两个质粒分开转染
一个细胞株可以转染两个质粒吗
可以共转染～但转染效率可能降低～要注意调整两种质粒的转染比例～同时转染三个质粒也是可以的～
细胞过表达中质粒如何构建及转染?
首先确定你是要做原核过表达或是真核过表达，两种的过表达载体不一样，而且不同的细胞中过表达用的promoter也不太一样，你要自己好好查查。选定载体后，构建质粒，先放入克隆菌中大量扩增，提取质粒。原核的话，直接转化表达菌表达就行了，真核的话需要进行细胞转染，简单点可以去买转染试剂盒，再按...
三个质粒转染比例
三个质粒转染比例相同。在转染时，三个质粒的比例可以根据实验需要进行调整。通常情况下，三种质粒的比例可以相等，即每种质粒的浓度相同，以确保它们在细胞中的表达水平大致相等。
转染是什么意思
转染：指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染两大类。并将目的基因构建到某个载体，将构建好的重组质粒导入细胞中,这样就能表达你所要的目的蛋白用于后续实验。1、瞬时转染 一种利用外源DNA或RNA进行基因表达的实验技术。质粒是一种小型环状DNA分子，...
质粒转染的操作步骤有哪些?
病毒转染，如腺病毒、逆转录病毒和慢病毒载体，适用于难转染细胞，已广泛用于基因转染实验。通过基因克隆方法获得重组病毒表达载体，并通过转导目的细胞实现转染。电转利用电脉冲在细胞膜上形成暂时的孔，使核酸物质能穿过孔进入细胞。转染过程中，细胞种类、密度、质粒大小、纯度、血清、抗生素、转染试剂等众多...
使用脂质体转染试剂进行细胞转染的方法
首先，确保细胞在293T培养的前一天到24小时后达到70-90%汇合，以0.4×10^6个细胞接种到六孔板，更换新鲜培养基。接下来，将LipoGene\/Lipofectamine试剂轻轻混合，分别加入质粒和脂质体溶液中，比例为1:1或1:2，质粒量通常为0.1-4μg，脂质体量为4-8μl。细胞类型、培养条件和转染参数会影响效率...
更换质粒需要换转染试剂浓度吗
需要。质粒可以稳定存在6个小时，如果在进行转染前没有进行更换转染试剂浓度，为了保证细胞正常生长所需的营养，需要在4～6小时后换用新的培养基，所以需要换转染试剂浓度。质粒广泛存在于生物界，从细菌、放线菌、丝状真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人类机体中都含有。从分子组成看，有DNA质粒，也有RNA...
转染是什么意思
1、瞬时转染是指外源DNA或者RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。2...
常规转染技术包括哪些分类?
探索基因表达的秘密：质粒转染与慢病毒转染的差异 在生物研究的前沿，基因的表达调控是关键。转染技术，如同魔法般，使真核细胞接纳外来DNA，赋予其新的遗传特征。其中，质粒转染和慢病毒转染是两种常见的手段，各有其独特的魅力和适用场景。质粒转染 质粒转染是一种快捷且灵活的方法。它涉及到将目的基因...
细胞转染效率低的原因及解决方案
其次，细胞污染也是导致转染效率低下的重要原因。确保转染细胞使用的质粒无菌至关重要。目前市场上的质粒提取试剂盒往往无法实现绝对无菌。一种解决方法是在提取质粒的最后一步使用75%乙醇进行沉淀，从而实现除菌。此外，质粒质量问题也会影响转染效率。转染用的质粒应保证数量，一般为2μg以上。若质粒纯度不...
永宁县西点回答： 细胞究竟是应该同时转染两种质粒呢还是只需一个质粒上 转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量,所以会有很多质粒.一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因.标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达.如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了.过表达倒没什么标准,每种蛋白表达量也不一致,选择适合自己的浓度就好.
