蛋白质组学主要包括哪些分析技术及各自特点.

蛋白质组学主要包括哪些分析技术及各自特点~

为探究生物进程的分子机制，需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用。研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下：一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道 基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、阵列化后则可用于大 规模蛋白质之间相互作用的研究。在实际工作中，人们根据需要发展了单杂交系统、三杂交系统和反向杂交系统等。Angermayr等设计了一个SOS蛋白介 导的双杂交系统。可以研究膜蛋白的功能，丰富了酵母双杂交系统的功能。此外，酵母双杂交系统的作用也已扩展至对蛋白质的鉴定。二、噬茵体展示技术在编码噬菌体外壳蛋白基因上连接一单克隆抗体的DNA序列，当噬菌体生长时，表面就表达出相应的单抗，再将噬菌体过柱，柱上若含目的蛋白，就会与相应抗体 特异性结合，这被称为噬菌体展示技术。此技术也主要用于研究蛋白质之间的相互作用，不仅有高通量及简便的特点，还具有直接得到基因、高选择性的筛选复杂混 合物、在筛选过程中通过适当改变条件可以直接评价相互结合的特异性等优点。目前，用优化的噬菌体展示技术，已经展示了人和鼠的两种特殊细胞系的cDNA文 库，并分离出了人上皮生长因子信号传导途径中的信号分子。三、等离子共振技术表 面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance，SPR)已成为蛋白质相互作用研究中的新手段。它的原理是利用一种纳米级的薄膜吸附上“诱饵蛋白”，当待测蛋白与诱饵蛋白结合后，薄 膜的共振性质会发生改变，通过检测便可知这两种蛋白的结合情况。SPR技术的优点是不需标记物或染料，反应过程可实时监控。测定快速且安全，还可用于检测 蛋白一核酸及其它生物大分子之间的相互作用。………………
详细资料请参考：on
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传统技术是针对单个单个的蛋白啦，基因啦来研究的。好比面试选人，一个一个来。 组学的特点就是量大，批量基因，批量蛋白比较性的研究，好比选人时一个班一个班来比较挑选，效率高，容易发现新分子。对功能解释、新功能、新药物等提供可靠的指标。

双向凝胶电泳
　　双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。由于双向电泳技术在蛋白质组与医学研究中所处的重要位置，它可用于蛋白质转录及转录后修饰研究，蛋白质组的比较和蛋白质间的相互作用，细胞分化凋亡研究，致病机制及耐药机制的研究，疗效监测，新药开发，癌症研究，蛋白纯度检查，小量蛋白纯化，新替代疫苗的研制等许多方面。近年来经过多方面改进已成为研究蛋白质组的最有使用价值的核心方法。
等电聚焦
　　等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。等电聚焦凝胶电泳依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时，其静电荷数为零，在电场中不再移动，据此将蛋白质分离。
生物质谱
　　生物质谱技术是蛋白质组学研究中最重要的鉴定技术，其基本原理是样品分子离子化后，根据不同离子之间的荷质比（M/E）的差异来分离并确定分子量。对于经过双向电泳分离的目标蛋白质用胰蛋白酶酶解（水解Lys或Arg的-C端形成的肽键）成肽段，对这些肽段用质谱进行鉴定与分析。目前常用的质谱包括两种：基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和电喷雾质谱（ESI- MS）。
飞行时间质谱
　　MALDI 的电离方式是 Karas和Hillenkamp于1988年提出。MALDI的基本原理是将分析物分散在基质分子（尼古丁酸及其同系物）中并形成晶体，当用激光（337nm的氮激光）照射晶体时，基质分子吸收激光能量，样品解吸附，基质-样品之间发生电荷转移使样品分子电离。它从固相标本中产生离子，并在飞行管中测定其分子量，MALDI-TOF-MS一般用于肽质量指纹图谱，非常快速（每次分析只需3~5min），灵敏（达到fmol水平），可以精确测量肽段质量，但是如果在分析前不修饰肽段，MALDI-TOF-MS不能给出肽片段的序列。
电喷雾质谱（ESI-MS）
　　ESI- MS是利用高电场使质谱进样端的毛细管柱流出的液滴带电，在N2气流的作用下，液滴溶剂蒸发，表面积缩小，表面电荷密度不断增加，直至产生的库仑力与液滴表面张力达到雷利极限，液滴爆裂为带电的子液滴，这一过程不断重复使最终的液滴非常细小呈喷雾状，这时液滴表面的电场非常强大，使分析物离子化并以带单电荷或多电荷的离子形式进入质量分析器。ESI-MS从液相中产生离子，一般说来，肽段的混合物经过液相色谱分离后，经过偶联的与在线连接的离子阱质谱分析，给出肽片段的精确的氨基酸序列,但是 分析时间一般较长。 　　目前，许多实验室两种质谱方法连用，获得有意义的蛋白质的肽段序列，设计探针或引物来获得有意义的基因。随着蛋白质组研究的深入，又有多种新型质谱仪出现，主要是在上述质谱仪的基础上进行改进与重新组合

