干细胞磁珠分选和流式分选的区别

作者&投稿:爰琰 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
美天旎的磁珠分选出来的细胞能直接做流式检测吗~

只要是单细胞悬液就可以做,不需要先用磁珠分选啊。

这个并不是什么区别的问题。分选就是在流式分析的基础上在多加了一步而已,前面的步骤,原理都是一模一样的。分选的机器也可以用来分析。
分析技术,目前绝大多数都是液滴的形式。细胞通过检测窗口以后,搜集了数据,一般的分析仪器就直接排到废液箱了。而分选仪则继续通过尺寸微小的口径,并通过振动将液体流变成不连续的小液滴。然后根据上一步检测的结果,把包含要分选细胞的那个液体加上电荷。液滴通过小孔以后,马上就进入一个电压达到数千伏的电场,根据所加电荷的不同,会进入下面不同位置的收集管里面,从而完成分选。

  • 应管理员要求,我来比较一下流式分选和磁珠分选的优缺点,本来想列一个表,但表格可能表述不清楚,还是用通俗的语言写啊,个人体会欢迎拍砖。


  • 简单说一下原理:


  • 现在流式分选一般都是电荷式分选,即对感兴趣的目标细胞所在的液滴充上电荷,液滴经过电极板,通过电场作用发生偏转,从而实现分选。


  • 磁珠分选首先使用磁珠偶联的抗体去标记细胞,然后把标记好的细胞过柱子(柱子周围连磁铁),带磁珠的细胞就留在柱子上,不带磁珠的细胞就流走了,从而实现分选。


  • 现在可以比较不同了:


  • 1、对细胞的刺激。 我觉得磁珠分选最大的优势就是对细胞的刺激要小一点。因为流式分选细胞首先要经过几十微米的喷嘴,然后要被充电,还要经过几千伏的电场,最后以几十米每秒的速度落到收集管里面,有些原代细胞就受不了,分选免疫细胞也要考虑细胞活化的影响;而磁珠分选相对来说就对细胞没什么刺激。


  • 2、设备要求。 磁珠分选小的实验室就能做,买一些专用的磁铁和柱子就可以了,而流式分选就需要分选型的流式细胞仪,都是几百万以上的。对操作员的要求来说,流式分选也要高一点,需要专门培训,需要注意的细节也要多很多。


  • 当然如果你周围有什么流式平台的话,磁珠分选和流式分选的成本应该是差不多的,流式分选一次大约1-2千(各地方不同),磁珠分选的柱子磁珠差不多也要烧这么多钱。


  • 3、试剂不同。 这个最好理解,流式分选用的是荧光素偶联的抗体,磁珠分选用的是磁珠结合的抗体。


  • 下面就要说下流式分选的优势了:


  • 4、分选纯度。这个肯定是流式分选的纯度高,磁珠分选如果操作好的话也能达到80-90%的纯度,但流式分选一般都能达到90%以上(样本制备和仪器条件正常的条件下)。


  • 5、多参数分选。流式细胞术很大的优势就是多参数,比如我可以分选CD4+CD25+CD127low的Treg,三色的一次就能分选。磁珠分选就必须先分CD4,再分CD25,更多参数的就没法进行。


  • 6、低表达群细胞分选。比如有些干细胞它的表达比例只有百分之零点几,比例太少磁珠分选无法操作,流式就可以把这些细胞富集起来。


  • 7、胞内荧光分选。流式分选在分子生物学中很大一部分应用就是分选GFP、YFP等阳性细胞,还有可以用Hoechst染精子的单倍体进行分选,这些针对胞内成分的分选也是磁珠分选无法实现的。


  • 另外要说明的是,现在都很流行磁珠分选和流式分选相结合的方法,像上面举的例子分选CD4+CD25+CD127low的Treg,如果仅用流式分选可能时间太长,纯度也有影响。那么可以选择先用磁珠纯化出CD4阳性的细胞,再过流式分选CD4+CD25+CD127low的群体,这样既节省了时间保证了活性,也可以提高分选的纯度。





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