high-performance size exclusion chromatograghy
反相液相色谱柱效高、分离能力强、保留机理清楚，是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种，对于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析，反相液相色谱正受到越来越多的关．反相色语法是以表面非极性载体为固定相，面以比固定相极性强的溶剂为流动相的—种液相色谱分离模式．反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离．在生物大分子分离中，多采用离子强度较低的酸件水溶液，添加一定量乙腈、异内醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相．普通的反相色谱固定相和孔径大于300�0�3的硅胶键合烷基固定相应用较为普遍，聚合物基质的反相色谱固定相也有较多应用．
反相色谱中样品的保留值主要由固定相比表面积、键合相种类和浓度决定，保留值通常随链长增长或键合相的疏水性增强而增大，对于非极性化合物通常遵循以下规则：(弱)非键合硅胶 << 氰基 < C1(TMS) < C3 < C4 < 苯基 < C8 ≈ C18(强)．溶质保留值与固定相表面积成正比，普通载体(80�0�3)的表面积约为250m2/g，而300�0�3孔径载体的比表面积约为60m2/g。当其他条件相同时，溶质在300�0�3孔径(低表面积)色谱柱上的保留值大约为80�0�3孔径色谱柱上保留值的1/4(60：250)，小孔隙柱如高保留的C18柱或石墨碳柱有利于强亲水性样品洗脱．样品的保留值也可以通过改变流动相组成或溶剂强度来调整，溶剂强度取决于有机溶剂的性质和其在流动相中的浓度．在反相色谱中，采用高溶剂强度、低极性的流动相时可获得较低保留值．固定相的不同也可以导致选择性发生变化，氰基、苯基、C8、C18等柱的选择性有很大差异，一般应优先考虑C8、C18柱，然后是氰基柱，再次是苯基柱．
反相条件下，大多数蛋白质由于低PH、有机溶剂存在、温度高于室温和疏水键合相等综合原因发生变性，这些化合物可能以两种或两种以上独立或动态平衡的形式存在，它们通过色谱柱的保留速度不同，导致谱峰展宽、变形、甚至出现单一蛋白有多个峰的现象，部分变性也易使蛋白在柱上聚集，造成被洗脱蛋白的回收率低和鬼峰．反相色谱固定相表面烷基链长度对蛋白质的反相保留和蛋白质的活性回收有很大差异，烷基链越长(C8、C22、C30)，固定相疏水性越强，为使蛋白质等生物分子洗脱，流动相合机溶剂的含量较高，疏水性过强，会导致生物分子的不可逆吸附和生物活性损失，因此短链烷基固定相(C4、C8、苯基等)在生物大分子分离中表现出优势。对多数小蛋白，在低pH乙腈/水梯度下，用C3~C8色谱柱分离，使蛋白完全展开并避免聚集或沉淀，能够得到理想的分离结果．
在低pH流动相条件下进行分离，如(0.1% TFA适合于大多数样品，10~25mmol/L磷酸对疏水性强的蛋白质更有利；以乙腈作有机溶剂，丙醇可能对疏水性强的蛋白质有利；柱温50~80℃；将样品溶于6mol/L尿素或盐酸胍中(只可在室温)进行预处理；用疏水性更强的键合相(长链与短链烷基键合相)；加两性表面活件剂分离大分子和疏水性强的蛋白质等实验条件有利于蛋白质样品完全变性或尽可能降低变性。
色谱法的基本原理
利用样品混合物中各组分理、化性质的差异，各组分程度不同的分配到互不相溶的两相中。当两相相对运动时，各组分在两相中反复多次重新分配，结果使混合物得到分离。
两相中，固定不动的一相称固定相；移动的一相称流动相。
分类：
根据流动相分—以气体作流动相—气相色谱——固定相为液体 气-液色谱
固定相为固体 气-固色谱
—以液体作流动相—液相色谱——固定相为液体 液-液色谱
固定相为固体 液-固色谱
—当流动相是在接近它的临界温度和压力下工作的液体时——超临界色谱
根据固定相的附着方式
—固定相装在圆柱管中—柱色谱
—固定相涂敷在玻璃或金属板上—薄膜色谱（平板色谱）
—液体固定相涂在纸上—纸色谱（平板色谱）
根据分离机理
—分配色谱—样品组分的分配系数不同
—吸附色谱— 样品组分对固定相表面吸附力不同
—体积排阻色谱—利用固定相孔径不同，把样品组分按分子大小分开
—离子交换色谱—不同离子与固定相商相反电荷间的作用力大小不同
根据极性
—流动相极性＞固定相极性-反相色谱
—流动相极性＜固定相极性-正相色谱
气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。所以，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱。
一、吸附色谱（adsorption chromatography）
又叫液固色谱法：流动相是液体，固定相是固体。
分离原理：固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微粒物质表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附中 心。各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产生保留时间不同和实现分离。
固定相： 固定相通常是强极性的硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂。活性硅胶最常用。
