怎样用紫外分光光度计测DNA质量和浓度？
首先，分光光度计测量的样品必须是均一的，摇匀后再测量结果会准确些。它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。
核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。
事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等:在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素:由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高(超过光度计的测试范围)。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值;混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。
取1μDNA，用ddH2O水稀释到1ml，以1ml ddH2O为对照，紫外分光光度计测定OD260，OD280，OD260/OD280(都在 1.8左右之间，说明 DNA样品纯度较高),concentration。
另，基因组DNA1％的琼脂糖凝胶电泳检测均呈现完整清晰条带没有拖尾，说明 DNA 样品的完整性好，也可通过DNA marker 推算出DNA浓度。
使用紫外分光光度计法测量，选择其中双波长法测量浓度，在260和280nm下测量，直接读数
急求紫外分光光度法的详细操作步骤
二、使用范围 凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物,根据在特定吸收波长处所测得的吸收度,可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。三、仪器 可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。主要由辐射源(光源)、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及...
紫外可见分光光度计的用法
752紫外可见分光光度计 仪器的工作原理 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的 吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的 吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减 弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，...
紫外可见分光光度计的使用
这是你还没有完全理解双通道紫外可见分光光度计的原理。其实最根本的原理同普通的分光光度计是一样的，为什么设置双通道，是因为其中一个通道是拿来放空白样的，也可以说是参比样。操作的时候，首先是将两个比色皿都充满空白液，用其中一个为基准调零，然后再测另一个比色皿，记下读书，这个是空白0...
如何用紫外分光光度计测细胞密度
首先培养一定浓度的纯藻液，再将藻液用培养液调整浓度为原液，十分之八原液，十分之六原液，十分之五原液，十分之三原液，大概五个点，分别涂布计数，测OD(一般是600)。得出在你培养下藻液的细胞浓度与OD之间关系的一元一次方程。以后培养藻液后，直接测OD，按照方程就可以得出藻液浓度了。自查...
用紫外可见分光光度法测定某样品
若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。三、材料、试剂及器具 1、 材料 提取的PUC19样品、PUC19标准样品 2、 试剂 灭菌重蒸水，TE缓冲液 3、 器皿 石英比色皿；UV-240紫外分光光度计 四、操作步骤 1、 UV-240紫外分光光度计...
使用紫外分光光度计时应注意哪些问题
使用紫外分光光度计时应注意：\\x0d\\x0a1）比色皿架及比色皿在使用中的正确到位问题。有些使用者对这个问题不够重视，因操作不当造成偶然误差，严重影响分析结果。首先，应保证比色皿不倾斜放置。稍许倾斜，就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致，还可能使入射光不能全部通过样品池，导致...
如何用紫外分光光度计,测量水中二甲苯的浓度(步骤)?
常用的波长范围为:(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm(按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本...
紫外可见分光光度法特点和适用范围
用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。应用范围包括：①定量分析，广泛用于各种物料中微量、超微量和常量的无机和有机物质的测定。②定性和结构分析，紫外吸收光谱还可用于推断空间阻碍效应、氢键的强度、...
珠宝宝石用紫外-可见分光光度计基本原理、使用方法、注意事项、用途_百 ...
分光光度计的分类方法有多种：按光路系统可分为单光束和双光束分光光度计；按测量方式可分为单波长和双波长分光光度计；按绘制光谱图的检测方式分为分光扫描检测与二极管阵列全谱检测。基本工作原理 紫外分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外可见光照射被分析的有机物质，引起分子...
紫外可见分光光度计中,信号显示系统显示方式有哪些?
样品处理流程：有些仪器提供自动进样和处理功能，能够自动进行样品处理流程，包括样品进样、清洗和测量等步骤。紫外可见分光光度计的信号显示系统提供了多种显示方式和功能，以满足用户在分析和研究中的不同需求。这些系统能够提供实时数据监测、光谱扫描、数据处理和自动化功能，为用户提供了丰富的信息和便利...
