定量PCR实验中的Ct值与Cq 值是什么?
阈值线是检测水平或反应达到高于背景水平的荧光强度的点。在实验前，您（或您的PCR仪中的软件）设定阈值水平。这是一条图表中的线，代表高于背景荧光的水平，通常在指数阶段开始时与反应曲线相交。Cq值是您的样品反应曲线与阈值线相交处的PCR循环数，表明从您的样本中检测到真实信号所需的时间。实时PCR运行中，每个样品的反应曲线都有其对应的Cq值，PCR仪软件会计算并绘制图表。
Cq值与样本中目标核酸的数量成反比，与样本中的目标拷贝数相关。较低的Cq值（通常低于29个循环）表示大量的目标序列。较高的Cq值（超过38个循环）意味着较低的目标核酸量。高Cq值可能表示目标或PCR设置存在问题，如PCR效率低、模板不足或样品处理不当等。
影响Cq值的因素包括生物事件、PCR反应准备和PCR组分等。生物事件如目标基因响应治疗而上调/下调会导致样本之间的Cq值差异。同时，溶液中的pH值和盐浓度、荧光比率、反应效率、模板量等也会影响Cq值。确保使用高质量的PCR组件，检查溶液pH值和监测盐沉淀。反应值是FAM染料与ROX染料的荧光比率，FAM荧光不变时，较低量的ROX会产生较高的反应值。PCR效率取决于预混液性能、引物特异性、退火温度和样品质量，通常90%以上的效率是可以接受的。
标准曲线上的每个点至少运行三次重复，对于低拷贝数输入，重复数应更高，以减少重复间的变化。Cq值晚的常见原因包括模板量不足、核酸分离次优、逆转录酶活性较差、RNA/cDNA降解以及PCR抑制等。确保实验空间的清洁，改善RNA处理行为，避免cDNA的多次冻融循环，以减少RNA降解。优化PCR仪参数，确保PCR反应的稳定性和准确性。通过排除上述因素，可提高定量PCR实验的准确性和可靠性。
请问:做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么?_百度...
△△Ct是荧光定量计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率。Ct=-1\/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN\/lg(1+Ex)，其中，n为扩增反应的循环次数，X₀为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。△Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；△△CT(...
PCR扩增引物3'端为什么不能有连续的3个C或3个G?
我随便说说，GC控制退火温度的能力比AT强很多，所以如果有三个G或者三个C，他们就有能在模板上对应的位置退火上去的可能，形成Taq酶的结合构象，从而扩增，因为5端不需要特异性结合照样能扩增。
PCR中的GC-clamps是什么意思
GC-clamp is a stretch of GC-rich sequences used in DGGE and TGGE. Also refers to a small number of G or C frequently used at the 3'-end of a PCR primer such that the 3'-end of a primer will form stable complex with the target DNA.在变性梯度凝胶电泳（denatured gradient...
高中生物选修三PCR技术中dCTP dATP dGTP dTTP 是什么物质?在PCR技术中...
就是DNA中的C,A,G,T,这些会在大学的生物化学中。只是它们这样些更加的完整
荧光定量PCR(qPCR)问题汇总
1. 背景校正程序用于测量定量PCR仪所用反应管和水的空白荧光强度。在10分钟内，仪器连续读取背景校正板的荧光强度，温度为60°C。软件计算平均值，用于从实验数据中扣除背景信号。推荐每三个月到半年校正一次，以防因污染、反应板、水纯度变化等因素影响信号强度。2. 实验可使用96孔光学反应板与膜、0....
关于PCR跑胶的问题,求回答
应该是因为你这个基因是CT杂合型的，Hin f I酶切的时候GAA[Y]T，Y=C或T，突变导致的吧。如果是CC型都是200bp以上，不会出现<200bp条带，如果是TT型则都是小于200bp，不会出现200bp以上条带吧，具体可能得查一下文献，以上回答根据百度文库：《分子生物学实验 PCR-RFLP检测NQO1 C609T多态性》...
PCR引物为什么必须不能有三个或者三个以上的G或C序列?
3‘末端有...NNGG或...NNGC序列的引物,末端GC碱基高的自由能 可以促进发夹结构的形成,还可能产生引物二聚体
primer5引物设计结果怎么看
cGC含量一般没什么特殊要求，40-60最好，如果不好设计，30-80也是可以的。d产物长度在100-150,80-200也可以，不要在50bp左右，那样和引物二聚体不好区分，超过200bp可能会影响PCR扩增。e软件给出的引物不能有发卡结构和超过3-4个碱基的匹配，特别是3`端不能有碱基匹配，那样更容易形成二聚体。f...
