脾细胞和骨髓瘤细胞融合后，如何筛选杂交瘤细胞？其原理是什么？
将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行诱导融合,培养液中融合后的细胞有杂交瘤细胞,还有两个B淋巴细胞的融合细胞和两个骨髓瘤细胞的融合细胞.
那是为了制备单克隆抗体
骨髓瘤细胞可以无限增殖,而B细胞可产生抗体
运用细胞融合得到杂交细胞,筛选出既可无限增殖,又可产生特定的抗体的杂交瘤细胞
单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。因此，单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。
细胞融合是一个随机的物理过程。在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬中，经融合后细胞将以多种形式出现。如融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在培养基中存活仅5～7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。 细胞DNA合成一般有两条途径。主途径是由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，叶酸作为重要的辅酶参与这一合成过程。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的催化作用合成DNA。细胞融合的选择培养基中有三种关键成分：次黄嘌呤（hypoxanthine，H）、氨甲蝶呤（aminopterin，A）和胸腺嘧啶核苷（thymidine，T），所以取三者的字头称为HAT培养基。氨甲蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻断瘤细胞利用正常途径合成DNA，而融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的HGPRT－细胞株，所以不能在该培养基中生长。只有融合细胞具有亲代双方的遗传性能，可在HAT培养基中长期存活与繁殖。 有限稀释与抗原特异性选择： 由于细胞融合是一个随机的过程，在已经融合的细胞中，有相当比例的无关细胞的融合体，需细筛选去除。筛选过程一般分为两步进行：一是融合细胞的抗体筛选，二是在此基础上进行的特异性抗体筛选。将融合的细胞进行充分稀释，使分配到培养板的每一孔中的细胞数在0至数个细胞之间（30％的孔为0才能保证每个孔中是单个细胞），培养后取上清以ELISA法选出抗体高分泌性的细胞；这一过程常被习惯地称作克隆化。将这些阳性细胞再进行克隆化，应用特异性抗原包被的ELISA找出针对目标抗原的抗体阳性细胞株，增殖后进行冻存、体外培养或动物腹腔接种。
记得采纳啊
我是高中的..我们接触到的就是这个.
这个是动物细胞融合技术那章的吧
放在选择性培养基上培养..杂交到的细胞有 3种 脾细胞和脾细胞， 脾细胞和瘤细胞， 瘤细胞和瘤细胞。3种 ..放在选择性培养基上连续培养.
比如说有什么脾细胞可以分泌出抗体那种抗原的物质...而其他细胞不能够抵抗..脾细胞和脾细胞 一般不会培养到50代..就会死了..放在选择性培养基上的瘤细胞和瘤细胞 没有相应的抗体 所以自动被消灭掉..脾细胞和瘤细胞..因为具有无限繁殖和有抗体产生 所以能够存活.存活下来的 就是合格的杂交瘤细胞..
一般筛选2次...
你回答就这么说好了 ..
把杂交瘤细胞放在特定的培养基上培养... .只有杂交瘤细胞才能在特定的培养基上繁殖..分裂
睡觉....希望可以帮到你
一楼误人子弟。第一次筛选是为了选出杂交瘤细胞。是根据B细胞和瘤细胞的DNA合成途径不同，筛选出杂交瘤细胞。第二次筛选是为了选出产生特定抗体的杂交瘤细胞，原理是抗原抗体特异性结合。具体请参考http://wenku.baidu.com/view/a9696ff3f90f76c661371ab9.html。
一楼所说的第一次筛选原理真是太。。。瘤细胞会被抗原杀死吗？童鞋这样的答案你也信了
继续培养
杂交瘤细胞能够无限增殖，其他细胞培养一定得代数九死亡了。
小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,得到杂交瘤细胞,经培养可产生单克隆抗...
