如何保证革兰氏染色实验结果的可靠

作者&投稿:藩袁 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
如何设计实验,验证革兰氏染色实验结果的准确性?~

用已知菌种做对照,比如实验室中有大肠杆菌和金黄葡萄球菌;
在同一个玻片上分三块区域,两边分别涂大肠杆菌和金黄葡萄球菌,中间区域涂待测菌;
革兰氏染色后,观察两边,大肠杆菌红色,金黄葡萄球菌紫色,中间的大肠杆菌红色;
待测菌若与大肠杆菌一样颜色,就是阴性菌,是紫色就是阳性菌。

用已知菌种做对照

比如实验室中有大肠杆菌和金黄葡萄球菌

在同一个玻片上分三块区域,两边分别涂大肠杆菌和金黄葡萄球菌

中间区域涂待测菌

革兰氏染色后,观察两边,大肠杆菌红色,金黄葡萄球菌紫色,中间的大肠杆菌红色,待测菌若与大肠杆菌一样颜色,就是阴性菌,是紫色就是阳性菌。

保证革兰氏染色实验结果可靠的方法:

  1. 革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响,难以严格规定。

  2. 染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后,应吸去玻片上的残水,以免染色液被稀释而影响染色效果。

  3. 选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h,E.coli培养24h。若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。

  4. 脱色时间不要过长。

革兰氏染色步骤: 

(1)涂片:涂片方法与简单染色涂片相同。 

(2)晾干:与简单染色法相同。 

(3)固定,与简单染色法相同 

(4)结晶紫色染色:将玻片置于废液缸玻片搁架上,加适量(以盖满细菌涂面)的结晶紫染色液染色1分钟。 

(5)水洗:倾去染色液,用水小心地冲洗。 

(6)媒染:滴加卢哥氏碘液,媒染1min。

(7)水洗:用水洗去碘液。 

(8)脱色:将玻片倾斜,连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色,立即水洗。 

(9)复染:滴加蕃红复染5min。 

(10)水洗:用水洗去涂片上的蕃红染色液。 

(11)晾干:将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。 

(12)镜检:镜检时先用低倍,再用高倍,最后用油镜观察,并判断菌体的革兰氏染色反应性。

(13)实验完毕后的处理: 

①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净,a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。



脱色时间不要过长,晃几下就可以。
同时还可以做3%氢氧化钾实验辅助验证!!


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吉利区13085041708: 当你对一株未知菌进行革兰氏染色发时,怎样才能确定你的染色结果可靠 -
烛昌赛尼: 1 尽量采用革兰氏复染法,确定菌株为单一菌群; 2 注意假阳性、假阴性——假阳性主要是由于脱色不完全,可能是由于涂片过厚,或者是结晶紫染色过度,导致脱色不完全.假阴性可能是因为细胞固定过度,造成细胞壁通透性的改变,而出现假阴性结果;另外,细胞培养时间太长,可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶,也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果. 3 观察时注意色差. 对比对照染片.可靠结果的产生,需要精细而熟练的染色操作,并特别注意2中提到可能导致假阳性和假阴性的步骤.此外,在菌株量较充足的情况下,尽量做3-4组平行染色组.祝你实验成功.

吉利区13085041708: 当你对未知菌进行革兰氏染色时,怎样保证操作正确,结果可靠? -
烛昌赛尼: 对待检菌进行革兰氏染色时,同时用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为阴性菌和阳性菌的对照

吉利区13085041708: 如何判断革兰氏染色的正确性?当你对未知菌进行革兰氏染色时,怎样保证操作正确,结果可靠? -
烛昌赛尼:[答案] 首先要确保你的染色液的有效性.可以用 已知的细菌进行对照(金黄色葡萄球菌为G+菌,大肠杆菌为G-菌).在确保无误后,标准操作则可以确保实验的正确性.如果,由于操作问题,如初染时间过长,脱色时间过长等原因怕出现假阳性...

吉利区13085041708: 当你对未知菌体进行革兰氏染色时,怎样确保操作正确,结果可靠? -
烛昌赛尼:[答案] 细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去. 因此可把细菌分为两大类,颜色退去的叫做革兰氏阳性菌,否则为革兰氏阴性菌. 为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等...

吉利区13085041708: 如何保证革兰氏染色的可靠性 -
烛昌赛尼: 找事先已知的且和未知菌形态明显不同的G+和G-分别做混合涂片,当和G+做时G+正确显紫色和当和G-做时G-正确显红色,看这个未知菌分别显什么色,若一致,则可确定此菌为G+或G-.再回过头单做此未知菌的革兰氏染色,显现正确那就证明此染色技术操作正确.也可在开始做已知的与此菌形态明显不同的G+和G-三者混合涂片,一下知晓此未知菌的阴阳性,再回过头来染色.

吉利区13085041708: 当你对未知细菌进行革兰染色时,怎样保证操作准确,结果可靠 -
烛昌赛尼:[答案] 最好还是先根据细菌形态进行初步的鉴定,然后按照革兰氏染色步骤操作. 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是: 1)涂片固定. 2)草酸铵结晶紫染1分钟. 3)自来水冲洗. 4)加碘液覆盖涂面染1分钟. 5)水洗...

吉利区13085041708: 怎样保证对未知菌革兰染色的正确性? -
烛昌赛尼: 一般设置一个对照 即取一株生长健壮,且已知其革兰氏染色反应的菌株,与待检测的菌株一同染色,染色时间、染液量一致.染色后一同做镜鉴. 一般G+选枯草芽孢杆菌,G-取大肠杆菌

吉利区13085041708: 对于一株未知菌株进行革兰氏染色时,怎样确定你的染色技术正确,结果可靠 -
烛昌赛尼:[答案] 革兰氏染色必须同时在同一个载玻片上做上阳性对照和阴性对照. 阳性一般选择枯草芽孢杆菌,阴性一般选择大肠杆菌,因为比较常见. 但即便如此,也经常会出现同一块菌斑一半阳性一半阴性的情况,所以革兰氏染色很不靠谱.

吉利区13085041708: 1 要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作?关键在哪几步?为什么?2现有一株未知的细菌 ,请鉴定其革兰氏染色阳性还是阴性?如何保证你的染色... -
烛昌赛尼:[答案] 操作步骤1.涂片将培养14—16小时的枯草芽孢杆菌和培养24小时的大肠杆菌分别作涂片(注意涂片切不可过于浓厚),干燥、固定.固定时通过火焰1—2次即可,不可过热,以载玻片不烫手为宜.2.染色(1)初染 加草酸铵结晶紫...

吉利区13085041708: 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时,怎样能确证你的染色技术操作正确,结果可靠? -
烛昌赛尼: 首先,想想自己做的步骤有没有错误,做的规范不,有没有用错物品等等. 第二,重复做次试验. 如果在正确的条件下重复做这试验,得到的结果一样的话,证明结果可靠

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