流动相： 弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物，如正构烷烃（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲 烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。
应用： 对于极性，结构异构体分离和族分离仍是最有效的方法，如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的 分离。 缺点是容易产生不对称峰和拖尾现象。
二、分配色谱
原理： 固定液机械的吸附在惰性载体上，样品分子依据他们在流动相和固定相间的溶解度不同，分别进入两相分配而实现分离。
固定相：将一种极性或非极性固定液吸附在惰性固相载体上。如全多孔微粒硅胶吸附剂。
根据极性不同分类：正相分配色谱—固定相载体上涂布的是极性固定液；
流动相是非极性溶剂；
可分立极性较强的水溶性样品；
弱极性组分先洗脱出来。
反相分配色谱—固定相载体上涂布的是非极性或弱极性固定液；
流动相是极性溶剂；
强极性组分先洗脱出来。
液-液分配色谱固定相中的固定液体往往容易溶解到流动相中去，所以重现性很差，且不能进行梯度洗脱，已经不大为人们所采用。
三、键合相色谱
考虑分配色谱法中固定液的缺点，因此将各种不同的有机关能团通过化学反应共价结合到固定相惰性载体上，固定相就不会溶解到流动相中去了。
键合固定相优点：○ 对极性有机溶剂有良好的化学稳定性
○使色谱柱的柱效高、寿命长
○实验重现性好
○几乎适于各种类相的有机化合物的分离，尤其是k’宽范围的样品
○可以梯度洗脱
根据极性不同分类：正相键合相色谱—固定相极性＞流动相极性
固定相：二醇基、醚基、氰基、氨基等极性基团的有机分子。
适于分离脂荣、水溶性的极性、强极性化合物
反相键合相色谱—固定相极性＜流动相极性
固定相：烷基、苯基等非极性有机分子。如最常用的ODS柱或C18柱就 是最典型的代表，其极性很小。
适于分离非机性、弱极性离子型样品，
是当今液相色谱的最主要分离模式。
正相HPLC（normal phase HPLC）：
是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相HPLC。
反相HPLC（reversed phase HPLC）：
由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，与正相HPLC体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱，Octa Decyltrichloro Silane)，代表性的流动相是甲醇和乙腈。
四、体积排阻色谱（SEC，size exclusion chromatograghy）
（又称凝胶色谱和分子筛色谱）
原理： 以多孔凝胶（如葡萄糖，琼脂糖，硅胶，聚丙烯酰胺等）作固定相，依据样品分子量大小达到分离目 的。大分子不进入凝胶孔洞，沿多孔凝胶胶粒间隙流出，先被洗脱；小分子进入大部分凝胶孔洞， 在柱中被强滞留，后被洗脱。
根据样品性质分类：凝胶过滤（GFC）—用于分析水溶性样品，如多肽、蛋白、生物酶、寡聚核苷酸、多聚核 苷酸、多糖。
凝胶渗透（GPC）—用于分析脂溶性样品，如测定高聚物的分子量。
SEC主要依据分子量大小进行分离，因此与样品、流动相间的相互作用无关。因此不采用改变流动相的组成来改善分离度。
五、离子交换色谱
（ion exchange chromatography, IEC）
分离原理：使用表面有离子交换基团的离子交换剂作为固定相。带负电荷的交换基团（如磺酸基和羧酸基）可以用于阳离子的分离；带正电荷的交换基团（如季胺盐）可以用于阴离子的分离。不同离子与交换基的作用力大小不同，在树脂中的保留时间长短不同，从而被相互分离。
按操作形式可分为：纸色谱法(按操作形式可分为：纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法.
————————
【色谱法分类】
按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC).气相色谱法适用于分离挥发性化合物.GC根据固定相 不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC),其中以GLC应用最广.液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质.LC同样 可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC).此外还有超临界流体色谱法(SFC),它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常 用CO2）,因其扩散系数大,能很快达到平衡,故分析时间短,特别适用于手性化合物的拆分.
按原理分为：吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC,又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法.（此外还有电泳.）
按操作形式可分为：纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法.
【色谱分离原理】
高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法.