依汤14711866269问： 一个细胞株可以转染两个质粒吗 - ？
永宁县西点回答： 可以共转染~但转染效率可能降低~要注意调整两种质粒的转染比例~同时转染三个质粒也是可以的~
依汤14711866269问： 酵母中可以转入两个质粒吗? 效率高吗?谢谢! - ？
永宁县西点回答： 应该可以,我做的是哺乳细胞,可以用2种质粒载体共转染,但同时转染时做稳定细胞株时筛选效率不高,可以考虑先转染一个,筛选稳定后再转另一个.如果做瞬时转染可以同时转,不需要考虑那么多
依汤14711866269问： 再转染的意思吗,还是两个基因构建到两 - ？
永宁县西点回答： 再转染的意思吗,还是两个基因构建到两 共转染就是把2种以上的质粒同时转染到同一个细胞.谁告诉你“但是质粒不相容啊,可以转两个质粒到同一细胞吗?”这个概念的?完全错误.我发表过的一篇文章,专门就是用这个共转染的方法,你可以看看当然,你把2个序列同时克
依汤14711866269问： 共转染是将两个基因构建到一个载体上,再转染的意思吗,还是两个基因构建到两个载体,再将两个载体转染?但是质粒不相容啊,可以转两个质粒到同一细... - ？
永宁县西点回答：[答案] 共转染就是把2种以上的质粒同时转染到同一个细胞.谁告诉你“但是质粒不相容啊,可以转两个质粒到同一细胞吗?”这个概念的?完全错误.我发表过的一篇文章,专门就是用这个共转染的方法,你可以看看当然,你把2个序列同时克...
依汤14711866269问： 两个不相容的YEP质粒在大肠杆菌中混了,各种相似,怎么分开得到纯的两种质粒? - ？
永宁县西点回答： 有一个很简单的方法,重新构建载体然后转化.(屁话...) 咳咳,说正经的,其实你可以用试剂盒把质粒提出来,跑个胶,分别切胶回收再转化就好啦... 如果胶大小很相似的话,就跑PAGE胶撒. 不行的话就涂平板了挑单菌落重新摇菌了提质粒做鉴定撒. 方法很多的塞,不用在知道上提问的撒. 嗯,希望能帮到楼主,不过一看都过去了近10天了,我猜楼主的问题肯定已经解决了. 祝实验顺利~
依汤14711866269问： 怎样将一基因和另一基因转入pROK2质粒中 - ？
永宁县西点回答： 怎样将一基因和另一基因转入pROK2质粒中 完全可以放在同一个质粒上,而且确实有人这么干过.不过实践中一般很少直接用IRES隔开,而是两个独立的转录单元,每个转录单元都有独立的启动子和翻译起始位点.这样在构建质粒时相对比较方便.不过,把两个基因放到一个质粒上去,往往造成这个质粒很大,造成转染质粒不便、转染效率低.
依汤14711866269问： 用质粒好还是还是质粒脂质体共转染还是腺病毒好些 - ？
永宁县西点回答： 转入质粒的原理:质粒上连的片段转录后能够自身互补形成双链(shRNA),在细胞内被细胞自己剪切成siRNA.两种转染方法在功能上是一致的.但是siRNA转染以后发挥作用的时间较短,用于短期抑制试验(一般维持一周以内).而因为质粒存在于细胞内比较稳定(载体上含有抗生素标记,可以筛选),能够持续表达产生shRNA,然后不断产生新的siRNA,因此维持作用的时间长(可以超过两周).另外用质粒还可以同时转入报告基因作为对照,确定质粒确实已经转染进去了.
依汤14711866269问： 质粒提取时,为何要去内毒? - ？
永宁县西点回答： 若做转染,需要去内毒素,因为内毒素会对细胞造成伤害,严重的甚至杀死细胞.在提取质粒的过程中,可能会残留有细菌(如大肠杆菌)产生的内毒素,虽然有时可能内毒素含量很少,但为了以防万一,若做转染,一般都要去内毒素.
依汤14711866269问： 质粒转染细胞 细菌污染 为什么 - ？
永宁县西点回答： 一般质粒提取最后的时候注意一下,用灭菌水和无菌的EP管,管口过火,质粒提取后如果要检样,用无菌枪头.转染完成之后,换培养液的时候要加双抗的培养液. 注意这些一般不会有问题.
