测病毒TCID50时，若以十倍的倍比稀释，公式中病毒液稀释因数是什么？

TCID50的具体步骤是什么啊？~

TCID50,Tissue culture infective dose,半数组织培养感染剂量，又称50%组织细胞感染量，腺病毒感染性滴度。
实验方法和步骤
1、单层细胞制备
Hela细胞于青瓶中37℃培养24h，待生成单层后备用。
2、病毒液稀释
病毒液作10倍稀释，先将稀释液分装于10个试管中，每管0.9ml，取0.1ml病毒悬液加入第一管中，摇匀后为10-1，换一支吸管，在10-1病毒液中吸放3～4次，取0.1ml放入第二管中摇匀后为10-2........，如此稀释至10-10。
3、病毒接种
将40个已长好细胞单层的青瓶中的培养液倒掉，取上面已稀释好的病毒液接种于细胞单层，每瓶0.1ml，10-3～10-10每个稀释度分别接种4瓶，另取病毒原液接种4瓶细胞，每瓶0.1ml，作为病毒对照。再取4瓶细胞分别接种0.1ml培养基作为正常细胞对照。接种完毕后一起放入37℃温箱内，吸附1～1.5h。
4、结果观察
吸附完毕后倒掉病毒液或稀释液，每瓶细胞中各加入1 mI细胞维持液。置37℃培养，24h后观察结果，并按下表记录结果。观察时先看正常细胞对照，然后看试验瓶细胞。
5、实验结果的分析与计算
计算
根据Reed—Muench公式
半数效应剂量(LD50，ID50或TCID50等)=50%感染的高临界稀释度倒数的对数+距离比×稀释系数的对数
式中：距离比=（50%的临界感染率-50%）/（50%的临界感染率-50%的低临界感染率）
在上例中：
TCID50=lg(1/10-5)+（80-50）/（80-20）xlg10=5.5
该病毒样品的TCID50效价为10-5.5。

扩展资料
实验原理
TCID50及半数培养感染剂量(50% tissue culture infectivedose)，以使50%的试验培养细胞出现感染反应的病毒稀释液的稀释度倒数的对数值来表示。
多数病毒感染体外培养的细胞后，常引起细胞形态学改变，如细胞团缩、裂解和细胞肿大等，这种改变称为病毒致病变效应(cytopathic effect，CPE)，可以直接通过显微镜观察，亦可通过染色识别和判断。CPE的程度可间接反映病毒的毒力，因此利用这种特征可以测定病毒的毒力。
它所测定的不是病毒颗粒的数目，而是病毒感染反应的有或无，严格说来是一种定性测定法。但是因为感染反应的有或无与病毒颗粒数目之间有一定定量关系，且该法灵敏度高，重复性好，所以仍广泛用于病毒的定量测定，特别是应用于某些病毒的试验诊断及病毒毒力和宿主抗性的定量分析。
在从事药物的抗病毒试验中，常用100TCID50的病毒感染量进行。测定时，首先在微量细胞板上培养敏感细胞，待细胞贴壁形成单层时，弃上清液。将待测病毒用维持液做连续10倍系列稀释后加入细胞单层，逐日观察，直至病毒产生的CPE不再进展为止。
具体时间根据病毒的增殖特点而定，如肠道病毒增殖迅速，一般48h即可；RSV、VSV增殖也较快，因此48～72h也可以观察、染色、计算 。
参考资料来源：百度百科-TCID50
参考资料来源：百度百科-半数组织培养感染剂量

常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等.50%组织细胞感染量(TCID50)测定法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计算出50%组织细胞感染量（50%tissuecultureinfectiousdose,TCID50)。蚀斑测定是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料(如中性红)染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏的细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑(plaque)。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成单位(plaqueformingunit,PFU)。病毒悬液中的感染性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。Answer:Assumingthatthesamecellsystemisused,thatthevirusformsplaquesonthosecells,andthatnoproceduresareaddedwhichwouldinhibitplaqueformation,1mlofvirusstockwouldbeexpectedtohaveabouthalfofthenumberofplaqueformingunits(PFUs)asTCID50.Thisisonlyanestimatebutisbasedontherationalethatthelimitingdilutionwhichwouldinfect50%ofthecelllayerschallengedwouldoftenbeexpectedtoinitiallyproduceasingleplaqueinthecelllayerswhichbecomeinfected.Insomeinstances,twoormoreplaquesmightbychanceform,andthustheactualnumberofPFUsshouldbedeterminedexperimentally.Mathematically,theexpectedPFUswouldbesomewhatgreaterthanone-halftheTCID50,sincethenegativetubesintheTCID50representzeroplaqueformingunitsandthepositivetubeseachrepresentoneormoreplaqueformingunits.AmorepreciseestimateisobtainedbyapplyingthePoissondistribution.WhereP(o)istheproportionofnegativetubesandmisthemeannumberofinfectiousunitspervolume(PFU/ml),P(o)=e(-m).ForanytiterexpressedasaTCID50,P(o)=0.5.Thuse(-m)=0.5andm=-ln0.5whichis~0.7.Therefore,onecouldmultiplytheTCID50titer(perml)by0.7topredictthemeannumberofPFU/ml.Whenactuallyapplyingsuchcalculations,rememberthecalculatedmeanwillonlybevalidifthechangesinprotocolrequiredtovisualizeplaquesdonotaltertheexpressionofinfectiousvirusascomparedwithexpressionunderconditionsemployedforTCID50.Thusasaworkingestimate,onecanassumematerialwithaTCID50of1x105TCID50/mlwillproduce0.7x105PFUs/ml.

