如何构建CDNA文库？
作者&投稿：仰府 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
听起来很简单，就是将提取的总RNA，或者是经过纯化获得的mRNA反转录得到cDNA，加入接头后于载体相连，转入受体菌中。但是真正操作起来不是很容易。首先是文库的数目，其次是文库的质量都有要求。如果你真的想构建文库，方法选择很关键，好的方法会让你事半功倍。
cDNA文库的构建分为六个阶段：阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链
阶段2：cDNA第二链的合成
阶段3：cDNA的甲基化
阶段4：接头或衔接子的连接
阶段5：Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA
阶段6：cDNA与λ噬菌体臂的连接
提取细胞总RNA，用随机引物逆转录成cDNA,形成的cDNA的总体就是CDNA文库
翁习生的发表论文
脊柱侧凸Harrington矫形术后断棍的力学因素分析与治疗 翁习生 仉建国、邱贵兴、金今、林进 中华骨科杂志1998，18（3），131－133The study on autoimmune pathology in osteoarthritis翁习生 李秉璐、任玉珠、邱贵兴 Chinese medical sciences journal 1998，13（2）：116－118腰椎椎板切除手术后硬膜外粘连的...
仅分子生物学阳性病人分类怎么写?
coli,每一克隆中含有外源DNA的一种片段,全部克隆构成一个基因文库。 13、简述cDNA文库的构建方法 ①mRNA的提取和纯化。②合成cDNA第一链。③将mRNA-cDNA杂交分子转变为双链cDNA分子。④将双链cDNA重组到噬菌体载体或质粒载体上。⑤将重组子体外包装成具有感染力的噬菌体颗粒导入到大肠杆菌寄主细胞中增殖 14、怎样...
简要分析基因的表达系统的组成及优化策略。
RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。。RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量。另外，这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern...
齐彬氟哌：[答案] cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合.经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头,连接...
毕节地区13217057828： 如何构建CDNA文库? - ？
齐彬氟哌： cDNA文库的构建分为六个阶段: 阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链 阶段2:cDNA第二链的合成 阶段3:cDNA的甲基化 阶段4:接头或衔接子的连接 阶段5:Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA 阶段6:cDNA与λ噬菌体臂的连接
毕节地区13217057828： cDNA文库必须满足什么条件?其构建包括哪些步骤? - ？
齐彬氟哌：[答案] 条件:1 、要使用mRNA经过反转录PCR产生cDNA.2 、要进一步获得cDNA全长3 、加适当接头,连接到适当的载体内.4 、转化受体细胞,构建为cDNA文库.基本步骤包括:RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚法...
毕节地区13217057828： 如何构建一个物种的cdna文库 - ？
齐彬氟哌： 当反转录,或随机引物与聚T合成第一链互补的mRNA,mRNA和第二条链是相同的. 中国因此,如果对基因的RNA 5' - 3',所述第一链反向,第二链是阳性.
毕节地区13217057828： 如何建立人mrna的cdna文库 - ？
齐彬氟哌： PCR技术是DNA扩增技术,它能在比较短的时间内产生大量的DNA.在获取目的基因后才使用PCR技术. 获得目的基因的方法: 一、构建基因文库 提取总DNA. 用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌
毕节地区13217057828： 生活中的dna科学 一,什么是cdna文库?如何构建 - ？
齐彬氟哌： 基因组DNA文库含有一种生物的全部基因,从基因组文库中获得的基因是完整的 cDNA文库含有一种生物的部分基因,cDNA本质就是外显子 基因组文库大,其中基因含有启动子和内含子 cDNA文库小,没有内含子和启动子
毕节地区13217057828： 原核生物没有POLYA尾,如何才能构建出它的cDNA文库?? - ？
齐彬氟哌： 方法有二: 1、使用试剂盒加polyA尾巴,然后oligo dT逆转录 2、使用随机引物 要得到全长用第一种方法
毕节地区13217057828： DNA测序可以采用哪些手段,并阐述各自的原理 - ？
齐彬氟哌： 1 cDNA 文库的构建 1.1 cDNA 文库构建的基本原理与方法 cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合.经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物,...
毕节地区13217057828： 从RNA抽提到制成cDNA的全过程 - ？
齐彬氟哌： 一).构建cDNA文库: 以生物细胞的总 mRNA 为模板,用反转录酶合成互补的双链 cDNA ,然后接到载体上,转入到宿主后建立的基因文库就是 cDNA 文库.1、mRNA的提取及其完整性的确定 1) 总 RNA 的提取 RNA 提取方法:APGC法或...