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润州区13978851436： 蛋白质组学主要包括哪些分析技术及各自特点 - ？
比傅至宝：[答案] 为探究生物进程的分子机制,需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用.研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下:一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法.其原...

润州区13978851436： 蛋白质组学主要包括哪些分析技术及各自特点 - ？
比傅至宝： 双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离,第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离,把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开.由于双向电泳技术在蛋白质组与医学研究中所处的重要位置,它可用于蛋...

润州区13978851436： 蛋白质组学常用的研究方法？
比傅至宝： 酵母双杂交系统、抗体芯片、LCM技术、mic Solution Inc、SPR技术、色谱分离技术、双相电泳技术、有机质谱等等. LCM技术获得的细胞可以用于蛋白质样品的制备. 蛋白质样品中的不同类型的蛋白质可以通过二维电泳进行分离. 胶染色后...

润州区13978851436： 蛋白质组的分析鉴定方法主要有哪些 - ？
比傅至宝： 为探究生物进程的分子机制,需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用.研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下:一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法.其原理是当靶蛋白和...

润州区13978851436： 蛋白质组学的研究手段有哪些? - ？
比傅至宝： 双向电泳技术、质谱技术及联用派生技术 .一般情况下,很多实验室是无法达到这样的配置要求的.建议找公司帮忙.如果你在杭州,杭州波因是不错的.good luck!

润州区13978851436： 医学常识中什么是蛋白质组学? ？
比傅至宝： 蛋白质组学研究常用技术.蛋白质组指一个机体、组织或细胞内表达的所有蛋白质的总和.蛋白质组学是以细胞或机体全部蛋白质的表达及其活动方式(包括翻译后修饰、转运定位、结构变化、蛋白质间及其他相互作用等)为研究对象,采用高分辨率的蛋白质分离手段,结合高通量的蛋白质鉴定技术,全面研究在各种特定情况下的蛋白质表达谱.目前蛋白质组研究技术包括以下几个方面:蛋白质分离技术如双向凝胶电泳等.蛋白质鉴定技术如质谱技术等.蛋白质相互作用及作用方式研究如双杂交系统等.大数据量分析如生物工程信息学等.

润州区13978851436： 六,蛋白组学的概念和研究方法有哪些 - ？
比傅至宝： 概念 蛋白质组学(Proteomics)一词,源于蛋白质(protein)与 基因组学(genomics)两个词的组合,意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质.蛋白质组本质上指的是在大规模水平上研究蛋...

润州区13978851436： 蛋白质组学研究不同组织蛋白质的差异 常用那些技术或软件? - ？
比傅至宝： 蛋白质组学常用的研究方法有2-D电泳和质谱技术,2-D电泳分辨率较低,小分子和低电荷的蛋白不容易检测,近年来常用的质谱技术MALDI-TOF-MS 和SELDI-TOF-MS技术.这两种质谱技术常用的软件有Biomarker Wizard Version 3.1.0 (Ciphergen Biosystems)和 Protein Biological System IIc mass spectrometer reader (PBS IIc, Ciphergegn Biosystems).

润州区13978851436： 蛋白质组学研究技术?？
比傅至宝：蛋白质组学比较传统的分离技术是双向电泳,当前,比较主流的蛋白质组学研究方案当属LC-MS/MS系统,而最新的蛋白质组学的又一项革命性技术则是SWATH技术,金开 瑞生物工程师国内首家引进SWATH技术的公司,在蛋白质组学研究这块可以去详细咨询了解一下.

润州区13978851436： 蛋白质组组学研究的基本策略是什么? - ？
比傅至宝：[答案] 蛋白质组(Proteome)的概念最先由Marc Wilkins提出,指由一个基因组(genOME),或一个细胞、组织表达的所有蛋白质(PROTein). 蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别,它随着组织、甚至环境状态的不同而改变. 在转录时,一个基因...