【答案】：A 小鼠骨髓瘤细胞由小鼠B细胞转化而来，故考虑与B淋巴细胞融合，为获得较多的阳性克隆，一般须经免疫将有关的B淋巴细胞激活。
将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后,培养体系中细胞种类数目为
【答案】：E 细胞融合为一随机过程，融合后共有五种细胞存在，分别是脾-瘤融合细胞、脾细胞、脾-脾融合细胞、骨髓瘤细胞和瘤-瘤融合细胞。
制备单克隆抗体时,为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成...
动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细答哦大量增至，B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此将二者融合，产生杂交瘤细胞，...
科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,得到杂交瘤细胞,经培养可产生...
按题意，骨髓瘤细胞与某细胞融合后能够产生大量单克隆抗体，产生抗体是经过免疫后的B淋巴细胞的特点，所以与骨髓瘤细胞融合的细胞一定是经过免疫的B淋巴细胞。
将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融和的发明者
将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融和的发明者是克勒Kohler和米尔斯坦Milstein。根据查询官方资料显示：1975年克勒Kohler和米尔斯坦Milstein将小鼠骨髓瘤细胞和经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞相互融合，获得了杂交瘤细胞，并用以成功制备了单克隆抗体。
杂交瘤细胞是将小鼠的哪两种细胞融为一体?( )
【答案】：D 杂交瘤技术的原理是利用聚乙二醇（PEG）为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞（能分泌抗体）与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测、筛选和单个细胞培养（克隆化），最终获得既能产生所需单克隆抗体，...
为什么骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合会产生多种杂交细胞
B细胞在成熟的过程中，其编码抗体可变区的基因会发生随机重排。这是以后产生的B细胞有识别多种抗原识别能力的分子基础（不同B细胞识别不同种，一个B细胞识别一种）。所以不同的B细胞和骨髓瘤细胞融合后会产生多种杂交瘤细胞。通过筛选单个细胞，才会得到单克隆。
将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行诱导融合,培养液中融合后的细胞即为杂交...
因为在进行诱导时是在同一培养基中进行，所以诱导是不定向的，其产生的结果也是不定向的。所以会出现：B淋巴细胞与B淋巴细胞的融合，骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞的融合，B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合 这三种情况。所以得到的不一定是杂交瘤细胞。
制备单克隆抗体时,为什么选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞
确切的说应该是免疫后的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，因为单克隆抗体是为了得到理论上可以永久产生抗体的特殊细胞，免疫后的B淋巴细胞(浆细胞)虽然可以产生抗体，单它的寿命十分短暂，而骨髓瘤细胞具有癌细胞无限分裂的特性，因而二者结合后会得到不会死亡且可以一直产生抗体的特殊细胞.
(1)淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞,两种细胞膜也能“融合”在...
（1）淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能“融合”在一起，说明细胞膜具有一定的流动性；常用聚乙二醇或灭活病毒作为诱导剂，该细胞的特点是 具有无限增殖能力，能产生特异性抗体．（2）动物细胞培养用的是液体培养基，且其中含有动物血清；植物体细胞杂交过程中培养基是固体培养基，而...
夷秦盐酸： 放在选择性培养基上培养..杂交到的细胞有 3种 脾细胞和脾细胞, 脾细胞和瘤细胞, 瘤细胞和瘤细胞.3种 ..放在选择性培养基上连续培养. 比如说有什么脾细胞可以分泌出抗体那种抗原的物质...而其他细胞不能够抵抗..脾细胞和脾细胞 一般不会培养到50代..就会死了..放在选择性培养基上的瘤细胞和瘤细胞 没有相应的抗体 所以自动被消灭掉..脾细胞和瘤细胞..因为具有无限繁殖和有抗体产生 所以能够存活.存活下来的 就是合格的杂交瘤细胞.. 一般筛选2次...
清新县18263075867： 怎么筛选稳定的高表达的杂交瘤细胞? - ？
夷秦盐酸： 单克隆抗体技术中人工诱导小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合后,细胞将以多种形式出现,如脾细胞-瘤细胞、脾细胞-脾细胞、瘤细胞-瘤细胞、细胞多聚体、未融合的脾细胞和瘤细胞等,其中只有脾细胞-瘤细胞的融合体是有用的. 正常的脾细胞在培...