操作步骤
(1) 准备细胞
取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细
胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16个孔即可。滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
(2) 稀释待测病毒液。
A法为参考书上标准的操作方法
B法参照书将液体量减少后的结果
病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500µl，即10-1为50µl加入450µl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100µl加入900µl孵育液中。若接种8个孔，则相应增加液体量。上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：
1）建议每个稀释度接种8个孔，若要统计分析则还要增加至16个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射20min，确保无菌。使用新高压的tip头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。】
(3) 接种
取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。将稀释好的病毒液加到96孔板上，每孔100µl，根据观察的习惯，一般从右到左，从上到下，从高稀释度到低稀释度（10-1，10-2 ）到原液加样。【切记：设置正常的细胞对照。每次实验要重复4次，计算标准差。】
37℃CO2培养箱中孵育1h，取出培养板吸去病毒液（从低浓度向高浓度吸取可避免窜孔），加入维持液200µl继续在 CO2培养箱中培养。
(4) 培养
将培养板放置于CO2培养箱。培养温度37℃，培养5-7天。
(5) 测定结果
取出培养板，显微镜下观察细胞病变。
兽药典2005版
举例：
将病毒等悬液作10倍系列稀释，取适宜稀释度，定量接种实验动物、胚或细胞。由高稀释度开始接种，每个稀释度接种4～6只（枚、管、瓶、孔），观察记录实验、胚或细胞的死亡数或病变情况，计算各稀释度死亡或出现病变的实验动物（胚、细胞）的百分率。按Reed-Muench法计算半数致死（感染）量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50、PD50）。
计算公式为：
logTCID50=高于50%的病毒稀释度的对数＋距离比例×稀释系数的对数
试验示例（以TCID50为例，接种量为0.1ml）
病毒稀释度  观察结果  累计结果
  CPE数  无CPE数  CPE（%）  CPE数  无CPE数  CPE（%）
10-4  6  0  100  13  0  100
10-5  5  1  83  7  1  88
10-6  2  4  33  2  5  29
10-7  0  6  0  0  11  0
距离比例=
logTCID50=-5＋0.64×(-1)=-5.64
则：TCID50=10-5.64/0.1ml。
即：将病毒悬液作10-5.64稀释后，接种细胞0.1ml，可以使50%的细胞产生CPE。

就是一个数量关系的

操作步骤
(1) 准备细胞
取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细
胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16个孔即可。滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
(2) 稀释待测病毒液。
A法为参考书上标准的操作方法
B法参照书将液体量减少后的结果
病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500µl，即10-1为50µl加入450µl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100µl加入900µl孵育液中。若接种8个孔，则相应增加液体量。上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：
1）建议每个稀释度接种8个孔，若要统计分析则还要增加至16个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射20min，确保无菌。使用新高压的tip头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。】
(3) 接种
取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。将稀释好的病毒液加到96孔板上，每孔100µl，根据观察的习惯，一般从右到左，从上到下，从高稀释度到低稀释度（10-1，10-2 ）到原液加样。【切记：设置正常的细胞对照。每次实验要重复4次，计算标准差。】
37℃CO2培养箱中孵育1h，取出培养板吸去病毒液（从低浓度向高浓度吸取可避免窜孔），加入维持液200µl继续在 CO2培养箱中培养。
(4) 培养
将培养板放置于CO2培养箱。培养温度37℃，培养5-7天。
(5) 测定结果
取出培养板，显微镜下观察细胞病变。
兽药典2005版
举例：
将病毒等悬液作10倍系列稀释，取适宜稀释度，定量接种实验动物、胚或细胞。由高稀释度开始接种，每个稀释度接种4～6只（枚、管、瓶、孔），观察记录实验、胚或细胞的死亡数或病变情况，计算各稀释度死亡或出现病变的实验动物（胚、细胞）的百分率。按Reed-Muench法计算半数致死（感染）量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50、PD50）。
计算公式为：
logTCID50=高于50%的病毒稀释度的对数＋距离比例×稀释系数的对数
试验示例（以TCID50为例，接种量为0.1ml）
病毒稀释度 观察结果 累计结果
CPE数 无CPE数 CPE（%） CPE数 无CPE数 CPE（%）
10-4 6 0 100 13 0 100
10-5 5 1 83 7 1 88
10-6 2 4 33 2 5 29
10-7 0 6 0 0 11 0
距离比例=
logTCID50=-5＋0.64×(-1)=-5.64
则：TCID50=10-5.64/0.1ml。
即：将病毒悬液作10-5.64稀释后，接种细胞0.1ml，可以使50%的细胞产生CPE。