依据层析目的和所需的分辨率来选择操作条件和介质。分子量排阻层析中一种常规的方法为基团分离，包括：
脱盐— 目标分子洗脱出来，而小分子保留在凝胶孔内。为了获得理想的分离，基质的分子量排阻限度应比目 标分子小。
分级分离— 一定分子量范围的分子在凝胶基质内分离。使用这种方法时，目标分子应当在凝胶的分级分离范 围以内。
高效分子量排阻层析常规应用包括蛋白分级分离及分子量确定、核酸分离、质粒纯化和多糖分级分离。
层析分辨率取决于颗粒大小、孔径大小、流速、层析柱尺寸和样品体积。通常，低流速（2–10 cm/hr）、细长 柱、小颗粒凝胶、小样品体积（总床体积的1–5%）、2 倍的分子量差异以及相同的溶液粘度，可以获得最高分辨率。 如果用于脱盐，样品体积则可达到总床体积的30–40%，并可使用短粗柱。
与分子筛层析(gel filtration chromatography)相比，HPSEC在分辨率以及分离时间上都具有明显的优势。
高效排阻色谱 HPSEC （注意最后一个单词是chromatography，不是 chromatograghy.也称为高效筛分色谱）。
利用高压和特殊抗压填料，来达到高速、高效进行排阻色谱分离物质的效果。原理和HPLC相似，但层析柱内填料则有很大不同。HPLC主要靠极性吸附来分离物质，而HPSEC则是靠颗粒大小达到通过物质大小分离不同物质的目的。
可以看这里：
http://guiltinanlab.cas.psu.edu/Publications/SBE/Yao-FACE2005.pdf
HPSEC的优势在于能够快速和高分辨率的分离组分。由于其高压装置可以快速通过色谱柱，而特殊填料则可以高效分离。此外，较细的内径也可提高分离效率。
高性能尺寸排阻色谱或高性能筛分色谱仪
翻得不太好，请原谅啊
高效液相层析仪
High performance liquid chromatography
High-performance liquid chromatography (or High pressure liquid chromatography, HPLC) is a form of column chromatography used frequently in biochemistry and analytical chemistry to separate, identify, and quantify compounds. HPLC utilizes a column that holds chromatographic packing material (stationary phase), a pump that moves the mobile phase(s) through the column, and a detector that shows the retention times of the molecules. Retention time varies depending on the interactions between the stationary phase, the molecules being analyzed, and the solvent(s) used.
战略人力资源管理的核心理念和技术是什么 其中
所谓“高绩效工作系统”(h igh- perfo rmance wo rk system s) , 是指将组织的技术系统与社会系统有机结合起来, 能够获得高效率和高效益的生产运作管理体系。 建立和拥有高绩效工作系统, 是一个组织获得市场竞争战略优势的组织基础。首先, 高绩效工作系统要有高新技术信息系统的支撑; 其次, 高绩效工作系统更本...
晏诗感冒： high-performance [英][hai pəˈfɔ:məns][美][haɪ pɚˈfɔrməns] 高效能,高性能的,高指标;例句: 1. Some firms are already looking at all-electric high-performance models. 一些公司已经着眼于全电动高性能车型.2. When team ...
耀州区15223469876： 我的华硕笔记本屏幕上出现high performance是什么意思?？
晏诗感冒： 高性能状态.所有笔记本的硬件全部最佳工作状态.一般用外接电源的时候选这个.用电池用Entertainment 那个.
耀州区15223469876： 我的电脑右下脚运行着一个程序,鼠标停留在上面显示High Performance.请问是干什么的,我exit后也没什么反应.？
晏诗感冒： 那是品牌笔记本的一种性能调整功能,有的台机也有这种功能,就是通过点击它可以先高性能、或低功耗低性能等.可以退出的
耀州区15223469876： High performance什么意思？
晏诗感冒： 高昂的表演
耀州区15223469876： 华硕笔记本电源选项什么意思 第一个是 power4Gear Entertainment 第二个 power4Gear High performance - ？
晏诗感冒： 您好!这个是电源选项,单独使用电池也是可以选择.第一个是娱乐模式,第二个是高性能模式.如果是一般应用,不运行大游戏后软件可以选择第一个.如果是玩游戏,特别是一些较大的游戏,选择第二个高性能模式.希望以上信息能够对您有所帮助!若以上回复还是没有帮助到您,则非常抱歉,您可以继续追问咨询!谢谢!
耀州区15223469876： 华硕启动性能模式四个选项是什么意思 - ？
晏诗感冒： 尊敬的华硕用户,您好!您提供的截图中四个选项的含义分别是:High Performance高性能模式Entertainment娱乐模式Quiet Office办公模式BatterySaving省电模式这是WIN7系统中华硕笔记本可选择的四种电源模式,需要安装华硕的power4gear...
耀州区15223469876： entertainment mode 和 high performance选哪个模式? - ？
晏诗感冒： Entertainment mode的cpu负载在0%~100%,在high performance下负载维持在100%,一般使用entertainment很合适
耀州区15223469876： 我把笔记本电脑处理器性能开到最高(100%)没事的吗 什么High performance - ？
晏诗感冒： 那些温度指数是测试电脑散热性能用的,你用鲁大师也会看到硬件温度测试和散热性能测试.High performance是指你的电脑表现出的性能是很高的,电脑没事不要把性能开到百分之百,那是一般新本本买回来测试机器的一种方式,其实很烧机器的.
耀州区15223469876： HPM是什么意思 - ？
晏诗感冒：[答案] lpt=lower power tech,hlp=high-performance low power,hpm=high performance mobile移动高能低功耗工艺,lp=low powerhp=high performancehp,hpl,hpm采用hkmg,lp依然使用poly/sion