清新县18263075867： 杂交瘤细胞怎么筛选分离方法 - ？
夷秦盐酸： 利用选择性培养基hat筛选hat培养基,用次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸苷(T)配置,其中氨基蝶呤(A)能阻断dna合成的主要途径,而用于杂交的瘤细胞都是次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)或胸苷激酶(TK)活性缺陷细胞,而脾细胞中有这种酶,所以骨髓瘤细胞和瘤-瘤细胞会无法合成dna死去,而脾细胞和脾-脾都知道会无法无限长时间存活而死去,希望对你有帮助
清新县18263075867： 融合细胞需要用什么培养基进行筛选,并进行科隆化培养和什么 - ？
夷秦盐酸： 融合细胞需要用什么培养基进行筛选 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和b淋巴细胞融合后,要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞. 筛选得到的杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,就可获得足够数量的能分泌所需抗体的...
清新县18263075867： 单克隆抗体中得到了杂交瘤细胞后为什么还要进行杂交瘤细胞的筛选? - ？
夷秦盐酸： 同样是杂交瘤细胞,但不同效应B细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞产生的抗体是不同的,所以还要筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞.
清新县18263075867： 细胞融合问题请问两种细胞融合后,在筛选融合细胞是怎 - ？
夷秦盐酸： 选择性筛选的参照标准是自己定的,可以由融合前细胞的特性出发,找出其中之一的代谢特点.比如在筛选杂交瘤细胞时,B细胞是可以进行细胞外途径的DNA合成的,但是寿命很短.而骨髓瘤细胞是没有细胞外源合成DNA这一途径的.所以我们提供的培养基可以是阻断细胞内源合成DNA途径的选择培养基,这样,单一的瘤细胞会合成不了DNA而死亡,单一的B细胞在一段时间后,也死亡.剩下的只有需要的杂交瘤细胞了.这是经典的HAT选择培养基的原理.缺失基因的细胞,是不能正常代谢的,一般是会死亡的,但在某些特殊实验中,人工培养一些缺陷型细胞,以便于标记特征,便于筛选也是可以的.找出的代谢特点还可以包括,温度差异,PH差异等,很灵活,也很困难.
清新县18263075867： 简述人工制备单克隆抗体的方法? - ？
夷秦盐酸： 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体.通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤...
清新县18263075867： 杂交瘤细胞系的产生与筛选?？
夷秦盐酸： 脾B细胞+骨髓瘤细胞,加聚乙二醇(PEG)促进细胞融合, HAT培养基中培养(内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T)生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养. 细胞融合物中包含: 脾-脾融合细胞:不能生长,脾细胞不能体外培养. 骨-骨融合细胞:不能利用次黄嘌呤,但可通过第二途 径利用叶酸还原酶合成嘌呤.氨基蝶呤对叶酸还原酶有抑制作用,因此不能生长. 骨-脾融合细胞:在HAT中能生长,脾细胞可以利用次黄嘌呤,骨细胞提供细胞分裂功能.
清新县18263075867： 杂交瘤细胞筛选 - ？
夷秦盐酸： 利用选择性培养基筛选 选择性培养基:根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基.其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率.重组载体即含目的基因又有标记基因 利用标记基因的特性选出含有标记基因的载体,同时也就有了目的基因
清新县18263075867： 杂交瘤细胞系的产生与筛选? - ？
夷秦盐酸： 正 自杂交瘤技术问世以来,已在生物学、医学、兽医学等领域内推广应用,并利用杂交瘤技术成功地研究和揭示了许多疑难问题.在杂交瘤的筛选中,常用的有ELISA、间接荧光抗体及放射免疫等法,本文采用Dot-ELISA法进行猪伪狂犬病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的筛选试验,经反复试验证明,它是一种杂交瘤细胞系筛选试验有用的方法.
