异硫氰酸胍法提取rna为什么要用醋酸钠

DNA抽提过程中为什么要加入醋酸钠~

醋酸钠的作用主要是促进DNA沉淀。pH4.8的醋酸钠溶液降低了反应混合物中的pH值，起到中和作用，从而染色体DNA或质粒复性、并聚集成不可溶的网络状聚合物。同时高浓度的醋酸钠亦会引起蛋白质-SDS复合物和高分子量的RNA分子发生沉淀。

一、实验原理 真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。

加醋酸钠是因为用醇沉淀核酸时,在一定盐离子浓度的环境下,沉淀的效果更好,提取质粒以及乙醇沉淀基因的时候都会加一些醋酸盐,一般醋酸盐的用量是体积的1/10,而醇是体积的2倍

TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。

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绥棱县19321289287： 有关RNA提取的问题 - ？
洪卷定坤： RNA极易变性,你那样不可能提到,顶多是DNA.提取RNA需要加入极强的蛋白质变性剂,比如:异硫氰酸胍!目前提取RNA的方法:用酸性胍盐/苯酚/氯仿抽提!注意事项:提取用的玻璃器皿要经过高温焙烧,塑料用具经过高压灭菌,不能灭菌的用0.1%的焦炭酸二乙酯处理,再煮沸以除净焦炭酸二乙酯;在破碎细胞细胞的同时加入强的变性剂使RNase失活;在RNA反应体系中加入RNase的抑制剂.

绥棱县19321289287： 在RNA提取中所用异硫氰酸胍溶液,为什么要加EDTA - ？
洪卷定坤： 你好,异硫氰酸胍是用来变性和裂解细胞用的,加入它以后,并不是立即加入EDTA,加入EDTA(去垢剂)是后来溶解DNA时候,防止离子对于DNA作用,保存DNA用,而异硫氰酸胍有其最适PH,前面加入了其他离子以及缓冲液.加EDTA是后来的,并不是同时的.

绥棱县19321289287： PCR反应模板核酸的提取制备方法是什么? ？
洪卷定坤： 异硫氰酸胍提取编辑异硫氰酸胍法提取制备模板核酸此法主要用于RNA的提取.标本为组织细胞及血清等.1.异硫氰酸胍消化液异硫氰酸胍4mol/L柠檬酸钠(PH7.0)25mmol/...

绥棱县19321289287： 酸酚法是什么 - ？
洪卷定坤： 主要是利用染色体DNA和质粒DNA 在酸性环境中变性和复性的差异来分离出质粒DNA1、用于提取质粒. ;2用于提RNA.异硫氰酸胍一酸酚法提取组织RNA,是一种很经典的提RNA的方法

绥棱县19321289287： 配制变性液、醋酸钠要用DEPC水吗？
洪卷定坤： 要用DEPC水配制,因为RNA特别容易降解,我以前提水稻的特别麻烦.但是有些高手随便不用超净工作台,研钵也不用处理,都可以提出来,并且非常好.

绥棱县19321289287： 异硫氰酸胍为何能提取RNA？
洪卷定坤： 异硫氰酸胍没有RNA酶和DNA酶活性,可以变性裂解细胞,所以可以用于提取RNA和DNA.

绥棱县19321289287： 简述DNA重组与分子克隆化基本原理与过程. - ？
洪卷定坤： 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应...

绥棱县19321289287： rna的提取还有何种方法?是比较各自的优缺点? - ？
洪卷定坤：[答案] 常见的的总RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、异硫氢酸胍法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、TRIZOL试剂快速提取法. RNA提取时,就变性剂的选择来说,CTAB(CTAB法)比异硫氰酸胍(RIZOL试剂法)...

绥棱县19321289287： transzol是什么 - ？
洪卷定坤： 一种生物化学试剂的名字 TransZol提取试剂,采用异硫氰酸胍法快速提取多种组织和细胞中的 RNA .在样品的裂解过程中,TransZol可保持 RNA完整性,同时裂解细胞,加入氯仿后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相,用异丙醇可沉淀回收RNA,有机相用异丙醇可回收蛋白质.

绥棱县19321289287： 异硫氰酸胍一步法分离纯化rna的时候为什么不适合富含甘油三酯的脂肪组织 - ？
洪卷定坤： 异硫氰酸胍一步法分离纯化rna的时候为什么不适合富含甘油三酯的脂肪组织 通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解.但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验...