 原理:转录是以一条DNA链为模板,合成出一条mRNA的过程.所以,检测某一基因在特定条件下是否转录,可以提取样品的mRNA,反转录成cDNA,然后用扩增该基因的PCR引物扩增,如果有条带就是说明转录,没有条带就是不转录. 过程: 1.提取样品mRNA; 2.反转录合成cDNA; 3.设计该基因特异的PCR引物; 4.进行PCR扩增,电泳,检测结果.
堵削19237252128问： 你认为声音会怎样变化请用高到低或低到高来表示声音的变化,并写出理由从左向右敲击杯子时声音的变化是? - ？
临桂县普威回答： 声音的变化从高到低主要是音色的变化,这是一个非常简单的物理现象.
堵削19237252128问： 考研试题 设计实验,检验一段新基因的功能,求解 .试从过表达/基因敲除/或者RNAi角度叙述,最好详细些 - ？
临桂县普威回答： 设计一种研究基因功能表达的实验,简要阐述下工作原理步骤什么的,好的给加分你好,你可以以小老鼠为例,白鼠、黑鼠、其他颜色的基因表达来做,比如说AB
堵削19237252128问： 如何研究一个转录因子对目的基因的调控 - ？
临桂县普威回答： 1.双荧光报告实验! 2.敲低转录因子基因,靶基因表达下调! 3.设计转录因子结合区突变体, Gel-shifting实验!