厍刘复方： 一般用微量分光光度计比较快速简便,DNA浓度会直接在软件上显示,A260 / A280的比值用于评估样品的纯度, 纯净的样品比值大于1.8,低于2.0.较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0.
覃塘区17619785723： 怎么用可见紫外分光光度计测定样品? - ？
厍刘复方： 第一步,知道你所需要测量物质的特征吸收波长是多少?这个可以在国家标准、行业标准或其他相关标准或方法.例如测量总氮的话,就需要220和275nm这2个波长,所以必须买紫外的光度计,并且最好带双波长测定功能,例如测总磷是697...
覃塘区17619785723： 如何使用简单的实验方法检测DNA纯度?？
厍刘复方： 用紫外分光检测就很简单啊 将待测DNA溶液作适当稀释,选用光程为0.5cm的石英比色杯,在紫外分光光度计上测定OD260和OD280的值,按以下公式计算DNA浓度. DNA浓度(ng /µL)=OD260*50*稀释倍数 当OD260/OD280< 1.8,表示蛋白质含量较高 当OD260/OD280> 2.0,表示RNA含量较高 当OD260/OD280=1.8~2.0,表示DNA较纯
覃塘区17619785723： DNA质量检测相关方法,及效果 - ？
厍刘复方： 对于基因组DNA质量检测主要包括:基因组DNA片段大小的确定,基因组DNA浓度的测定,基因组DNA纯度的测定三方面. 用到的技术方法有:琼脂糖凝胶电泳(确定片段大小),使用紫外分光光度计测定基因组DNA溶液的OD值(浓度和纯度的测定,OD260/OD280应该在1.8左右,高了表明有RNA污染,低了表明有蛋白质污染)
覃塘区17619785723： 提取基因组dna后,怎么判断dna纯度与质量 - ？
厍刘复方： 用紫外分光光度计测OD值 A260/A280正常1.8左右 如果制备的DNA样品A260/A280<1.7,说明样品中含酶和蛋白质过高,应将样品用酚、氯仿、异戊醇抽提,再用乙醇沉淀DNA A260/A280>2,说明样品中RNA过高,可用RNase消化后,用酚、氯仿、异戊醇抽提,再用乙醇沉淀DNA
覃塘区17619785723： 检测核酸纯度方法 - ？
厍刘复方： 紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的: 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理,掌握测定方法.原理: 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml...
覃塘区17619785723： 测定DNA含量用什么方法? - ？
厍刘复方： 组成核酸分子的碱基,均具有一定的吸收紫外线特性,最大吸收值在波长为250~270nm之间.核酸的最大吸收波长是260nm,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础. 在波长260nm紫外线下,1OD值的光密度相当于双链DNA...
覃塘区17619785723： 如何用分光光度计测量pcr产物浓度?具体一点,需要具体一点,权威一点. - ？
厍刘复方：[答案] 在260nm下测定其吸光值.注意,这是紫外. 计算:DNA的质量浓度(mg/L)= 50*A260nm 原理:核酸分子中的嘌呤碱和嘧啶碱由于碱基共轭双键的作用,具有强烈的紫外吸收,最大吸收值在260nm处. 不能再具体了吧,虽然很简单,但已经够用啦. ...
覃塘区17619785723： 可用什么方法测定DNA的含量? - ？
厍刘复方： 紫外分光光度计 OD260/280比值,如果浓度够大的话可以适当稀释,是OD260在0.1到1之间最好,OD260值为1时 双链DNA一般为50ng/ul.单链DNA一般为40ng/ul,需要具体测的话还是用荧光定量DNA检测试剂盒,用多功能酶标仪检测,还有一种就是跑电泳,根据已知浓度条带的亮度对比你提的DNA亮度,这个需要分析软件,肉眼是无法正确比较的.
覃塘区17619785723： 如何鉴定质粒DNA浓度和纯度 - ？
厍刘复方： 1、用紫外分光光度计测浓度和纯度 2、跑电泳看条带