---

洞口县18665857588： 测病毒TCID50时,若以十倍的倍比稀释,公式中病毒液稀释因数是什么? - ？
纵温复方：[答案] 就是一个数量关系的

洞口县18665857588： 中和试验的检查过程 - ？
纵温复方： (一)简单定性中和试验本法主要用于检出病料中的病毒,亦可进行初步鉴定或定型.先根据病毒易感性选定试验动物(或鸡胚、细胞培养)及接种途径.将病料研磨,并稀释成一定浓度(约100 LD50-1 000LD50或TCID50).污染的病料需加...

洞口县18665857588： 病毒滴度测定中的pfu 与TCID50之间有什么联系和区别 - ？
纵温复方： 病毒滴度测定中的pfu 与TCID50之间的联系是:1个TCID50 约等于0.7个PFU,即:1 TCID50 ≈ 0.7 PFU.例如:某病毒的滴度为105TCID50/ml,那么它换算成PFU为:105TCID50/ml 7*104PFU/ml. 区别是二者单位不统一,使用时需要换算,...

洞口县18665857588： TCID50的具体步骤是什么啊? - ？
纵温复方： 病毒半数组织细胞2.1.1 病毒培养和收获 将病毒接种于长成单层的待感染的宿主细胞,接种量为液体培养基量的10%,37℃培养,待出现病变后,冻融,收获病毒.2.1.2 病毒的滴定 用DMEM培养基将病毒作连续10倍稀释,即10—1、10—2……每个稀释度取100μL加入96孔细胞培养板中,随后加入经0.25%胰酶消化的感染的宿主细胞100μL(细胞含量以105/mL左右 为宜),每个稀释度作8个重复,并设空白细胞培养对照.置37℃ 5%CO2培养箱中.2.1.3 TCID50计算 逐日观察细胞病变,并记录细胞病变孔数,直到对照细胞老化脱落为止.计算病毒的TCID50

洞口县18665857588： 如何鉴定消毒柜的消毒效果? - ？
纵温复方： 2.1.5.2 红外线消毒碗柜消毒试验 2.1.5.2.1 目的 检测红外线消毒碗柜 (下简称消毒碗柜) 对餐(饮)具的消毒效果,作为评价其杀灭微生物性能是否符合设计规定的参考. 2.1.5.2.2 试验器材 (1) 大肠杆菌( 8099 )悬液. (1) 脊髓灰质炎病毒...

洞口县18665857588： 如何评估一种或几种病毒的毒力 - ？
纵温复方： 确定病毒的毒力最常用经典方法:TCID50,半数细胞培养物感染量;EID50,半数鸡胚感染量,还有就是用动物测定LD50. 一般如果做毒力检测,最常用,也是最直接的就是做生物测定. 间接测定的话,可以用ELISA、电泳、HPLC等各种方法进行毒素的测定,当然如果你确定病毒的毒力因子的话,也可以用PCR、Western进行检测.

洞口县18665857588： 我的乙型肝炎病毒DNA测定检验结是<5.00*10^2结果参考是<5.00*10^2请问正常吗?肝 - ？
纵温复方： 病情分析:你的病毒量也不高,是在正常范围内.指导意见:没有看到你的乙肝五项,如果有乙肝,你现在是携带者,传染性也不强,注意养护就可以,保持的很好.

洞口县18665857588： 为什么不直接移取试样1ml进行测定,而要将试样稀释10倍后再移取25ml进行测定,这样 - ？
纵温复方： 可减小测量误差,可查找分析化学书

洞口县18665857588： 再测病毒TCID50的时候需要加血清的培养基吗?？
纵温复方： 接种病毒后的细胞都要加维持液,如果用生长液细胞会长得太快,没等出现并变,细胞自身就维持不住了,你是对的.老板有时也迷糊,相信科学吧.

洞口县18665857588： 提高病毒滴度与病毒的纯化有什么区别 - ？
纵温复方： PFU:plaque forming unit,空斑形成单位.感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml.由于测定pfu往往重复性较差,因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位.因此建议也可使用TCID50法.简单地说他们的关系是:1个TCID50 约等于0.7个PFU,即:1 TCID50 ≈ 0.7 PFU 例如某病毒的滴度为105TCID50/ml,那么它换算成PFU为:105TCID50/ml = 105TCID50/ml * 1 =105TCID50/ml * (0.7PFU/TCID50) = 7*104PFU/ml