HUVEC人脐静脉内皮细胞培养要点
SetsukoShioda等人研究发现，HUVEC细胞株18-30代的倍增时间为23.5个小时，24-27代的倍增时间为67个小时，27-30代的倍增时间为84个小时，32-34代的倍增时间为100个小时。培养至40代后，细胞形态出现多样化，有些细胞变大或变小，有些细胞出现多核；细胞密度下降、倍增时间延长。最后细胞在第54代停止生长，ATCC的预期寿命也显示在50-60代。
2018年，Setsuko Shioda等人发现HUVEC细胞株（passage 31）在贴壁汇合时细胞与细胞之间存在间隙，这与典型的内皮细胞特征有所不同。
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4 mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm器皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存
冻存条件
60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存
【推荐海星HyCyte™一步冻存液(即用型、无血清、无需程序降温)】
1. 待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。
2. 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。
3. 离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。
注意: 细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞的状态。如离心后用冻存液重悬计数，请将细胞放置于4℃冰箱内，以减弱细胞代谢，较好的保持细胞状态。
4. 如使用海星一步冻存液，冻存管直接竖直放入-80℃冰箱即可完成“一步”冻存。如使用程序冻存液，需将冻存管放入提前预冷的程序降温盒后放入-80℃冰箱。
5. 24小时后可将冻存管转移到液氮进行长期保存。
注意: 细胞不可长期保存在-80℃冰箱中。建议24 h后尽快转移至液氮中。
培养基： 内皮细胞培养基础培养基＋5% FBS＋1%内皮细胞培养添加剂+1% P/S
推荐传代比例： 1:3-1:4，每2-3天换液一次
培养条件： 气相：95%空气+5%CO₂，温度：37℃
细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 预热完全培养基、胰酶、PBS
2. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
3. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA 货号: GUTP-R001）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
4. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
5. 将细胞悬液按1：2到1：4的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
1. 该细胞为有限传代细胞系，在体外培养可传20代。请注意代次控制。
2. 该细胞培养难度较高，建议使用专用培养基。
3. 永生化的人脐静脉内皮培养体系： 内皮细胞基础培养基＋5% FBS＋1%内皮细胞培养添加剂+1% P/S。
推荐使用海星人脐静脉内皮细胞完全培养基，货号：TCH-G406。
4. 如选择使用其它品牌培养基，可选：
（1） 内皮细胞基础培养基推荐：ScienCell（Cat.No.1001）
基本成分介绍：永生化的人脐静脉内皮培养体系是专门为血管内皮细胞体外培养设计的最适于其生长的完全培养基。包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质和低浓度胎牛血清(5%)。该培养基的配方能够选择性的促进正常血管内皮细胞体外培养中的增殖和生长，并为其达到最理想营养平衡状态。
（2） 胎牛血清推荐：HyCyte™干细胞预筛选胎牛血清 （Cat.No.FBP-S001）
基本成分介绍：适用于有较高要求的细胞和较难获得的细胞，如血管内皮细胞。
（3） 内皮细胞培养添加剂推荐：ScienCell（Cat.No.SC1052)
基本成分介绍：内皮细胞培养添加剂(ECGS)是一种从牛脑垂体提取的培养基补充剂，含有培养血管内皮细胞所必需的生长因子、激素和蛋白质。该补充剂最大限度地促进永生化的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的生长，该因子的添加对维持永生化的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）形态至关重要。
（1）请务必使用以上两种推荐培养体系进行永生化的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的培养，否则可能导致细胞无法增殖。
（2）T25瓶细胞由于运输过程影响细胞会分泌产生的少量小黑点，不是污染问题，属正常现象，使用专用培养体系进行培养后黑点会逐步减少。
（3）永生化的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）对血清的品质要求较高，请使用高品质胎牛血清进行培养。如细胞状态欠佳，建议将胎牛血清的浓度提高到10%。
HUVEC细胞培养攻略
揭秘HUVEC的细胞世界：从营养到生长策略 人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC），作为血管构建的关键细胞，其在实验中的角色举足轻重。在选择细胞模型时，科学家们通常青睐于使用这种细胞，而非其他类型的内皮细胞。通过慢病毒转染，永生化的HUVEC会被赋予RFP或GFP基因，便于观察...
HUVEC细胞培养攻略
在进行血管内皮细胞实验时，人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC）是首选，因其特性独特且在科学研究中常用。这些细胞通过慢病毒转染技术获得永生化，并可能携带RFP或GFP基因。培养HUVEC时需特别注意其营养需求，它们对F12培养基、胎牛血清、肝素和血管内皮生长因子要求极高。健康...
小白必看!手把手教你复苏传代人脐静脉血管内皮细胞!
对于初次接触的人，这里提供详细步骤教你如何复苏和传代人脐静脉血管内皮细胞（Primary HUVECs\/货号：DFSC-EC-01），确保实验顺利进行。复苏步骤从外包装取出细胞瓶，表面喷酒精，移除封口膜，在显微镜下检查细胞状态。将细胞在37°C，5% CO2无菌培养箱中培养4-6小时，然后倒掉多余培养基，保留适量。过夜...
huvec上是否有vegf受体
采用改进后细胞体外侵袭实验分别研究不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810 胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱；粉防己碱对HUVEC 人类脐静脉内皮细胞迁移能力的抑制作用；VEGF 对人结肠癌HT229 细胞体外侵袭能力的影响。
转染试剂哪种好
26.HEPG2 细胞系转染试剂：用于人肝细胞癌细胞的转染试剂。27.HMEC 细胞系转染试剂：用于人乳腺上皮癌 (HMEC) 细胞的转染试剂。28.HT-29细胞系转染试剂：用于人结直肠腺癌细胞的转染试剂。29.HUH-7细胞系转染试剂：用于人肝癌细胞的转染试剂。30.HUVEC 细胞系转染试剂：用于人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)...
