ALK为什么这么“火”？(二) | ALK融合基因检测
ALK融合基因
间变性淋巴瘤激酶（ALK）突变的形式有过量表达、与其他基因形成融合基因，发生点突变等等。
ALK是非小细胞肺癌（NSCLC）常见的一种驱动基因，中国NSCLC突变阳性率5.3%。
ALK融合基因突变主要在肺腺癌里常见，一般肺鳞癌患者ALK融合基因突变概率很低。
有研究说亚裔的EGFR、KRAS野生型的腺癌患者，ALK阳性比例高达30%-42%，因此如果发现EGFR和KRAS是野生型，是更有必要测下ALK基因的。
下图为非小细胞肺癌中ALK的重排形式
01
免疫组化（IHC）
原理：通过抗原和抗体的结合反应，配合信号级联放大来检测。罗氏公司的Ventana IHC 试剂盒可以达到与FISH检测结果94%~100%的一致率。
判读标准是肿瘤细胞胞浆出现簇状黄棕色染色颗粒，胞膜着色则为阴性。欧盟和中国都已经批准Ventana IHC用于检测ALK重排。
缺点：由于肿瘤异质性，靶蛋白的表达强度不均一。由于存在蛋白或RNA降解的可能，FFPE切片存储大于3个月的不建议Ventana IHC检测。
02
荧光原位杂交(FISH)
原理：分离探针的FISH方法，设计红与绿两个探针，分别标记ALK基因的两端，一旦ALK基因发生断裂重排或倒转，红绿信号便出现分离，而没有发生断裂的则呈现为黄色荧光信号。
判读标准为单个视野中计数50个肿瘤细胞，>50%的细胞出现分离信号则判读为阳性，如<10%细胞出现分离信号则判读为阴性。如果10%~50%的细胞出现分离信号，则再次挑选50个肿瘤细胞，看计数100个细胞，是否有>15%的细胞出现分离信号（仅限用于雅培的分离探针试剂盒）。
缺点：无法判断ALK的融合型，必须由经验丰富的病理科医师来完成。15%的临界值存在一定争议，由于肿瘤异质性、取样偏差等问题，存在假阴性的可能。即漏检ALK突变阳性患者。
03
反转录PCR（RT-PCR）
原理：通过预先设计好的引物对样本的RNA进行逆转录来检测融合突变，简便可行，并可以确定ALK的融合型。
缺点：需要高质量的ALK RNA样本，临床大部分是石蜡样本，RNA降解严重，影响检出率，导致假阴性的结果，大于2年的标本不建议使用RT-PCR检测，推荐新鲜肿瘤组织样本。通过PCR引物只能检测已知的融合基因型，无法囊括所有的融合型。
03
二代测序（NGS）
目前已经证实使用二代测序技术检测基因扩增、基因重排是可行的，而且二代测序有助于发现ALK新的融合突变形式。而且仅需要少量样本即可检测多种基因的突变情况。
缺点：价格较高，判读标准及后续验证等亟待解决。
临床常用的三种方法是FISH、Ventana IHC及RT-PCR，三种方法FISH的灵敏度最低。因此，如果是胸腔积液、细针穿刺取到的细胞学样本做成的蜡块，不建议使用FISH，避免假阴性。另外通过抽血检测循环肿瘤DNA（ctDNA），循环肿瘤细胞（CTC）也正在发展起来。总之在面对ALK检测结果模棱两可的时候，一定要换一个检测方法去验证，也没有哪一种方法灵敏度和特异性都是100%。
参考资料：
DOI: 10.20892/j.issn.2095-3941.2017.0017
，侵删。
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