sds聚丙烯酰胺凝胶电泳跑不到胶下部
溴酚蓝指示剂跑进去没有,有没有在合适的位置?
染料配制的有无问题,最好找别的胶试一试。另外脱色液也很重要,加热(55度)脱色。
可以同时上一个预染Marker看一看。
如果配胶和电泳试剂没问题的话,估计是样品处理的问题。
样品是否残留强极性强电离的有机酸或离液剂,比如TCA或盐酸胍,以前遇到过。溴酚蓝跑着跑着就变黄了。
你的问题叙述的不是很明确,蛋白多大,用的什么MARKER,跑胶时间,电压,胶浓度是多少都没有交代,而且也没有胶图,仅提几点建议:
1.看你的问题,应该是胶浓度太低了,所以是高分子量蛋白分出来,低分子量还没来得及分开胶就已经跑到头,跑出去了.去查查多少浓度的胶适合分多少KD的蛋白,把胶的浓度调高点,比如说15%或者12%
2.介于你说你有一次跑出来了?你没有上图,我不能肯定你的试验结果,如果你确定浓度真的没问题,怀疑一下你的试剂是否出问题了.有可能是试剂有问题造成的交联不上,导致胶孔过稀,本质上和浓度太低一个道理.当然也有可能是电泳缓冲液的问题.(另外楼主你不会是漏液所以不往下跑吧~?呵呵)
3.看楼主应该是个新手(随便猜的咯:)),说一些配胶的经验吧.
第一.AP的质量要好,我们对比过一些国产的AP和进口的AP效果,明显进口的好用,胶凝的快,质量也高.
第二,胶凝了后不要急着用,也不要急着放四度,给他充分的时间交联,大约4-6个小时吧.就放室温,不要放37度.
第三,有些新手为了省时间,往往过量的加AP,这样交联效果会下降.
第四,浓缩胶一定要足够,跑出来的条带才好看
第五,液一定要混匀再倒胶
不知道楼主是自配的液体还是买的现成的试剂盒?如果是前者,其实这东西很基础,也不贵,还是买试剂盒的吧,质量有保证的.有一些国内的公司就很不错.
跑胶时曹内有冒泡么? 溴酚蓝指示剂跑进去没有,有没有在合适的位置?染料配制的有无问题,最好找别的胶试一试。另外脱色液也很重要,加热(55度
调整胶浓度,和跑胶时间
上个图看看!~~大家也好给分析一下
可能是你的胶不均匀,有没有这种可能,你把浓缩胶和分离胶灌反了?
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纵费健胃: 溴酚蓝指示剂跑进去没有,有没有在合适的位置? 染料配制的有无问题,最好找别的胶试一试.另外脱色液也很重要,加热(55度)脱色. 可以同时上一个预染Marker看一看.
鹤壁市13384209021: 聚丙烯酰胺电泳跑DNA,带跑不下去 - ?
纵费健胃: 1. 装板子的时候液体是不是漏了,跑电泳的时候,两块板子内部的液体要高于较低的那块玻璃板,否则电泳就无法形成一个回路,样品就跑不下去了. 2. 跑电泳的时候电压过高或者温度过高,或者胶太稀了,条带就跑得不太稳. 3. 做胶的时候一定要混匀,要凝结充分,水压的时候要轻缓.而且要防止漏胶. 你再认真仔细地做一遍.注意以上的几个点.
鹤壁市13384209021: 聚丙烯酰胺凝胶电泳,但是样品只停留在浓缩胶和分离胶之间???我延长了时间但是没用.分离胶4%浓缩胶7% - ?
纵费健胃: 这种情况一般是分离胶太浓了,或者说蛋白比胶孔大,进不去.你是说分离胶7%,浓缩胶4%吧?已经挺稀了,可能是蛋白沉淀了,凝聚成大块,所以进不去.这一般是样品太浓,变性时易沉淀.可以先稀释样品.也可能是配胶时有错误,比如缓冲液pH不对,储液挥发浓缩等等.如果Marker也进不去,就是胶的问题;如果marker正常,就是样品问题.
鹤壁市13384209021: SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳不出带的原因 - ?
纵费健胃: 如果Marker也没有出带,说明电泳及染色有问题,如电泳缓冲液的配制,胶的制备,染色方法等. 如果Marker出带而目的片段没有,说明没有目的片段,应该是前期实验的原因.或跑出胶外,说明片段太小,或电泳时间太长. ------中国西部生命科学论坛
鹤壁市13384209021: 为甚sds page电泳的条带都跑下面去了,没有跑开呢?(图1)是胶出了什么问题还是加样少了呢? - ?
纵费健胃: 跑的时间太长了,到最后跑到一起了,最好在指示剂到下沿时就停止电泳,或者电压太高,换小点的试试
鹤壁市13384209021: SDS PAGE 电泳为什么会跑歪? - ?
纵费健胃: 你好, 有可能是分离胶没有摇匀,导致密度不均;也有可能是两侧上样量有差别导致压力不对称;或是胶没有配齐...希望能帮到您,望采纳
鹤壁市13384209021: SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳不出带的原因 - ?
纵费健胃:[答案] 如果Marker也没有出带,说明电泳及染色有问题,如电泳缓冲液的配制,胶的制备,染色方法等. 如果Marker出带而目的片段没有,说明没有目的片段,应该是前期实验的原因.或跑出胶外,说明片段太小,或电泳时间太长. ------中国西部生命科学论坛
鹤壁市13384209021: sds - page电泳为什么跑不出蛋白条带?连marker的也没有.请高手指教,详细一点. - ?
纵费健胃: 上样缓冲液混合后进行变性,温度必须要超过95°,时间5—10min,如果没把握,可以处理10min.也有可能是漏胶,制胶时封胶要严,操作不熟练时可以多加一点,待聚合后用去离子水加入电泳槽内,看看是否会漏,如果不会把水倒掉,滤纸吸干后再加入凝胶.加样的问题,加样时注意不要刺破凝胶,以避免样品直接漏出.
鹤壁市13384209021: 双向电泳第二步SDS - PAGE跑胶的问题 - ?
纵费健胃: 1, 提取蛋白的时候要充分超声粉碎,然后高速离心.吸取上清的时候不要触到沉淀.污染不一定是RNA和DNA,还有可能是胶里面有杂质.2. 遇热膨胀过度,你可以在电泳槽里面安放冰槽,电泳液预先降温,同时降低电泳时的电流.还有配琼脂也要用缓冲液,而不是水,不然不导电. 接触不好也会引起条带变形
鹤壁市13384209021: 聚丙烯酰胺凝胶电泳 跑不好,跟胶板有关系吗? - ?
纵费健胃: 您好!聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离效率影响因素较多,与胶板的直接关系不大. ① 堆积胶和分离胶的高度,这个基本上都是固定的,堆积胶大概2cm,剩下的都是分离胶. ② 聚丙烯酰胺的交联:保证丙烯酰胺的充分聚合,尤其是AP等不能失效.聚丙烯酰胺是热聚合,稍微注意下天气温度等. ③ 缓冲液:能用新鲜的缓冲液尽量用新鲜的. ④ 胶板一定要洗干净,如果有残留的碎胶,会影响分离效果. 这个最好有图贴上来,能根据实际情况看一下. 百度教育团队【海纳百川团】为您解答.感谢您的采纳,O(∩_∩)O 如有疑问,欢迎追问.