“ZAS”是什么意思?
ZAS的英文原词是由酵母多糖活化的人血清构成，其拼音为“fā jiào méi jī huó xuè qīng”，在英语中的使用频率大约为2790次，属于Miscellaneous类别，但具体分类并未详细说明。在实验方法中，ZAS常被用于研究，如在体外，它会被用作刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）单层，通过放射免疫法（RIA）和酶...
原代培养的人脐静脉内皮细胞传代后还需要一直加内皮细胞生长因子吗...
是需要一直加生长因子的呀，我们养的时候一直用的专用的内皮细胞培养基，是ScienCell的好像，培养基中是含有生长因子的，养的时候效果很好呀
氰酸盐详细资料大全
氰酸盐诱导人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤 探讨尿素水解产物氰酸盐(cyanate)对体外培养的血管内皮细胞氧化应激和功能障碍的作用。培养人脐静脉内皮细胞系(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)，通过CCK8法检测氰酸盐对内皮细胞活力的影响；采用DCFH-DA法检测ROS水平；用比色法测定NO水平 ；分别...
哪些病毒可以感染仓鼠肾细胞
T\/G HA-VSMC(人主动脉血管平滑肌细胞)HUVEC(人脐静脉血管内皮细胞)A10(大鼠主动脉血管平滑肌细胞)3T3-L1(小鼠脂肪细胞)A9(皮下结缔组织细胞)BHK(幼仓鼠肾细胞)细胞：是生命活动的基本单位，一切有机体(除病毒外)都由细胞构成，细胞是构成有机体的基本单位。1.细胞具有独立的、有序的自控代谢体系，是...
有哪位高手能详细指导一下用transwell板做细胞趋化实验的具体方法和步...
在研究粉防己碱对HUVEC 人类脐静脉内皮细胞迁移能力的抑制作用没有将多余苏木素洗去,直接脱水、透明,造成细胞图片背景模糊,细胞不清楚(见图1) 。在作不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810 胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱实验时我们将其置于盛有自来水的烧杯中,反复漂洗几次,将多余苏木素洗去再行脱水、透明;...
标省参志： (转载,仅供参考)1. 37℃水浴预热培养液(HUVEC-004).2. 从液氮中取出HUVEC的细胞管,快速将其置入37℃水浴中解冻,直到管中只剩下最后一片结晶(注意:不要让水没过产品管). 用75%的酒精擦拭产品管外壁.3. 将HUVEC的细...
溧阳市17886677655： 如何冻存细胞 - ？
标省参志： 一、材料(一)仪器 1. 净化工作台 2. 离心机 3. 恒温水浴箱 4. 冰箱(4℃、-20℃、-70℃) 5. 倒置相差显微镜 6. 培养箱 7. 液氮冰箱 (二)玻璃器皿 1. 吸管(弯头、直头) 2. 培养瓶 3. 玻璃瓶(250ml、100ml) 4. 废液缸 (三)...
溧阳市17886677655： 有哪位高手能详细指导一下用transwell板做细胞趋化实验的具体方法和步骤吗? - ？
标省参志： 1 材料与方法 1. 1 Matrigel:Becton Dickinson Compary, - 20 ℃保存; Tanswell plate:Costar ,USA , # 3422 ,聚碳酯膜微孔直径为8μm; 苏木素染液,梯度乙醇,二甲苯溶液. 1. 2 趋化因子的制备 取传代第二天长势良好的NIH3T3细胞,无血清培...
溧阳市17886677655： 请教HUVEC的培养基 - ？
标省参志： 培养HUVEC很多文献上用M199和DMEM也都可以,也可以试试用M199, 加20%FCS和适当的生长因子.如果培养原代,推荐用M200,
溧阳市17886677655： 求HUVEC细胞培养高手指导 - ？
标省参志： 1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响.细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘.细胞培养工作包...
溧阳市17886677655： huvec迁移实验所用的用的什么板子 - ？
标省参志： 采用改进后细胞体外侵袭实验分别研究不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810 胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱;粉防己碱对HUVEC 人类脐静脉内皮细胞迁移能力的抑制作用;VEGF 对人结肠癌HT229 细胞体外侵袭能力的影响.
溧阳市17886677655： hbl - 100细胞用什么培养基 - ？
标省参志： 培养某一类型细胞没有固定的培养条件.在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长.总之,首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养,各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基(SFM).在开始进行新的...
溧阳市17886677655： 我的HUVEC细胞每次消化五分钟,可是还是有大量的细胞团,该怎么办啊 谢谢大神们了 - ？
标省参志： 例如T25的培养瓶,洗过后加胰酶0.5ml消化,等大部分细胞变圆,这时使劲的用手拍一下的培养瓶侧壁,细胞会大多数脱落,及时终止消化.
溧阳市17886677655： 哪里可以买到HUVEC细胞,需要什么培养基 - ？
标省参志： 很多地方都能买到HUVEC细胞啊培养基一般是用的LSGS-M200培养基
溧阳市17886677655： 转染后的HUVEC进行培养,筛选用kana的浓度应该是多少 - ？
标省参志： 不行的呀,amp和kan都是筛细菌用的,对细菌有杀死作用,但是对人类细胞无毒啊.医院输液都可以用卡纳的,要是对细胞有毒的话这不是相当于杀人吗... 质粒上的kan抗性只是为了连接之后转化涂板和摇菌时筛菌用的,不是转染之后筛细胞用的...如果筛细胞的话,要用puromycin或者G418... ps.你们用lipo2000可以转HUVEC?我们一转就死啊...你们的HUVEC是几代的?培养皿底部用的什么?collegen?