基础实验重新认识(5)——PCR相关
回答量:113 采纳率:100% 帮助的人:82.6万 我也去答题访问个人页 关注 展开全部 最早接触PCR是在做科创和本科毕业论文相关实验的时候,通过扩增野生型菌株和突变体菌株的某个基因,然后通过AS-PCR方法,设置温度梯度,筛选一对能够区别S和M菌株的特异性引物。 那个时候对PCR有一个大概的影响,其实在操作方面...
pcr实验室阳性对照在哪个区加
pcr实验室阳性对照在无菌实验区加。无菌实验区常见的划分为非洁净区的准备间及万级(2013新版GMP中C级)的阳性对照间、无检间、微生物限度检测间，其分设的人净房辅助间(一更洗手二更穿无菌、手消缓冲、洗衣、洁工位器洗存)。3个万级(2013新版GMP中C级)的阳性对照间、无菌检测问、微生物限度检测间...
芒茅参百： △△Ct = △Ct(试验样品) — △Ct(基准样品) △Ct(试验样品) = Ct(试验样品,目的基因) — Ct(试验样品,内参基因) △Ct(基准样品) = Ct(基准样品,目的基因) — Ct(基准样品,内参基因) 2 -△△Ct =2 -(-1.2)= 2.30
徐汇区13589929401： ct值是什么意思 深入解析PCR检测中的关键参数ct值? - ？
芒茅参百： 总之,ct值是PCR检测中的一个关键参数,可以用来判断样本中目标基因的数量.在实际应用中,需要对PCR反应的效率进行校准,以保证检测结果的准确性.颤裂PCR技术是一种基于DNA扩增的方隐洞仿法,可用于检测病原体、基因突变、...
徐汇区13589929401： 实时定量pcr的CT值在什么范围内算作合理 - ？
芒茅参百： 通常情况下,我们认定为15到35CT比较合理,超过35个CT那么就算它没有扩增了,如果15之前起峰,那么就是模板浓度太高所引起的 在荧光定量PCR技术中,有一个很重要的概念 —— Ct值.C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数
徐汇区13589929401： 求解荧光定量PCR检测报告 检验项目 ct ct 值:∝ ct值标准:≥40 根据标准的结论:阴性 参考结论:阴性 - ？
芒茅参百： 荧光定量PCR检测的是样本中核酸含量,CT值反映的是样本中的核酸含量的浓度. 1. 检测样本Ct值小于等于30.0,且曲线有明显的指数增长期,测定结果有效,可直接报告样本阳性; 2. 检测样本Ct值大于30.0且小于40时,重复一次,如果Ct值...
徐汇区13589929401： 实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? - ？
芒茅参百： 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...
徐汇区13589929401： 乙型肝炎病毒DNA荧光PCR定量检测 - ？
芒茅参百： Ct值是荧光定量PCR的一个指标,代表达到设定阈值所需要的循环数.一般Ct值越小定量值越高.通俗地将,这个检测结果的意义是:通过荧光定量PCR的方法检测血液中乙肝病毒DNA的量.仪器测得Ct值为18.20,根据Ct值与定量DNA之间的换算公式,计算出每毫升血中含有82450000(八千多万)个乙肝病毒DNA分子.也就是说每毫升血液中有八千多万个乙肝病毒.
徐汇区13589929401： 荧光定量PCR检测时的CT值怎么确定的 - ？
芒茅参百：[答案] 仪器配套软件会直接给出来一个CT值,也可自己调节
徐汇区13589929401： 肺癌ct图片的ct值是指什么 - ？
芒茅参百： 是测定人体某一局部组织或器官密度大小的一种计量单位,通常称亨氏单位(hounsfield unit ,HU) 在生物学中,是指PCR扩增过程中,荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的阈值所对应的循环次数. 实时荧光定量PCR方法利用循环阈值(Ct)的概念,在指数扩增的开始阶段进行检测,此时样品间的细小误差尚未放大,因此该Ct值具有极好的重复性.
徐汇区13589929401： 荧光定量pcr标准曲线横坐标和纵坐标分别表示啥意思 - ？
芒茅参百：[答案] 坐标分表为CT值和已知的标准品的拷贝数目.不限定哪个是横坐标,哪个是纵坐标.看各人习惯了. 如果没有标明,可以根据数值的大小看出来:CT 值一般在0-40之间,而拷贝数则为好几千,好几万的大数字
徐汇区13589929401： 我想问一下荧光定量PCR法用2 - △△Ct计算相对定量时结果的标准差是如何计算的 - ？
芒茅参百： 这个很简单啊.你做了一次实验,得到的样本做了一次PCR,得到了一次的相对来定量(设对照组为1).然后重新做实验,再做PCR,又得到一组,自这样至少重复3次,就有3组相对定量了.计算标准百差对照组的标准差:取对照组的平均CT值设为度1, 3次试验的CT值根据2-△△Ct计算相对量,可以算出对照组的标准差.
